資源簡介

中小學(xué)教育資源及組卷應(yīng)用平臺
第33講　微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用
[課程導(dǎo)學(xué)]
內(nèi)容要求 3.1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是發(fā)酵工程的基礎(chǔ)。
與舊教材對比 改：①大腸桿菌純化培養(yǎng)改為酵母菌的純培養(yǎng)；②分解纖維素微生物的分離改為課后習(xí)題呈現(xiàn)。刪：①菌種的保藏；②制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟。
考點(diǎn)一　微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)
1．培養(yǎng)基的配制
　是否含有凝固劑(如瓊脂)是區(qū)分固體培養(yǎng)基的唯一標(biāo)準(zhǔn)，含凝固劑的為固體培養(yǎng)基。
2．無菌技術(shù)
(1)目的：獲得純凈的微生物培養(yǎng)物。
(2)關(guān)鍵：防止雜菌污染。
(3)常用方法：滅菌和消毒。
(4)無菌技術(shù)的主要方法及適用對象[連一連]
　滅菌的效果比消毒要好。活體生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能滅菌。
3．微生物的純培養(yǎng)
　區(qū)別培養(yǎng)物、純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)
(1)所有的培養(yǎng)基中都要加入瓊脂。(　　)
(2)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落。(　　)
(3)培養(yǎng)不同微生物的培養(yǎng)基成分完全一樣。(　　)
(4)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。(　　)
(5)滅菌相比消毒對微生物的殺滅更徹底。(　　)
(6)倒平板后，待平板冷凝之后需將其倒置。(　　)
(7)在實驗室中，全部培養(yǎng)工作結(jié)束后，所有使用過的器皿、廢棄物等都必須先經(jīng)過高壓滅菌后再洗滌或傾倒。(　　)
答案：(1)×　(2)×　(3)×　(4)√　(5)√　(6)√
(7)√
1．(選擇性必修3 P10旁欄思考)培養(yǎng)基中加入氮源的原因是____________________________________________________________________
________________________。
提示：培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的
2．(選擇性必修3 P10相關(guān)信息)生物消毒法是指利用生物或其________除去環(huán)境中的部分微生物的方法。
提示：代謝物
3．(選擇性必修3 P12探究·實踐改編)為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？_________________________________
________________________________。
提示：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較大，將平板倒置，可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染
4．(選擇性必修3 P13結(jié)果分析)如果在未接種的培養(yǎng)基表面有菌落，說明____________________。
提示：培養(yǎng)基被雜菌污染
1．培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的確定方法
(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機(jī)物，碳源可由大氣中的CO 2提供，氮源可由含氮無機(jī)鹽提供。
(2)異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物，即碳源必須由含碳有機(jī)物提供，氮源也主要由有機(jī)物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機(jī)氮源。
(3)幾種微生物的營養(yǎng)和能量來源
微生物 碳源 氮源 能源
藍(lán)細(xì)菌 CO2 NH、NO等 光能
硝化細(xì)菌 CO2 NH3 NH3的氧化
根瘤菌 糖類等有機(jī)物 N2 有機(jī)物
酵母菌 糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物 蛋白質(zhì)等 有機(jī)物
2.消毒和滅菌的比較
項目 條件 結(jié)果 常用方法
消毒 較為溫和的物理、化學(xué)或生物方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物　 煮沸消毒法
巴氏消毒法
化學(xué)藥物消毒法
紫外線消毒法
滅菌 強(qiáng)烈的理化方法 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼燒滅菌法
干熱滅菌法
濕熱滅菌法
3.平板劃線法操作的注意事項
(1)灼燒接種環(huán)之后，要待其冷卻后才能蘸取菌液，以免溫度太高殺死菌種。
(2)在作第二次及以后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣才能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而減少，最終得到由單個微生物繁殖而來的菌落。
(3)劃線時最后一次的劃線不要與第一次的劃線相連。
(4)劃線力度要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。
(5)平板劃線操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的
項目 第一次劃線前灼燒 每次劃線前灼燒 劃線結(jié)束后灼燒
目的 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 殺死上一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種均來自上一次劃線的末端 殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免菌種污染環(huán)境和感染操作者
突破1 無菌操作技術(shù)
核心素養(yǎng) 生命觀念
1．(2019·高考江蘇卷)下列關(guān)于微生物實驗操作的敘述，錯誤的是(　　)
A．培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌
B．接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒
C．接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)污染
D．菌種分離和菌落計數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基
解析：選A。接種環(huán)、涂布器需進(jìn)行灼燒滅菌，A錯誤。
2．培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是(　　)
①化學(xué)消毒法　②灼燒滅菌　③干熱滅菌　④紫外線消毒法　⑤濕熱滅菌　⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④⑥　　　　 B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤
解析：選A。培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行濕熱滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，需進(jìn)行干熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達(dá)到迅速徹底的滅菌效果；實驗操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用酒精擦拭；對空氣可用紫外線消毒法來消毒；為了不破壞牛奶的營養(yǎng)成分，可采用巴氏消毒法對其進(jìn)行消毒。
常見物品的消毒或滅菌方法
(1)消毒方法及適用對象
(2)滅菌方法及適用對象
　
突破2 微生物的實驗室培養(yǎng)
核心素養(yǎng) 科學(xué)探究
3．(2022·山東濟(jì)寧模擬)下表表示某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是(　　)
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊紅 美藍(lán) 蒸餾水
含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A.從用途看，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基
B．培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨
C．該培養(yǎng)基沒有提供維生素等營養(yǎng)
D．該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到合適的pH后就可以接種使用
答案：B
4．(2022·山東濟(jì)南檢測)平板涂布是分離菌種常用的方法，下列相關(guān)敘述不恰當(dāng)?shù)氖?　　)
A．固體培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)冷卻至50 ℃左右時倒平板
B．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長
C．平板涂布分離到的單菌落需進(jìn)一步劃線純化
D．稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計數(shù)
解析：選B。倒好的平板需要冷卻后使用，且不宜久存，以免表面干燥，影響接種后微生物的生長，B錯誤。
[事實概述類]
1．[2018·全國Ⅱ，T37(2)]牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是______________________________
_________________________________________。
答案：在達(dá)到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少
2．[2018·全國Ⅲ，T37(1)]分離培養(yǎng)酵母菌通常使用____________(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麥芽汁瓊脂”)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基應(yīng)采用________滅菌法滅菌。若將酵母菌劃線接種在平板上，培養(yǎng)一段時間后可觀察到菌落，菌落的含義是_________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案：麥芽汁瓊脂　高壓蒸汽　由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體
3．[2014·全國Ⅱ，T39(2)]某小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌，操作時，接種環(huán)通過________滅菌。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是________________________________________
____________________________。
答案：灼燒　將聚集的菌種逐步稀釋以便獲得單菌落
[原因分析類]
4．在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？________，原因是________________________
________________________________________________________________________。
答案：不能　空氣中的微生物可能在皿蓋和皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，從而造成污染
5．培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻至50 ℃左右時才能倒平板的原因是_____________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案：倒平板時高于50 ℃會燙手，低于50 ℃時若不及時操作，瓊脂會凝固
6．采用下表配方配制的培養(yǎng)液分離果膠酶產(chǎn)生菌時，該表X處的成分應(yīng)是________(填“葡萄糖”或“果膠”)，不選另一種成分的原因是_____________________________________________________________________
______________________________________________________________。
K2HPO4 MgSO4 NaNO3 FeSO4 X H2O
0.1 g 0.5 g 3 g 0.01 g 2 g 加至1 L
答案：果膠　大多數(shù)微生物以葡萄糖作為碳源，不具有選擇作用
[開放思維類]
7．經(jīng)多次規(guī)范操作、重復(fù)實驗，平板上均出現(xiàn)________________的菌落，初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，但鮮牛奶供應(yīng)商仍認(rèn)為此菌并非鮮牛奶所攜帶，因此，要對本操作進(jìn)行完善，完善的方案是________________________
________________________________________________________________________。
答案：金黃色葡萄球菌　為增強(qiáng)實驗結(jié)論的嚴(yán)謹(jǐn)性，應(yīng)增加空白對照組
考點(diǎn)二　微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)
1．選擇培養(yǎng)基
(1)概念：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。
(2)原理：人為提供有利于目的菌生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度和pH等)，同時抑制或阻止其他微生物的生長。
(3)實例：分離分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基
①設(shè)計原理：分解尿素的細(xì)菌能產(chǎn)生脲酶，催化尿素分解產(chǎn)生NH3，為其生長提供氮源。
②配方設(shè)計：以尿素為唯一氮源。
　能在選擇培養(yǎng)基上生長的不一定是所需要的目的菌。原則上選擇培養(yǎng)基只能允許特定種類的微生物生長，但實際上，微生物的培養(yǎng)是一個非常復(fù)雜的問題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝物進(jìn)行生長繁殖，因此能在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物不一定都是所需的微生物，還需進(jìn)一步的鑒定。
2．微生物的選擇培養(yǎng)(稀釋涂布平板法)
(1)土壤取樣：鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。
(4)培養(yǎng)觀察
①待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2 d。
②在涂布有合適濃度菌液在平板上就可以觀察到分離的單菌落。
3．微生物的數(shù)量測定
　關(guān)于“選擇菌落數(shù)在30～300的平板”的兩個理解誤區(qū)
①只得到1個菌落數(shù)在30～300的平板：不符合實驗的重復(fù)原則，易受到偶然因素的影響。
②得到3個或3個以上菌落數(shù)在30～300的平板：也不一定正確，如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在30～300之間，但由于34與另外兩個平板上的菌落數(shù)差異較大，應(yīng)找出原因并重新實驗。
(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。(　　)
(2)平板劃線法接種時，每一次劃線前都要挑取菌種。(　　)
(3)需要將一個未接種的培養(yǎng)基放在相同的條件下培養(yǎng)，以檢驗培養(yǎng)基的滅菌是否合格。(　　)
(4)菌液的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面會獲得單菌落。(　　)
(5)適于平板計數(shù)的菌落數(shù)范圍為40～300。(　　)
(6)用稀釋涂布平板法計數(shù)時，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少。(　　)
(7)用稀釋涂布平板法計數(shù)時，平板上的一個菌落就是一個細(xì)菌。(　　)
答案：(1)√　(2)×　(3)√　(4)√　(5)×　(6)√
(7)×
1．(選擇性必修3 P18相關(guān)信息)血細(xì)胞計數(shù)板常用于相對________的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計數(shù)；細(xì)菌計數(shù)板常用于相對________的細(xì)菌等的計數(shù)。
提示：較大　較小
2．(選擇性必修3 P18正文)統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)的要求是____________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
提示：統(tǒng)計3個菌落數(shù)在30～300之間的平板，計算菌落數(shù)的平均值
3．(選擇性必修3 P19)“測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用1×104、1×105和1×106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。”測定土壤中不同的微生物(如真菌、放線菌)使用的稀釋度一樣嗎？舉例說明。________________________________________________________________________。
提示：不一樣。測定真菌一般用1×102、1×103和1×104倍稀釋；測定放線菌一般用1×103、1×104和1×105倍稀釋
4．(選擇性必修3 P20拓展應(yīng)用T2)在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌的原因是_______________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
提示：由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對較高，從這種土樣中獲得目的微生物的概率高于普通環(huán)境
1．選擇培養(yǎng)基的制作方法
2．兩種純化細(xì)菌的方法的比較
項目 平板劃線法 稀釋涂布平板法
純化原理 通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面 將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，稀釋度足夠高時，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞
主要步驟 平板劃線操作 系列稀釋操作和涂布平板操作
接種工具 接種環(huán) 涂布器
平板示意圖
3.微生物的分離與計數(shù)實驗中對照組和重復(fù)組的設(shè)置及作用
(1)兩種對照組的設(shè)置及作用
①判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”，需將未接種的培養(yǎng)基同時進(jìn)行培養(yǎng)。
②判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”，需設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目，進(jìn)行對比得出結(jié)論。
(2)重復(fù)組的設(shè)置及作用：為排除偶然因素對實驗結(jié)果的干擾，在每一稀釋度下宜設(shè)置至少3個平板作重復(fù)組，選擇菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大的三個平板，用“平均值”代入計數(shù)公式予以計算菌落數(shù)。
突破1 微生物的選擇培養(yǎng)
核心素養(yǎng) 生命觀念
1．(不定項)(2022·山東臨沂期末)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，但若不經(jīng)細(xì)菌的分解，就不能更好地被植物利用。下列有關(guān)土壤中尿素分解菌的分離和培養(yǎng)的敘述，正確的是(　　)
A．培養(yǎng)基中以尿素作為唯一氮源，該培養(yǎng)基是鑒別培養(yǎng)基
B．微生物培養(yǎng)常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法
C．細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高
D．若上述培養(yǎng)基被雜菌污染，則培養(yǎng)基上會有多種雜菌菌落出現(xiàn)
答案：BC
2．某研究小組從黃色短桿菌(能合成L 亮氨酸)中篩選L 亮氨酸缺陷型(不能合成L 亮氨酸)突變菌株，實驗流程如下圖所示。回答下列問題：
(1)培養(yǎng)基滅菌常用的方法是____________。
(2)過程①的接種方法是____________。過程②接種時，先將滅菌后的金絲絨與培養(yǎng)皿A中的菌落接觸一次，然后像蓋印章一樣將菌種連續(xù)接種到培養(yǎng)皿B和C的培養(yǎng)基表面，這種接種方法便于將來比較培養(yǎng)皿B、C中菌落的差異，原因是____________________。
(3)培養(yǎng)皿A、B、C中的培養(yǎng)基都要使用固體培養(yǎng)基，原因是________________________。若培養(yǎng)皿B的培養(yǎng)基中含有L 亮氨酸，培養(yǎng)皿C的培養(yǎng)基中不含L 亮氨酸，培養(yǎng)一段時間后菌落生長情況如圖所示，研究人員應(yīng)該從培養(yǎng)皿________(填“B”或“C”)中選取目的菌落。
答案：(1)高壓蒸汽滅菌法　(2)稀釋涂布平板法　培養(yǎng)皿B、C中的菌種接種位置相同　(3)便于觀察菌落特征和分離目的菌株　B
突破2 微生物的分離與計數(shù)
核心素養(yǎng) 科學(xué)探究
3．尿素容易保存，是目前使用量較大的一種化學(xué)氮肥，尿素分子并不能直接被農(nóng)作物吸收，只有被尿素分解菌分解成氨之后才能被植物利用。下圖是從土壤中分離、計數(shù)尿素分解菌的過程，有關(guān)分析正確的是(　　)
A．若②過程稀釋了10倍，則乙錐形瓶里盛有9 mL無菌水
B．③的接種方法可用平板劃線法或稀釋涂布平板法
C．a(chǎn)、b、c培養(yǎng)基可以用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
D．若①②過程稀釋了10倍，a、b、c培養(yǎng)基上的菌落數(shù)依次為57、58、56個，則10 g土樣中的尿素分解菌數(shù)量為5.7×109個
解析：選D。②過程加入了2 mL菌液，若稀釋了10倍，則乙錐形瓶里應(yīng)盛有18 mL無菌水，A錯誤；平板劃線法不能計數(shù)，③的接種方法不能用平板劃線法，B錯誤；牛肉膏和蛋白胨均可提供氮源，a、b、c培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源，C錯誤；若a、b、c培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)為57個，10 g土樣加入90 mL無菌水相當(dāng)于稀釋了10倍，則由題圖可知，共稀釋了1×106倍，每克樣品中的菌株數(shù)＝(57÷0.1)×106＝5.7×108(個)，所以10 g土樣可含有尿素分解菌5.7×109個，D正確。
4．(不定項)(2022·山東棗莊一模)地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸，其中40%～60%能被土壤中的某些微生物分解利用，這是因為它們能夠產(chǎn)生纖維素酶。研究者從牛的瘤胃中篩選產(chǎn)生纖維素酶的纖維素分解菌，其篩選過程如圖1所示。將丙中的菌懸液轉(zhuǎn)接于含有稻草作碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用剛果紅處理(剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈)，看到如圖2所示情況，下列有關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A．②過程是用涂布器取乙中的菌液并均勻地涂布在Ⅰ號培養(yǎng)基表面
B．甲、乙試管中的液體都屬于液體培養(yǎng)基，主要作用是稀釋菌種
C．Ⅰ號、Ⅱ號培養(yǎng)基都屬于固體培養(yǎng)基，配制時先滅菌后調(diào)節(jié)pH
D．可挑取圖2中周圍出現(xiàn)透明圈的菌落，用平板劃線法繼續(xù)純化
解析：選ABC。可用移液槍取乙中的菌液，不可用涂布器取乙中的菌液，A錯誤；液體培養(yǎng)基的作用是讓菌體增殖，而不是稀釋菌種，甲、乙試管中的液體都是樣品稀釋液，不是液體培養(yǎng)基，B錯誤；配制固體培養(yǎng)基時需要先調(diào)pH，再滅菌，C錯誤；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，若菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明該菌可將纖維素分解，可挑取該菌落用平板劃線法繼續(xù)純化，D正確。
[原因分析類]
1．[2015·江蘇，T31(2)]在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是________________________________________________。
答案：培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果
2．[2017·全國Ⅰ，T37(2)]為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇________________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是________________________________________
_________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案：尿素　其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用
3．在實驗中，研究者每隔24 h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止_____________________________________
________________________________________________________________________。
答案：因培養(yǎng)時間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目
4．對細(xì)菌計數(shù)時往往會產(chǎn)生實驗誤差，稀釋涂布平板法計數(shù)的值比實際值________，原因是________________________________________________
________________________________________________________________________；
顯微計數(shù)法計數(shù)的結(jié)果比實際值________，原因是_____________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案：偏小　當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落　偏大　顯微鏡下無法區(qū)分細(xì)胞的死活，計數(shù)時包括了死細(xì)胞
5．我國的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是每1 000 mL飲用水中大腸桿菌不得超過3個，在培養(yǎng)基上每1 000 mL合格飲用水形成的菌落數(shù)卻大于了3個，原因是_____________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案：飲用水中還有其他細(xì)菌，形成的菌落數(shù)遠(yuǎn)大于3個
6．接種結(jié)束后，將一個未接種的培養(yǎng)基和一個接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)的目的是________，未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長很關(guān)鍵。如果有菌落生長，說明______________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案：形成對照　培養(yǎng)基滅菌不徹底(或培養(yǎng)基被污染了或需要重新制備)
7．某同學(xué)計劃統(tǒng)計污水池中目的菌的總數(shù)，他選用1×104、1×105、1×106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板劃線，每種稀釋液都設(shè)置了3個培養(yǎng)皿，從設(shè)計實驗的角度看，還應(yīng)設(shè)置的一組對照實驗是________________________，此對照實驗的目的是________________________。
答案：未接種的空白培養(yǎng)基　檢驗培養(yǎng)基滅菌是否合格
8．[2018·全國Ⅰ，T37(4)]甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果：
甲同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133；乙同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是______________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案：乙同學(xué)的結(jié)果中，1個平板的計數(shù)結(jié)果與另外2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差
9．已知“改良MC瓊脂培養(yǎng)基”中含有碳酸鈣，遇酸溶解而使培養(yǎng)基變得透明；“孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基”中含氯霉素，可抑制絕大多數(shù)細(xì)菌的生長。對乳酸菌進(jìn)行計數(shù)時應(yīng)選擇上述__________________________培養(yǎng)基，用________________________法接種，挑選出具有透明圈的菌落進(jìn)行計數(shù)。如果每個平板均接種了0.1 mL樣品并培養(yǎng)，接種的4個平板菌落數(shù)分別是210、230、470、190，則樣品中菌種的數(shù)量為________個/mL。平板劃線法一般不用于活菌計數(shù)的原因是_______________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案：改良MC瓊脂　稀釋涂布平板　2 100　得到的菌落多數(shù)不是單一菌落，菌落數(shù)遠(yuǎn)小于活菌數(shù)
1．(2021·高考北京卷)人體皮膚表面存在著多種微生物，某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作不正確的是(　　)
A．對配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌
B．使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣
C．用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布
D．觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷
解析：選C。為避免雜菌污染干擾，需對配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A正確；葡萄球菌需從人體皮膚的微生物中分離，為避免雜菌污染，需要使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣，B正確；棉拭子上的微生物需要用平板劃線法在培養(yǎng)基上進(jìn)行接種，C錯誤；根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別，D正確。
2．(2020·浙江7月選考改編)下列關(guān)于微生物培養(yǎng)及利用的敘述，錯誤的是(　　)
A．利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B．配制培養(yǎng)基時應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pH
C．酵母菌不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒
D．適宜濃度的酒精可使醋酸菌活化
解析：選A。利用尿素固體培養(yǎng)基篩選尿素分解菌時，尿素固體培養(yǎng)基并不直接殺死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素為氮源，無法在尿素固體培養(yǎng)基中存活，A錯誤。
3．(2020·高考山東卷)野生型大腸桿菌可以在基本培養(yǎng)基上生長，發(fā)生基因突變產(chǎn)生的氨基酸依賴型菌株需要在基本培養(yǎng)基上補(bǔ)充相應(yīng)氨基酸才能生長。將甲硫氨酸依賴型菌株M和蘇氨酸依賴型菌株N單獨(dú)接種在基本培養(yǎng)基上時，均不會產(chǎn)生菌落。某同學(xué)實驗過程中發(fā)現(xiàn)，將M、N菌株混合培養(yǎng)一段時間，充分稀釋后再涂布到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后出現(xiàn)許多由單個細(xì)菌形成的菌落，將這些菌落分別接種到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后均有菌落出現(xiàn)。該同學(xué)對這些菌落出現(xiàn)原因的分析，不合理的是(　　)
A．操作過程中出現(xiàn)雜菌污染
B．M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸
C．混合培養(yǎng)過程中，菌株獲得了對方的遺傳物質(zhì)
D．混合培養(yǎng)過程中，菌株中已突變的基因再次發(fā)生突變
解析：選B。若操作過程中出現(xiàn)雜菌污染，則基本培養(yǎng)基上會有雜菌生長，從而出現(xiàn)菌落，A不符合題意；若M、N菌株互為對方提供所缺失的氨基酸，則M、N菌株混合培養(yǎng)一段時間，充分稀釋后再涂布到基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后會出現(xiàn)許多由單個細(xì)菌形成的菌落，但由于M、N菌株的遺傳物質(zhì)沒有改變，將這些菌落分別接種到基本培養(yǎng)基上時，培養(yǎng)后不會再有菌落出現(xiàn)，B符合題意；若混合培養(yǎng)過程中，菌株獲得了對方的遺傳物質(zhì)或菌株中已突變的基因再次發(fā)生突變，都會造成遺傳物質(zhì)改變，則混合培養(yǎng)一段時間，充分稀釋涂布到基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)后會有菌落出現(xiàn)，將這些菌落再分別接種到基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，也會有菌落出現(xiàn)，C、D不符合題意。
4．(不定項)(2021·高考山東卷)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述錯誤的是(　　)
A．為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌
B．倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整
C．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落
D．該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的
解析：選BD。在劃線過程中，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌，以防止雜菌污染，A正確；倒平板后無需晃動，B錯誤；Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)沒有出現(xiàn)單菌落，說明Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)細(xì)菌數(shù)量太多，故應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，C正確；出現(xiàn)單菌落即達(dá)到了菌種純化的目的，D錯誤。
21世紀(jì)教育網(wǎng) www.21cnjy.com 精品試卷·第 2 頁 （共 2 頁）
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