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第2課時　動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體
學(xué)習(xí)目標(biāo)：
1.闡明動物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物|學(xué)等手段.使兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。
2.概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。
3.收集單克隆抗體在臨床上實際應(yīng)用的資料,并進(jìn)行交流分享。
學(xué)習(xí)內(nèi)容：
一、動物細(xì)胞融合技術(shù)
1．定義：使 個或 個動物細(xì)胞結(jié)合形成 個細(xì)胞的技術(shù)。
2．結(jié)果：融合后形成的雜交細(xì)胞具有原來 個或 個細(xì)胞的遺傳信息。
3．原理： 。
4．誘導(dǎo)融合常用的方法： 、 、 。
(1) 法是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)。
(2) 不滅活的病毒會 細(xì)胞，因而不能用于誘導(dǎo)細(xì)胞融合。
(3) 與植物原生質(zhì)體融合方法對比，誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的特有方法是 。
5．特點：突破了 的局限，使 成為可能。
6．動物細(xì)胞融合技術(shù)涉及的變異類型是 。
7．應(yīng)用
(1) 間、屬間、科間，甚至動物與植物之間的細(xì)胞融合都已獲得了成功。
(2)動物細(xì)胞融合技術(shù)已成為研究細(xì)胞 、細(xì)胞 、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。
(3)利用動物細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來的 技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。
二、單克隆抗體及其應(yīng)用
1.常規(guī)抗體與單克隆抗體
(1)常規(guī)抗體
①產(chǎn)生:抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法是向動物體內(nèi)反復(fù)注射 ,使動物產(chǎn)生抗體,然后從動物 中分離所需抗體。
②缺點:產(chǎn)量 、純度 ,制備的抗體特異性 。
(2) 單克隆抗體
①產(chǎn)生：由單一 細(xì)胞增殖產(chǎn)生的單一 。
②優(yōu)點:能準(zhǔn)確地識別 的細(xì)微差異，與 發(fā)生特異性結(jié)合,并且可以 。
2. 單克隆抗體的制備
(1)技術(shù)手段： 和 。
(2)原理： 和 。
(3)用B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的原因
①每一個B淋巴細(xì)胞只分泌 抗體，但一個B淋巴細(xì)胞 在體外培養(yǎng)條件下無限增殖。
②骨髓瘤細(xì)胞能在體外 ，但 。
③將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，得到的融合細(xì)胞能 ，并產(chǎn)生足夠 。
(4)制備過程
①免疫處理
提供B淋巴細(xì)胞的動物必須預(yù)先注射 進(jìn)行免疫處理，獲得能產(chǎn)生 的B淋巴細(xì)胞。
②誘導(dǎo)融合
將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞用 、 、 。其中 法是動物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)方式。
③通過篩選獲得雜交瘤細(xì)胞
用特定的 培養(yǎng)基進(jìn)行篩選：在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有 的 細(xì)胞才能生長。
④通過篩選獲得能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞
對上述經(jīng)選擇培養(yǎng)的 細(xì)胞進(jìn)行 和 檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需 的細(xì)胞(抗體檢測呈 性的雜交瘤細(xì)胞)。
⑤獲取單克隆抗體的場所
若在細(xì)胞培養(yǎng)液中進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)，則從 中提取；若在小鼠或其他動物腹腔中培養(yǎng)，則從 中提取。
(5)單克隆抗體的應(yīng)用
①被廣泛用作 ，在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要作用。
如：用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”.在妊娠第8天就可以做出診斷,且準(zhǔn)確率高達(dá)90%以上。
又如：利用 或 的單克隆抗體在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。
②可以運載
抗體——藥物偶聯(lián)物(ADC)通過將 與能特異性識別腫瘤抗原的 結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。
③自身也可用于治療疾病。
答案
一、1．兩 多 一
2．兩 多
3．細(xì)胞膜的流動性。
4． PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法
(1)滅活病毒誘導(dǎo)
(2)感染
(3)滅活病毒誘導(dǎo)法
5．有性雜交 使遠(yuǎn)緣雜交
6．染色體數(shù)目變異
7．(1)種 (2)遺傳 免疫 (3)雜交瘤
二、1. (1)①某種抗原 血清 ②低 低 差
(2)①雜交瘤細(xì)胞 特異性抗體
②抗原 特定抗原 大量制備
2. (1)動物細(xì)胞融合 動物細(xì)胞培養(yǎng)
(2)細(xì)胞膜的流動性 細(xì)胞增殖
(3)①一種特異性 不能 ② 大量增殖 產(chǎn)生抗體 ③大量增殖 數(shù)量的特定抗體
(4) ①特定的抗原 特定抗體
②PEG融合法、電融合法或滅活病毒誘導(dǎo)法誘導(dǎo)融合 滅活病毒誘導(dǎo)
③選擇 融合 雜交瘤
④雜交瘤細(xì)胞 克隆化培養(yǎng) 抗體 抗體 陽
⑤ 細(xì)胞培養(yǎng)液 腹水中
(5) ① 診斷試劑 同位素 熒光標(biāo)記 ②藥物
細(xì)胞毒素 單克隆抗體

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