資源簡介

中小學教育資源及組卷應(yīng)用平臺
高中生物一輪復習學案
第33講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用
考點一　微生物的實驗室培養(yǎng)
1．培養(yǎng)基
(1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。
(2)種類
①按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。
②按功能可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。
(3)成分：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
2．無菌技術(shù)
3．大腸桿菌的純化培養(yǎng)
(1)制備固體培養(yǎng)基的步驟
→→→→
(2)純化大腸桿菌
①平板劃線法
②稀釋涂布平板法
將菌液進行一系列的梯度稀釋后，將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基表面，進行培養(yǎng)
a．系列稀釋操作
b．涂布平板操作
(3)菌種的保存
①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。
②對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。
[基礎(chǔ)診斷]
1．消毒是指使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(包括芽孢和孢子)。(選修1　P15正文)(×)
2．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后用高壓蒸汽滅菌法滅菌，空的培養(yǎng)皿則可用干熱滅菌法滅菌。(選修1　P16正文)(×)
3．制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基時，將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯。(選修1　P17正文)(√)
4．平板劃線法操作中，第二次以及其后的劃線操作，總是從上次劃線的末端開始劃線。(選修1　P18平板劃線操作)(√)【出處：21教育名師】
5．平板劃線法操作中，劃線結(jié)束后，不需要把接種環(huán)再一次灼燒滅菌。(選修1　P18平板劃線操作)(×)
[深度拓展]
1．(選修1　P18討論1)為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？
提示：操作的第一步灼燒接種 ( http: / / www.21cnjy.com )環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少；在劃線操作結(jié)束時，灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。
2．(選修1　P19涂布平板操作)在稀釋涂布平板法中，判斷操作成功的標準是什么？
提示：有兩個或兩個以上培養(yǎng)基菌落數(shù)目在30～300之間，則說明稀釋操作比較成功，能夠進行菌落計數(shù)。
1．常見物品的消毒或滅菌方法
(1)消毒方法及適用對象
(2)滅菌方法及適用對象
2．平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較
eq \a\vs4\al(圍繞培養(yǎng)基的成分和配制過程，考查生命觀念)
1．(2022·山東濟寧模擬)下表表示某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是(　　)
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊紅 美藍 蒸餾水
含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A.從用途看，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基
B．培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨
C．該培養(yǎng)基沒有提供維生素等營養(yǎng)
D．該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到合適的pH后就可以接種使用
B　[從用途看，該培養(yǎng)基中有伊 ( http: / / www.21cnjy.com )紅和美藍，屬于鑒別培養(yǎng)基，A錯誤；微生物的營養(yǎng)物質(zhì)主要包括氮源、碳源、水和無機鹽等，培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨，B正確；蛋白胨可以提供氮源和維生素等，C錯誤；該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到合適的pH經(jīng)滅菌后才可以接種使用，D錯誤。]21*cnjy*com
2．(2021·金牛區(qū)月考)如表是微生物培養(yǎng)基的成分。下列有關(guān)說法錯誤的是(　　)
編號 ① ② ③ ④ ⑤
成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量(g) 0.4 4.0 0.5 0.5 100 mL
A.此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物
B．此表中的營養(yǎng)成分共有三類，即水、無機鹽、氮源
C．若除去①，此培養(yǎng)基可培養(yǎng)硝化細菌
D．培養(yǎng)基中若加入氨基酸，則它可充當碳源、氮源
C　[此培養(yǎng)基中不含碳源，適合用來培養(yǎng) ( http: / / www.21cnjy.com )自養(yǎng)型微生物，A正確；此表中的營養(yǎng)成分共有三類，即水、無機鹽、氮源，B正確；硝化細菌能進行化能合成作用，但不能固氮，因此若除去①，此培養(yǎng)基不能培養(yǎng)硝化細菌，C錯誤；培養(yǎng)基中若加入氨基酸，則它可充當碳源、氮源，D正確。]
　自養(yǎng)型與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基的區(qū)別(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機鹽提供。(2)異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供，氮源也主要是由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源
eq \a\vs4\al(圍繞消毒和滅菌，考查科學思維能力)
3．(2018·全國卷Ⅱ)在生產(chǎn)、生活和科研實踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。
回答下列問題：
(1)在實驗室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器具________(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。www-2-1-cnjy-com
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點是________。
(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能________。在照射前，適量噴灑________，可強化消毒效果。21教育名師原創(chuàng)作品
(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過________(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。
(5)某同學在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓 ( http: / / www.21cnjy.com )力達到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度，最可能的原因是____________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：　(1)干熱滅菌是 ( http: / / www.21cnjy.com )指將物品放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170 ℃條件下加熱1～2 h。耐高溫、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等，可采用干熱滅菌的方法。(2)巴氏消毒法是在70～75 ℃條件下煮30 min或在80 ℃條件下煮15 min，可以殺死牛奶中的微生物，并且使牛奶的營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。(3)接種室、接種箱或超凈工作臺在使用前，可以用紫外線照射30 min，紫外線能破壞微生物的DNA結(jié)構(gòu)，以殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以強化消毒效果。(4)自來水通常是用氯氣進行消毒的。(5)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度，最可能的原因是鍋內(nèi)原有的冷空氣沒有排盡。
答案：　(1)可以　(2)在達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少　(3)破壞DNA結(jié)構(gòu)　消毒液　(4)氯氣　(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡21教育網(wǎng)
eq \a\vs4\al(圍繞微生物的純培養(yǎng)技術(shù)，考查實驗探究能力)
4．(2020·新課標Ⅰ)某種物質(zhì) ( http: / / www.21cnjy.com )S(一種含有C、H、N的有機物)難以降解，會對環(huán)境造成污染，只有某些細菌能降解S。研究人員按照如圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細菌菌株。實驗過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機鹽、水和S，乙的組分為無機鹽、水、S和Y。
回答下列問題：
(1)實驗時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用_ ( http: / / www.21cnjy.com )_______________的方法進行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是________。甲、乙培養(yǎng)基均屬于________培養(yǎng)基。
(2)實驗中初步估測搖瓶M中 ( http: / / www.21cnjy.com )細菌細胞數(shù)為2×107個/mL，若要在每個平板上涂布100 μL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋________倍。21世紀教育網(wǎng)版權(quán)所有
(3)在步驟⑤的篩選過程中， ( http: / / www.21cnjy.com )發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解量反而下降，其原因可能是___________________________________________________________
_________________________________________________________(答出1點即可)。
(4)若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)，請寫出主要實驗步驟：___________________
________________________________________________________________________。
(5)上述實驗中，甲、乙兩種培養(yǎng)基 ( http: / / www.21cnjy.com )所含有的組分雖然不同，但都能為細菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即_______________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：　(1)培養(yǎng)基一般使用高壓蒸汽滅菌 ( http: / / www.21cnjy.com )，微生物的分離和篩選一般使用選擇培養(yǎng)基，物質(zhì)Y是瓊脂，甲、乙培養(yǎng)基均屬于以S為唯一碳源和氮源的選擇培養(yǎng)基。(2)利用稀釋涂布平板法對細菌進行計數(shù)，要保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200，假設(shè)稀釋倍數(shù)為a，在每個平板上涂布100 μL(0.1 mL)稀釋后的菌液，則有(2×107/a)×0.1≤200，則稀釋倍數(shù)a≥104。(3)在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，可能會導致細菌細胞由于滲透作用失水過多，導致活性喪失。(4)若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù)，主要實驗步驟有淤泥中取樣，然后進行梯度稀釋，微生物的培養(yǎng)與觀察，計數(shù)。(5)培養(yǎng)基的主要成分包括水、無機鹽、碳源、氮源。【版權(quán)所有：21教育】
答案：　(1)高壓蒸汽滅菌　瓊脂　 選擇　( ( http: / / www.21cnjy.com )2)104　(3)細菌細胞由于滲透作用失水過多，喪失活性(S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長)　(4)淤泥中取樣，然后進行梯度稀釋，微生物的培養(yǎng)與觀察，計數(shù)(取淤泥加入無菌水，涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數(shù))　(5)水、無機鹽、碳源、氮源
　平板劃線操作中每次灼燒的目的項目第一次操作每次劃線之前劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免微生物污染環(huán)境和感染操作者
考點二　土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)
1．實驗原理
2．實驗流程
3．統(tǒng)計細菌數(shù)目的方法
(1)顯微鏡直接計數(shù)法
(2)間接計數(shù)法——活菌計數(shù)法
原理：當樣品的稀釋度足夠高時 ( http: / / www.21cnjy.com )，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。
4．實驗結(jié)果分析與評價
[基礎(chǔ)診斷]
1．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，可以直接被農(nóng)作物吸收。(選修1　P21課題背景)(×)
2．除了活菌計數(shù)法外，顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法。(選修1　P22正文)(√)
3．在細菌分解尿素的化學反應(yīng)中，細菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，氨會使培養(yǎng)基的pH降低。(選修1　P26正文)(×)21cnjy.com
[深度拓展]
1．(選修1　P22、P23正文)閱讀教材“設(shè)置對照”部分相關(guān)內(nèi)容，回答下面問題：
(1)你能通過設(shè)置對照，幫助A同學排除兩個可能影響實驗結(jié)果的因素嗎？
(2)稀釋涂布平板時，每個稀釋濃度涂布三個平板，這一操作遵循了實驗的什么原則？該操作的目的是什么？設(shè)置空白對照的目的是什么？21·cn·jy·com
提示：(1)有兩種方案：一種是可以讓其他同 ( http: / / www.21cnjy.com )學用與A同學一樣的土樣進行實驗，如果與A同學結(jié)果一致，則A無誤；如果不同，則A的操作有問題。另一種方案是，將A同學的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下培養(yǎng)，作為空白對照，以判斷A同學的培養(yǎng)基是否污染。
(2)重復原則。重復的目的是排除偶然因素的影響，空白對照的目的是排除非測試因素的影響。
2．(選修1　P26正文)在分離尿素分解菌的實驗中，為何對分離的菌種還需要作進一步的鑒定？
提示：在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上，有些微生物可利用其他微生物代謝產(chǎn)物進行繁殖，因此在選擇培養(yǎng)基上生長的不一定是尿素分解菌。【來源：21cnj*y.co*m】
1．比較兩種微生物計數(shù)方法
— 間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法) 直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法)
原理 當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌 利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量
公式 每克樣品中的菌落數(shù)＝ ×M；C：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V：涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù) 每毫升原液所含細菌數(shù)：每小格內(nèi)平均細菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)
缺點 當兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 不能區(qū)分細胞死活
結(jié)果 比實際值偏小 比實際值偏大
2.微生物的分離與計數(shù)實驗中對照組和重復組的設(shè)置及作用
(1)兩種對照組的設(shè)置及作用
①判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”，需將未接種的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)。
②判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”，需設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進行對比得出結(jié)論。【來源：21·世紀·教育·網(wǎng)】
(2)重復組的設(shè)置及作用
為排除偶然因素對實驗結(jié)果的 ( http: / / www.21cnjy.com )干擾，在每一稀釋度下宜設(shè)置3個平板作重復組，選擇菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大的三個平板，用“平均值”代入計數(shù)公式予以計算菌落數(shù)。2-1-c-n-j-y
eq \a\vs4\al(圍繞微生物的選擇培養(yǎng)，考查歸納與概括的科學思維)
1．(2021·山東高考) ( http: / / www.21cnjy.com )解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍色，乙菌菌落周圍不變色。下列說法錯誤的是(　　)
A．甲菌屬于解脂菌
B．實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源
C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比
D．該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力
B　[由題干信息可知，甲菌菌落周圍呈 ( http: / / www.21cnjy.com )現(xiàn)深藍色，這說明甲菌可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，屬于解脂菌，A正確；由題干信息可知，乙菌菌落周圍不變色，這說明乙菌落不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌落又能夠在培養(yǎng)基上生存，故該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯誤；可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比，這樣實驗對比時更加直觀，C正確；可以利用該平板來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，進行對比觀察時，可以觀察菌落周圍深藍色圈的大小，從而判斷解脂菌分泌脂肪酶的能力，D正確。]
2．(2019·全國卷Ⅰ ( http: / / www.21cnjy.com ))已知一種有機物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細菌(目標菌)。
Ⅰ號培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X(5 g/L)。
Ⅱ號培養(yǎng)基：氯化鈉(5 g/L)，硝酸銨(3 g/L)，其他無機鹽(適量)，X(15 g/L)。
Ⅲ號培養(yǎng)基：氯化鈉(5 g/L)，硝酸銨(3 g/L)，其他無機鹽(適量)，X(45 g/L)。
回答下列問題。
(1)在Ⅰ號培養(yǎng)基中，為微生物提供氮 ( http: / / www.21cnjy.com )源的是______________。Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機物是________________________。
(2)若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號液體 ( http: / / www.21cnjy.com )培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，不能降解X的細菌比例會________________，其原因是______________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)Ⅱ號培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成 ( http: / / www.21cnjy.com )固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標菌并對菌落進行計數(shù)，接種時，應(yīng)采用的方法是___________________________________。
(4)假設(shè)從Ⅲ號培養(yǎng)基中得到了能高 ( http: / / www.21cnjy.com )效降解X的細菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供____________和____________。
解析：　本題考查微生物的培養(yǎng)、分離 ( http: / / www.21cnjy.com )和微生物代謝等知識，意在考查考生的理解能力和識記能力。(1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，牛肉膏、蛋白胨為微生物提供了氮源，而Ⅱ號、Ⅲ號培養(yǎng)基中除X外的其他物質(zhì)均不含碳，所以能為微生物提供碳源的有機物是X。(2)因為Ⅱ號培養(yǎng)基中碳源只有X，相當于是選擇培養(yǎng)基，只有能降解X的細菌才能增殖，而不能降解X的細菌因缺乏碳源不能增殖。(3)要對菌落進行計數(shù)，應(yīng)采用稀釋涂布平板法進行接種。(4)在有氧條件下，丙酮酸參與細菌的有氧呼吸，可以為該菌的生長提供能量和合成其他物質(zhì)的原料。
答案：　(1)牛肉膏、蛋白胨　X ( http: / / www.21cnjy.com )　(2)下降　不能降解X的細菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的細菌能夠增殖　(3)稀釋涂布平板法　(4)能量　合成其他物質(zhì)的原料
eq \a\vs4\al(圍繞微生物的數(shù)量測定，考查生命觀念)
3．(2021·城固縣月考)二硝基甲苯遇堿變 ( http: / / www.21cnjy.com )紅，如圖表示從被二硝基甲苯污染的土壤中分離具有降解二硝基甲苯能力的光合細菌——球形紅細菌的過程。請回答下列問題：
(1)將10 g土壤樣品加入裝有無菌水 ( http: / / www.21cnjy.com )的三角瓶中制備土壤浸出液。②過程的目的是____________________；③過程所用的接種方法為______________法。
(2)在5個培養(yǎng)基平板上分別 ( http: / / www.21cnjy.com )接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191，則每毫升土壤樣液中的細菌數(shù)量約為__________________個。用此方法測定的球形紅細菌數(shù)量比實際活菌數(shù)量少，原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)圖中甲、乙培養(yǎng)基需 ( http: / / www.21cnjy.com )置于有光條件下培養(yǎng)，主要原因是_________________。挑出純化獲得的菌落接種在含二硝基甲苯的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)結(jié)束后，可通過_____________________來判斷菌種降解二硝基甲苯的能力。
解析：　(1)圖中②稀釋涂 ( http: / / www.21cnjy.com )布平板接種的目的是獲得單個菌落；由圖中菌落的分布可知，③過程所用的接種方法為平板劃線法。(2)在5個培養(yǎng)基平板上分別接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191，一般取菌落數(shù)在30～300之間的平板計數(shù)，則每毫升土壤樣液中的細菌數(shù)量為×105÷0.1＝1.75×108(個)。用此方法測定的球形紅細菌數(shù)量比實際活菌數(shù)量少，原因是一個菌落可以由一個或多個球形紅細菌形成。(3)由于球形紅細菌進行光合作用需要光，因此圖中甲、乙培養(yǎng)基需置于有光條件下培養(yǎng)。挑出純化獲得的菌落接種在含二硝基甲苯的培養(yǎng)基中，由于二硝基甲苯遇堿變紅，因此培養(yǎng)結(jié)束后，可通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH至堿性后觀察培養(yǎng)基顏色來判斷菌種降解二硝基甲苯的能力。
答案：　(1)獲得單個菌 ( http: / / www.21cnjy.com )落　平板劃線　(2)1.75×108　一個菌落可以由一個或多個球形紅細菌形成　(3)球形紅細菌進行光合作用需要光　調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH至堿性后觀察培養(yǎng)基顏色
考點三　分解纖維素的微生物的分離
1．纖維素酶
(1)組成：纖維素酶是一種復合酶，至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。
(2)作用：
纖維素纖維二糖葡萄糖
2．纖維素分解菌的篩選
(1)方法：剛果紅染色法。
(2)原理：
―→紅色復合物
(3)實驗流程
[基礎(chǔ)診斷]
1．在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培 ( http: / / www.21cnjy.com )養(yǎng)基之前，可以通過選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。(選修1　P29資料二)(√)
2．纖維素酶的測定方法，一般是采用對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進行定量的測定。(選修1　P30正文)(√)
[深度拓展]
(選修1　P29旁欄)根據(jù)教材纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的配方，回答下列問題：
(1)選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的配方分別是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么？兩種培養(yǎng)基的物理狀態(tài)與其功能有什么關(guān)系？
提示：根據(jù)瓊脂的有無判斷，選擇培 ( http: / / www.21cnjy.com )養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基中微生物更能與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，有利于其繁殖，從而增大微生物濃度；鑒別培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，只有在固體培養(yǎng)基上才能長出菌落，進而根據(jù)菌落判斷微生物的種類。
(2)你能否設(shè)計一個對照實驗，說明選擇培養(yǎng)的作用？
提示：設(shè)置普通培養(yǎng)基(如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)為對照，若普通培養(yǎng)基菌落數(shù)目多，則說明選擇培養(yǎng)基有選擇作用。
(3)該過程中一定要進行選擇培養(yǎng)嗎？選擇培養(yǎng)的目的是什么？
提示：不一定。選擇培養(yǎng)的目的是增加樣品中所需菌種的濃度。
1．微生物的篩選方法
2．微生物的鑒別方法
eq \a\vs4\al(掌握分解纖維素的微生物的分離原理和方法)
1．(2022·泰州模擬)某興趣 ( http: / / www.21cnjy.com )小組用從不同環(huán)境中采集的土壤等進行了“分解纖維素的微生物的分離”實驗，實驗過程為：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，實驗結(jié)果見下表1。
表1　不同土壤微生物對纖維素的分解
組別 1 2 3
樣品 松針腐葉花盆土 表層草地土 菌料
目的菌落類型 細菌、真菌 細菌 霉菌為主
透明圈直徑 ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋＋
注：“＋”越多直徑越大。
(1)上述實驗過程中“選擇培養(yǎng)”的目的是____________________________________。
(2)與30 ℃相比，37 ℃培養(yǎng)時霉 ( http: / / www.21cnjy.com )菌類纖維素分解菌生長迅速，菌絲會________其他菌落，對后續(xù)菌種的分離造成困擾，因此采用30 ℃培養(yǎng)為佳。
(3)興趣小組在鑒別菌種時嘗試了兩種方案：A ( http: / / www.21cnjy.com ).先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅染色；B.直接在加入剛果紅的鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：A方案在漂洗多余剛果紅的過程中，易出現(xiàn)菌落浮起被帶走的現(xiàn)象，從而造成____________，故選方案B。由于剛果紅在高溫下容易被分解，應(yīng)在培養(yǎng)基滅菌______(填“前”或“后”)加入。
(4)有小組成員根據(jù)表1結(jié)果中的 ( http: / / www.21cnjy.com )________________________，認為菌料中的目的菌分解纖維素的能力最強，其他成員對此觀點提出異議。興趣小組繼續(xù)對三組樣品進行透明圈直徑、菌落直徑和酶活力的測定，實驗結(jié)果如表2。
表2　不同H/C值纖維素分解菌酶活性的比較
組別 H(透明圈直徑)(單位：cm) C(菌落直徑)(單位：cm) H/C值 酶活力(U/mL)
1 2.06 0.48 4.3 1.7
2 1.68 0.30 5.6 2.4
3 2.62 0.41 6.4 2.9
你認為將______________________________作為判斷纖維素分解菌分解能力大小的依據(jù)更合理，其大小與酶活力呈______相關(guān)。www.21-cn-jy.com
(5)興趣小組欲對培養(yǎng)液中的纖 ( http: / / www.21cnjy.com )維素分解菌進行計數(shù)，具體做法是：先在培養(yǎng)基上加入若干質(zhì)量較輕的小球，然后在平板上滴加一定體積的培養(yǎng)液，蓋上培養(yǎng)皿蓋后左右搖晃。試分析這樣做的目的是________________。2·1·c·n·j·y
解析：　(1)根據(jù)以上分析可知，選擇培養(yǎng)的目 ( http: / / www.21cnjy.com )的是增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需的微生物。(2)根據(jù)題意，與30 ℃相比，37 ℃培養(yǎng)時霉菌類纖維素分解菌生長迅速，導致菌絲會覆蓋其他菌落，對后續(xù)菌種的分離造成困擾，因此采用30 ℃培養(yǎng)為佳。(3)分析兩種方案可知，A方案先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅染色，A方案中在用氯化鈉溶液漂洗多余剛果紅的過程中，易出現(xiàn)菌落浮起被帶走，從而造成菌落的混雜的現(xiàn)象，故選B方案，即直接在加入剛果紅的鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物。由于剛果紅在高溫下容易被分解，培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，因此應(yīng)在培養(yǎng)基滅菌后添加剛果紅。(4)根據(jù)以上分析可知，在纖維素分解菌的培養(yǎng)基中加入剛果紅，剛果紅與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。分析表1結(jié)果可知，表1中的組別3中透明圈直徑最大，小組成員認為菌料中的目的菌分解纖維素的能力最強，但是其他成員對此觀點提出異議。興趣小組繼續(xù)對三組樣品進行透明圈直徑、菌落直徑和酶活力的測定，分析表2中的數(shù)據(jù)可知，隨著值的增大，酶活力增強，因此將透明圈與菌落直徑之比(值)作為判斷纖維素分解菌分解能力大小的依據(jù)更合理，其大小與酶活力呈正相關(guān)。(5)根據(jù)題意可知，該題測定纖維素分解菌的方法類似血球計數(shù)板計數(shù)法，具體做法是：先在培養(yǎng)基上加入若干質(zhì)量較輕的小球，然后在平板上滴加一定體積的培養(yǎng)液，蓋上培養(yǎng)皿蓋后左右搖晃，這樣使得菌液分布均勻，計數(shù)較為準確。
答案：　(1)增加纖維素分解 ( http: / / www.21cnjy.com )菌的濃度　(2)覆蓋　(3)菌落的混雜　后　(4)組別3中透明圈直徑最大　透明圈與菌落直徑之比(值)　正　(5)使菌液均勻分布
eq \a\vs4\al(學會分解纖維素的微生物的分離原理方法的拓展應(yīng)用)
2．(2020·聊城一模 ( http: / / www.21cnjy.com ))“紙片擴散法”測定病原菌對抗生素敏感性的實驗是在某病原菌均勻分布的平板上，鋪設(shè)含有不同種抗生素的紙片后進行培養(yǎng)。下圖示為某測定實驗的結(jié)果，其中抑菌圈是在紙片周圍出現(xiàn)的透明區(qū)域。下列敘述正確的是(　　)
A．在圖示固體培養(yǎng)基上可用平板劃線法接種病原菌
B．形成的抑菌圈較小的原因可能是微生物對藥物較敏感
C．未出現(xiàn)抑菌圈可能是病原菌與抗生素接觸后發(fā)生抗性變異
D．“紙片擴散法”實驗中的自變量是不同種的抗生素
D　[根據(jù)題干“某病原菌均勻 ( http: / / www.21cnjy.com )分布的平板上”可知，圖示固體培養(yǎng)基上采用的接種方法是稀釋涂布平板法，A錯誤；形成的抑菌圈較小的原因可能是微生物對藥物敏感程度較低，B錯誤；未出現(xiàn)抑菌圈可能是病原菌對該抗生素不敏感，C錯誤；根據(jù)題干“鋪設(shè)含有不同種抗生素的紙片后進行培養(yǎng)”判斷，“紙片擴散法”實驗中的自變量是不同種的抗生素，D正確。]
3．(2019·北京高考)篩選淀粉分解菌需 ( http: / / www.21cnjy.com )使用以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)后，若細菌能分解淀粉，培養(yǎng)平板經(jīng)稀碘液處理，會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈(如圖)，實驗結(jié)果見下表。
菌種 菌落直徑：C(mm) 透明圈直徑：H(mm) H/C
細菌Ⅰ 5.1 11.2 2.2
細菌Ⅱ 8.1 13.0 1.6
有關(guān)本實驗的敘述，錯誤的是(　　)
A．培養(yǎng)基除淀粉外還含有氮源等其他營養(yǎng)物質(zhì)
B．篩選分解淀粉的細菌時，菌液應(yīng)稀釋后涂布
C．以上兩種細菌均不能將淀粉酶分泌至細胞外
D．H/C值反映了兩種細菌分解淀粉能力的差異
C　[微生物的培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源 ( http: / / www.21cnjy.com )和無機鹽等，A正確。篩選分解淀粉的細菌時，實驗流程為取樣→梯度稀釋→樣品涂布到鑒別分解淀粉的細菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，B正確。由題意可知，淀粉被分解后經(jīng)稀碘液處理才能出現(xiàn)透明圈，淀粉分解需要淀粉酶的催化，圖中兩種細菌都出現(xiàn)了以菌落為中心的透明圈，說明以上兩種細菌均能將淀粉酶分泌到細胞外發(fā)揮作用，C錯誤。透明圈是細菌分解淀粉得到的，H表示透明圈直徑，C表示菌落直徑，因此H/C值可以反映兩種細菌分解淀粉能力的差異，即H/C值越大，細菌分解淀粉的能力越強，D正確。]
1．(2019·高考全國 ( http: / / www.21cnjy.com )卷Ⅱ)物質(zhì)W是一種含氮有機物，會污染土壤。W在培養(yǎng)基中達到一定量時培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解W的細菌(目標菌)。回答下列問題。
(1)要從土壤中分離目標菌，所用選擇培養(yǎng)基中的氮源應(yīng)該是________________。
(2)在從土壤中分離目標菌的 ( http: / / www.21cnjy.com )過程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上甲、乙兩種細菌都能生長并形成菌落(如圖所示)。如果要得到目標菌，應(yīng)該選擇________菌落進一步純化，選擇的依據(jù)是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)土壤中的某些微生物可以利用空氣 ( http: / / www.21cnjy.com )中的氮氣作為氮源。若要設(shè)計實驗進一步確定甲、乙菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源，請簡要寫出實驗思路、預期結(jié)果和結(jié)論，即________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)該小組將人工合成的一段D ( http: / / www.21cnjy.com )NA轉(zhuǎn)入大腸桿菌，使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶(酶E)。為了比較酶E與天然酶降解W能力的差異，該小組擬進行如下實驗，請完善相關(guān)內(nèi)容。
①在含有一定濃度W的固體培養(yǎng)基上，A處滴加含有酶E的緩沖液，B處滴加含有相同濃度天然酶的緩沖液，C處滴加________，三處滴加量相同。
②一段時間后，測量透明圈的直徑。若C處 ( http: / / www.21cnjy.com )沒有出現(xiàn)透明圈，說明____________________；若A、B處形成的透明圈直徑大小相近，說明____________________________。21·世紀*教育網(wǎng)
解析：　本題考查了土壤中目標菌的篩選等，意 ( http: / / www.21cnjy.com )在考查考生的理解能力。(1)要從土壤中分離出能降解含氮有機物W的目標菌，所用選擇培養(yǎng)基應(yīng)以該特定物質(zhì)W為氮源。(2)圖示信息顯示，在乙菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明乙菌能降解W，若要得到目標菌，應(yīng)該選擇乙菌落進一步純化。(3)若要通過設(shè)計實驗確定甲、乙兩種細菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源，需將甲、乙菌分別接種在無氮源培養(yǎng)基上，若某細菌能生長，則說明該細菌能利用空氣中的氮氣作為氮源。(4)①實驗應(yīng)遵循單一變量原則，故C處應(yīng)滴加緩沖液。②一段時間后，測量透明圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透明圈，說明緩沖液不能降解W；若A、B處形成的透明圈大小相近，說明酶E與天然酶降解W的能力相近。
答案：　(1)W　(2)乙　乙菌 ( http: / / www.21cnjy.com )落周圍出現(xiàn)透明圈，說明乙菌能降解W　(3)將甲、乙菌分別接種在無氮源培養(yǎng)基上，若細菌能生長，則說明該細菌能利用空氣中的氮氣作為氮源　(4)①緩沖液　②緩沖液不能降解W　酶E與天然酶降解W的能力相近
2．(2018·新課標Ⅰ)將馬鈴薯去皮切塊， ( http: / / www.21cnjy.com )加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培養(yǎng)基。
回答下列問題：
(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制________的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。
(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯 ( http: / / www.21cnjy.com )浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有____________(答出兩點即可)。氮源進入細胞后，可參與合成的生物大分子有____________(答出兩點即可)。
(3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉 ( http: / / www.21cnjy.com )取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是________，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是___________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果：
甲同學涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133；
乙同學涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。
有人認為這兩位同學的結(jié)果中，乙同學的結(jié)果可信度低，其原因是____________________
________________________________________________________________________。
解析：　(1)鏈霉素是抗生素，可抑制 ( http: / / www.21cnjy.com )細菌生長，故在M培養(yǎng)基中加入鏈霉素作為選擇培養(yǎng)基，可篩選出真菌。(2)培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分一般包括碳源、氮源、水和無機鹽等。細胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白質(zhì)、核酸等，故所加入的氮源可參與以上物質(zhì)的合成。(3)能產(chǎn)生淀粉酶的微生物可將淀粉分解成麥芽糖，淀粉遇碘變藍，向加有淀粉的培養(yǎng)基中加入碘液后培養(yǎng)基呈現(xiàn)藍色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍的淀粉被水解，形成透明圈，可根據(jù)透明圈的大小判斷產(chǎn)生淀粉酶的多少。(4)統(tǒng)計菌落數(shù)時一般選擇菌落數(shù)在30～300個的平板，甲同學統(tǒng)計的3個平板中的菌落數(shù)在正常范圍內(nèi)且差距不大，比較準確；乙同學統(tǒng)計的3個平板中，1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復性差。
答案：　(1)細菌　選擇　(2)碳源、無 ( http: / / www.21cnjy.com )機鹽　蛋白質(zhì)、核酸　(3)碘液　淀粉遇碘液顯藍色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈　(4)乙同學的結(jié)果中，1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復性差
析個性 第1題本題考查篩選培養(yǎng)基的配制和使用 ( http: / / www.21cnjy.com )，針對不同要求的目標菌種，選擇不同物質(zhì)配制不同篩選作用的培養(yǎng)基。第2題考查了微生物的實驗室培養(yǎng)，包括培養(yǎng)基的成分、選擇培養(yǎng)基配制的原則
找共性 兩個題目都通過實驗的形式，重點考查微生物的分離與培養(yǎng)，考查學生的識記能力和判斷能力，以及運用所學知識綜合分析問題和解決問題的能力
　1．從混合樣品中獲得某種微生物的方法通常有兩種(1)可利用該分離對象對某一營養(yǎng)物 ( http: / / www.21cnjy.com )質(zhì)有一“嗜好”的原理，專門在培養(yǎng)基中加入或不加該營養(yǎng)物質(zhì)，從而使它成為一種選擇培養(yǎng)基(如在含高濃度NaCl的培養(yǎng)基上分離金黃色葡萄糖球菌，在不含N的培養(yǎng)基上分離圓褐固氮菌)；或根據(jù)分離對象對pH、溫度和氧氣濃度的喜好，改變培養(yǎng)環(huán)境的理化性質(zhì)，使環(huán)境條件最適宜該微生物的生存，從而達到分離的目的。(2)可利用該分離對象對某種 ( http: / / www.21cnjy.com )抑菌物質(zhì)的抗性，在混合培養(yǎng)物中加入該抑制物，經(jīng)培養(yǎng)后，原來占優(yōu)勢的微生物生長受抑制，而分離對象卻可乘機大大增殖，使之在數(shù)量上占優(yōu)勢(如在加入青霉素的培養(yǎng)基上分離真核微生物)。2．培養(yǎng)基的成分：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。3．微生物培養(yǎng)的計數(shù)過程中，為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。
1．(2019·全國卷Ⅲ)回答下列與細菌培養(yǎng)相關(guān)的問題。
(1)在細菌培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中能同時提供碳源 ( http: / / www.21cnjy.com )、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，其原因是________________________________。硝化細菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上________(填“能夠”或“不能”)生長，原因是________________________________________。21*cnjy*com
(2)用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板________(填“倒置”或“正置”)。
(3)單個細菌在平板上會 ( http: / / www.21cnjy.com )形成菌落，研究人員通常可根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是_________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過________處理，這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。
解析：　本題考查微生物的培養(yǎng)等，意在考查考 ( http: / / www.21cnjy.com )生的理解能力。(1)細菌培養(yǎng)時常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，牛肉膏能提供碳源、氮源、磷酸鹽、維生素，蛋白胨能提供碳源、氮源、維生素，而葡萄糖不能提供氮源，NaNO3不能為微生物提供碳源。不同細菌生長繁殖所需要的最適pH是不同的，應(yīng)該根據(jù)培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH。硝化細菌是化能自養(yǎng)型細菌，可以空氣中的CO2為碳源，因此在沒有碳源的培養(yǎng)基上能夠生長。(2)在平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)細菌時，一般需將平板倒置，這樣可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基。(3)不同種類的細菌所形成的菌落，在大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等方面具有一定的特征，不同種細菌在一定培養(yǎng)條件下表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。(4)使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需進行滅菌處理，以免污染環(huán)境。
答案：　(1)蛋白胨　不同細菌生長繁殖所 ( http: / / www.21cnjy.com )需的最適pH不同　能夠　硝化細菌可以利用空氣中的CO2作為碳源　(2)倒置　(3)在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征　(4)滅菌
2．(2017·江蘇高考)苯酚及其 ( http: / / www.21cnjy.com )衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴重危害。小明同學準備依據(jù)如圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題：
(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有____________。
(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量 ( http: / / www.21cnjy.com )應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸________，以達到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應(yīng)進一步____________，以便于菌落計數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加________。
(3)下圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中____________(填圖中序號)區(qū)域更易獲得單菌落。
(4)采用比色測定法(使用苯酚顯色劑)檢測 ( http: / / www.21cnjy.com )降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進行顯色反應(yīng)，下表中1～5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為____________。
管號 1 2 3 4 5 6
苯酚濃度(mg/L) 1
如果廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約 ( http: / / www.21cnjy.com )有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋________(填序號：①5　②10　③20)倍后，再進行比色。
解析：　(1)富集培養(yǎng)基中 ( http: / / www.21cnjy.com )蛋白胨、苯酚都是含碳的有機物，可作為碳源。(2)欲富集酚降解菌，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加，應(yīng)逐漸增加培養(yǎng)基中苯酚的含量；若接種培養(yǎng)后平板上菌落過于密集，則應(yīng)進一步稀釋后再進行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計數(shù)與分離；平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除含有水、營養(yǎng)物質(zhì)(碳源、氮源、無機鹽等)外，還需添加瓊脂作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線法接種時，最后的劃線區(qū)域(③)中，菌體的密度較小，容易獲得單菌落。(4)因系列濃度梯度中6號比色管中苯酚濃度為1 mg/L，故1～5號比色管中的苯酚濃度應(yīng)分別為0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L；根據(jù)題意，廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于0～1 mg/L，需將殘留液稀釋20倍左右。
答案：　　(1)蛋白胨、苯酚　(2)增加　稀釋涂布　凝固劑　(3)③　(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8　③
一、網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
二、要語必記
1．培養(yǎng)基及無菌技術(shù)
(1)微生物培養(yǎng)基的成分一般包括水、無機鹽、碳源、氮源及生長因子等。
(2)制備固體培養(yǎng)基的步驟包括計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板等。
(3)消毒指使用較為溫和的物理或化學 ( http: / / www.21cnjy.com )方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
2．微生物的分離與培養(yǎng)
(1)純化微生物常用的接種方法 ( http: / / www.21cnjy.com )有平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法和稀釋涂布平板法都能獲得單細胞菌落。平板劃線法不能對微生物計數(shù)，而稀釋涂布平板法能對微生物計數(shù)。
(2)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。
3．微生物的利用
(1)纖維素酶是一種復合酶，它至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。
(2)尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都需使用選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。
(3)鑒定尿素分解菌的方法是在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，鑒定纖維素分解菌的方法為剛果紅染色法。
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