資源簡介

(共8張PPT)
第3章核心素養整合
2019版新教材高中生物
選擇性必修3精品學案
專題 限制酶的選擇方法
選擇限制酶時要考慮目的基因兩端的限制酶切割位點、質粒上的限制酶切割位點及是否破壞目的基因和標記基因,從而確定限制酶的種類。限制酶切割載體的切割位點并不是任意的,切點所處位置必須在載體需要的基因片段之外,避免載體因目的基因的插入而失活或影響鑒定和篩選。必須保證載體上至少有一個完整的標記基因,以便于檢測。
1.根據目的基因兩端的限制酶切割位點確定限制酶的種類
(1)應選擇切割位點位于目的基因
兩端的限制酶,如上圖可選擇PstⅠ。
(2)不能選擇切割位點位于目的基
因內部的限制酶,如上圖不能選擇SmaⅠ。
(3)為避免目的基因和質粒的自身環化和隨意連接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和質粒,如上圖也可選擇用PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶,但要確保質粒上也有這兩種酶的切割位點,且標記基因內部沒有這兩種酶的切割位點。
2.根據質粒的特點確定限制酶的種類
(1)所選限制酶要與切割目的基因的
限制酶一致,以確保具有相同的末端。
(2)質粒作為載體必須具備標記基因等,因此所選擇的限制酶應不能切割質粒上的所有標記基因,即至少要保留一個標記基因,用于重組DNA的鑒定和篩選,如上圖中限制酶SmaⅠ會破壞標記基因。
【典型例題】下表中列出了幾種限制酶的識別序列及其切割位點,圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的切割位點。下列相關說法錯誤的是(　　)
A.一個圖1所示的質粒分子經
SmaⅠ切割后,含有4個游離的
磷酸基團
B.用圖1所示的質粒和圖2所示的目的基因構建重組質粒,不能使用SmaⅠ切割
C.圖2中為防止酶切后含目的基因的DNA片段自身環化,不能使用EcoR Ⅰ
D.為了獲取重組質粒,最好用BamH Ⅰ 和Hind Ⅲ同時切割質粒和外源DNA
答案:A
解析:圖1所示質粒分子經SmaⅠ切割后形成2個平末端,根據DNA分子的兩條鏈反向平行的特點可知,切割后應含有2個游離的磷酸基團,A項錯誤。用SmaⅠ切割會破壞目的基因和質粒中的標記基因,B項正確。如果用EcoRⅠ處理目的基因,由于兩端含有相同的黏性末端,則可能發生自身環化,用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時切割質粒和外源DNA即可解決這一問題,C、D兩項正確。

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