資源簡介

土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與記數(shù)
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br/>1． 學(xué)習(xí)固體培養(yǎng)基的制備方法
2． 學(xué)習(xí)土壤微生物的分離的方法
3． 學(xué)習(xí)細(xì)菌平板記數(shù)的方法
實(shí)驗(yàn)意義：
農(nóng)業(yè)中所使用的化學(xué)配料絕大多數(shù)都能夠被植物直接吸收，而尿素在土壤中則需要先經(jīng)微生物的分解作用才能夠被植物吸收。通過對土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離過程，可以讓學(xué)生對微生物有更深課的了解和直觀的認(rèn)識，培養(yǎng)學(xué)生學(xué)習(xí)微生物學(xué)的初級實(shí)驗(yàn)技能，還可以引發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)微生物學(xué)的學(xué)習(xí)興趣。
實(shí)驗(yàn)原理：
將細(xì)菌接種到以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在這種情況下,其他微生物因缺少氮素而不能生長,只有分解尿素的微生物或者自生固氮微生物才能正常生長繁殖。經(jīng)稀釋的單個細(xì)菌在固體培養(yǎng)基會形成菌落，菌落的數(shù)量可以反映稀釋液中細(xì)菌的濃度。
實(shí)驗(yàn)過程：
1． 土樣的采集
在長期使用尿素的農(nóng)田內(nèi)采集3-8cm深的土樣200g用信封或牛皮紙袋帶回實(shí)驗(yàn)室。
2． 培養(yǎng)基的制備
培養(yǎng)基配方
KH2PO4
1．4g
Na2HPO4
2．1g
MgSO4· 7H2O
0．2g
葡萄糖
10．0g
尿素
1．0g
瓊脂
15．0g
將上述前5種物質(zhì)溶解后，用容量瓶定容至1000ml。然后倒入大搪瓷燒杯中，并向其中加入瓊脂15．0g，用電爐加熱至瓊脂完全溶解。在培養(yǎng)基半冷卻時(shí)分裝至經(jīng)高壓滅菌的培養(yǎng)皿中。冷卻備用。
3． 樣品的稀釋
取10g土樣容于90g水中，充分搖勻，然后在此溶液中取菌液1ml加無菌水9ml中繼續(xù)稀釋。以此方式繼續(xù)將菌液稀釋成一定濃度梯度。將稀釋10000倍，100000倍及1000000倍的菌液各取0.1ml分別加入到事先加入培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動培養(yǎng)皿使菌液分布均勻。每種濃度重復(fù)3次。 分別標(biāo)記為104，1#;104，2#;104，3#;105,4#;105,5#;105,6#;106,7#;106,8#;106,9#;再取一個未接種的培養(yǎng)皿標(biāo)記為:空白，10#。
4． 培養(yǎng)
將1#--11#培養(yǎng)皿標(biāo)記后室溫培養(yǎng)48～72小時(shí)。
5． 記數(shù)
記錄各濃度（菌液稀釋倍數(shù)）下每培養(yǎng)皿內(nèi)菌落的數(shù)目，計(jì)算3個培養(yǎng)皿內(nèi)的平均值，進(jìn)而計(jì)算出每克土壤中所含的細(xì)菌的數(shù)目,填寫下表。
稀釋倍數(shù)
編號
菌落數(shù)
平均值
備注
104
1
2
3
105
4
5
6
106
7
8
9
空白
10

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