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人教(2019)生物高考知識(shí)點(diǎn)梳理&對(duì)點(diǎn)訓(xùn)練12.2 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(含解析)

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人教(2019)生物高考知識(shí)點(diǎn)梳理&對(duì)點(diǎn)訓(xùn)練12.2 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(含解析)

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人教(2019)生物高考知識(shí)點(diǎn)梳理&對(duì)點(diǎn)訓(xùn)練
12.2 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用
知識(shí)點(diǎn)(一) 培養(yǎng)基及微生物的純培養(yǎng)技術(shù)
基礎(chǔ)知識(shí)·全面掌握
1.培養(yǎng)基的配制
(1)概念:人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出的供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。
(2)種類。
劃分標(biāo)準(zhǔn) 種類 特點(diǎn) 用途
物理性質(zhì) 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑 工業(yè)生產(chǎn)
半固體培養(yǎng)基 加凝固劑,如瓊脂 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)
固體培養(yǎng)基 微生物分離、鑒定,活菌計(jì)數(shù)
化學(xué)成分 天然培養(yǎng)基 含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì) 工業(yè)生產(chǎn)
合成培養(yǎng)基 培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)制備) 微生物的分類、鑒定
用途 選擇培養(yǎng)基 允許特定種類微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基 富集、分離出特定的微生物(如用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選尿素分解菌)
鑒別培養(yǎng)基 根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn),在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 鑒別不同種類的微生物(如用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水中是否有大腸桿菌)
(3)成分。
各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽,此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。
2.無(wú)菌技術(shù)
(1)含義:在培養(yǎng)微生物的操作中,所有防止雜菌污染的方法。
(2)常用方法。
項(xiàng)目 消毒 滅菌
條件 較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法 強(qiáng)烈的理化方法
結(jié)果 殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子) 殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)
常用方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法 濕熱滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌
3.微生物的純培養(yǎng)
(1)概念:由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體是純培養(yǎng)物,獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程就是純培養(yǎng)。
(2)過(guò)程:包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟。
(3)常用方法:平板劃線法和稀釋涂布平板法。
(4)實(shí)例——酵母菌的純培養(yǎng)。
【連接教材資料】1.(選擇性必修3 P10旁欄思考)無(wú)菌技術(shù)除用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外,還有什么作用?
提示:還能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.(選擇性必修3 P12“探究·實(shí)踐”思考分析)
(1)為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰?平板冷凝后,為什么要將平板倒置?
提示:通過(guò)灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。平板冷凝后,皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面濕度也比較高,將平板倒置,既可以防止培養(yǎng)基表面的水分過(guò)快地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。
(2)在倒平板的過(guò)程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎?為什么?
提示:不能。因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w和皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,可能會(huì)造成污染。
(3)平板劃線法在作第二次以及其后的劃線操作時(shí),為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線?目的是什么?
提示:劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,第二次以及其后的劃線從上一次劃線的末端開(kāi)始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。這樣做的目的是將聚集的菌種逐步稀釋分散以便獲得單個(gè)菌落。
[知識(shí)梳理]
培養(yǎng)基及消毒和滅菌
1.培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分的作用
成分 含義 作用
碳源 提供碳元素的物質(zhì) 構(gòu)成生物體細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝物,有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)
氮源 提供氮元素的物質(zhì) 合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝物
無(wú)機(jī)鹽 為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素,包括大量元素和微量元素 是細(xì)胞的組成成分、生理調(diào)節(jié)物質(zhì)、某些化能自養(yǎng)菌的能源,酶的激活劑等
水 生物體內(nèi)含量很高的無(wú)機(jī)物 不僅是良好的溶劑,而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定
2.比較消毒和滅菌
方法 條件 結(jié)果 常用方法 應(yīng)用范圍
消毒 較為溫和的物理、化學(xué)或生物方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物 煮沸消毒法 日常用品
巴氏消毒法 不耐高溫的液體,如牛奶
化學(xué)藥劑消毒法 用酒精擦拭雙手,用氯氣消毒水源
滅菌 強(qiáng)烈的理化方法 殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子 灼燒滅菌法 接種工具
干熱滅菌法 玻璃器皿、金屬用具
濕熱滅菌法 培養(yǎng)基及容器
[對(duì)點(diǎn)練習(xí)]
1.(2022·沈陽(yáng)模擬)大腸桿菌是寄生于人和動(dòng)物腸道中的細(xì)菌,利用其代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍(lán)反應(yīng),使菌落呈黑色的特性,從而將其鑒別出來(lái)。下表是其培養(yǎng)基配方,相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(  )
成分 蛋白胨 乳糖 磷酸二氫鉀 X 蒸餾水 2%伊紅水溶液 0.5%美藍(lán)水溶液
含量 10 g 10 g 2 g 20~30 g 1 000 mL 20 mL 13 mL
A.培養(yǎng)基配方中X的成分可以是瓊脂
B.該培養(yǎng)基中蛋白胨提供的主要營(yíng)養(yǎng)有碳源、氮源和維生素
C.可采用干熱滅菌法對(duì)該培養(yǎng)基滅菌
D.可利用培養(yǎng)基上菌落的特征來(lái)判斷和鑒別大腸桿菌的存在
解析:選C 對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌應(yīng)該采用高壓蒸汽滅菌法,C錯(cuò)誤。
2.在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中,經(jīng)常通過(guò)消毒和滅菌來(lái)避免細(xì)菌的污染。回答下列問(wèn)題:
(1)在實(shí)驗(yàn)室中,玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具_(dá)_______(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法,與煮沸消毒法相比,這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是_________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒,其原因是紫外線能________________。在照射前,適量噴灑________,可強(qiáng)化消毒效果。
(4)水廠供應(yīng)的自來(lái)水通常是經(jīng)過(guò)________(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。
(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因是______________________________________________________________。
解析:(1)干熱滅菌是指將滅菌物品放入干熱滅菌箱內(nèi),在160~170 ℃的熱空氣中維持2~3 h。能耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等,可采用干熱滅菌的方法滅菌。(2)與煮沸消毒法相比,巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法可以殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物,并且使牛奶的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少。(3)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)在使用前,可以用紫外線照射30 min,紫外線能破壞微生物的DNA結(jié)構(gòu),從而殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射前,適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以強(qiáng)化消毒效果。(4)自來(lái)水通常是用氯氣進(jìn)行消毒的。(5)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因是鍋內(nèi)原有的冷空氣沒(méi)有排盡。
答案:(1)可以 (2)在達(dá)到消毒目的的同時(shí),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少 (3)破壞DNA結(jié)構(gòu) 消毒液 (4)氯氣 (5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡
[知識(shí)梳理]
微生物的純培養(yǎng)與平板劃線操作
1.培養(yǎng)物、純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)辨析
培養(yǎng)物 接種于培養(yǎng)基內(nèi),在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體
純培養(yǎng)物 由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體
純培養(yǎng) 獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程
2.平板劃線操作的注意事項(xiàng)
(1)灼燒接種環(huán),待其冷卻后才能蘸取菌液,以免溫度過(guò)高殺死菌種。
(2)第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開(kāi)始,能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終得到由單個(gè)微生物繁殖而來(lái)的菌落。
(3)劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。
(4)劃線用力大小要適當(dāng),防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。
(5)操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要將接種環(huán)進(jìn)行火焰灼燒滅菌,劃線操作結(jié)束時(shí),仍需灼燒接種環(huán),每次灼燒的目的如下表:
項(xiàng)目 第一次操作 每次劃線之前 劃線結(jié)束
目的 殺死接種環(huán)上原有的微生物 殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種,使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端,使每次劃線菌種數(shù)目減少 殺死接種環(huán)上殘存的菌種,避免微生物污染環(huán)境和感染操作者
[對(duì)點(diǎn)練習(xí)]
3.下列關(guān)于微生物實(shí)驗(yàn)操作的敘述,錯(cuò)誤的是(  )
A.微生物培養(yǎng)基中并不都必須添加碳源或氮源
B.倒平板時(shí),應(yīng)將打開(kāi)的培養(yǎng)皿皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上
C.接種前后,接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒
D.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,帶菌的培養(yǎng)基必須經(jīng)滅菌處理后才能倒掉
解析:選B 倒平板時(shí),用左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20 mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋,B錯(cuò)誤。
4.鯨死亡后會(huì)沉入海底,俗稱“鯨落”。“鯨落”后期會(huì)形成一個(gè)以厭氧菌和硫細(xì)菌等為主體的生態(tài)系統(tǒng)。厭氧菌以“鯨落”肌肉中的脂肪為食,同時(shí)產(chǎn)生一些硫化氫等硫化物。硫細(xì)菌將硫化物氧化成硫酸鹽,并以該過(guò)程中釋放的能量合成有機(jī)物。
請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題:
(1)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中一般都會(huì)含有水、無(wú)機(jī)鹽、氮源和碳源,培養(yǎng)“鯨落”群落中厭氧菌的碳源必須是________。要培養(yǎng)硫細(xì)菌,培養(yǎng)基中的成分需要特殊配制,主要體現(xiàn)在_________________________________________,這種培養(yǎng)基可以用來(lái)專一性培養(yǎng)硫細(xì)菌,所以稱為_(kāi)_______培養(yǎng)基。
(2)在分離“鯨落”中的微生物時(shí)要制備固體培養(yǎng)基,在倒平板操作后,將平板倒置,這樣做的目的是_________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)為了研究“鯨落”中含有微生物的情況,需將“鯨落”提取物加水稀釋,然后將稀釋水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng),這種方法稱為_(kāi)_______________。下面所示的四種菌落分布情況中,不可能由該方法得到的是________。
(4)若想得到“鯨落”中某目標(biāo)菌種,可用平板劃線法進(jìn)行純化。若下圖甲是接種培養(yǎng)后的菌落分布圖,對(duì)應(yīng)的平板劃線操作示意圖為_(kāi)_______。圖甲中的③更易獲得單菌落,判斷依據(jù)是__________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析:(1)厭氧菌以“鯨落”肌肉中的脂肪為食,屬于異養(yǎng)微生物,故培養(yǎng)“鯨落”群落中厭氧菌的碳源必須是含碳有機(jī)物(或脂肪)。硫細(xì)菌將硫化物氧化成硫酸鹽,并以該過(guò)程中釋放的能量合成有機(jī)物,即硫細(xì)菌為自養(yǎng)生物,所以培養(yǎng)硫細(xì)菌的培養(yǎng)基中碳源必須是含碳無(wú)機(jī)物(或碳酸鹽),同時(shí)加入硫化物。這種人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。(2)在制備固體培養(yǎng)基過(guò)程中,倒平板操作后將平板倒置的目的是防止培養(yǎng)皿皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)皿造成污染,同時(shí)防止培養(yǎng)基中的水分過(guò)快發(fā)揮。(3)使用涂布器涂布接種微生物的方法為稀釋涂布平板法。稀釋涂布平板法接種的微生物會(huì)在培養(yǎng)基上形成均勻分布的菌落,而平板劃線法接種的微生物在劃線的起始部分菌落連在一起生長(zhǎng),由圖可知,A、B、C均形成了均勻分布的單個(gè)菌落,是通過(guò)稀釋涂布平板法接種得到的,而D中菌落是連在一起生長(zhǎng)的,是通過(guò)平板劃線法接種得到的。(4)圖甲對(duì)應(yīng)的平板劃線操作示意圖是圖丙。圖甲中③經(jīng)過(guò)多次劃線,每次劃線的菌種都來(lái)自上一次劃線的末端,最后一次劃線結(jié)束時(shí)更易獲得單菌落。
答案:(1)含碳有機(jī)物(或脂肪) 碳源必須是含碳無(wú)機(jī)物(或碳酸鹽),同時(shí)加入硫化物 選擇 (2)防止培養(yǎng)皿皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)皿造成污染;防止培養(yǎng)基中的水分過(guò)快揮發(fā) (3)稀釋涂布平板法 D (4)丙 每次劃線的菌種都來(lái)自上一次劃線的末端,最后一次劃線結(jié)束時(shí)更容易獲得單菌落
知識(shí)點(diǎn)(二) 微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
(一)微生物的選擇培養(yǎng)
1.選擇培養(yǎng)基
允許特定種類的微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。
2.稀釋涂布平板法
將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋后,將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基表面,進(jìn)行培養(yǎng)。
(1)系列稀釋操作。
系列稀釋:移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌。操作時(shí),試管口和移液管應(yīng)離酒精燈火焰1~2 cm。操作過(guò)程如下:
(2)涂布平板操作。
步驟 圖示 操作
1 取0.1 mL菌液,滴加到培養(yǎng)基表面
2 將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中
3 將沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼燒,待酒精燃盡、涂布器冷卻后,再進(jìn)行涂布
4 用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,使菌液涂布均勻
(3)培養(yǎng):待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后,將平板倒置,放入30~37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~2 d。
(二)微生物的數(shù)量測(cè)定
1.稀釋涂布平板法
計(jì)數(shù)原理 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌
計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn) 為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)為30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)
計(jì)數(shù)方法 通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),以保證獲得菌落數(shù)為30~300、適于計(jì)數(shù)的平板。在同一稀釋度下,應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù),然后求出平均值
2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
計(jì)數(shù)原理 利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù),然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量
優(yōu)點(diǎn) 是一種常用的、快速直觀的測(cè)定微生物數(shù)量的方法
缺點(diǎn) 統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是死菌數(shù)和活菌數(shù)的總和
3.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
【連接教材資料】1.(選擇性必修3 P18“相關(guān)信息”挖掘)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和細(xì)菌計(jì)數(shù)板的主要區(qū)別是什么?
提示:前者常用于相對(duì)較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等的計(jì)數(shù);后者可對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。
2.(選擇性必修3 P19“探究·實(shí)踐”思考)利用稀釋涂布平板法純化分解尿素的細(xì)菌時(shí),經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上出現(xiàn)多種菌落,可能的原因有哪些?
提示:出現(xiàn)雜菌污染的可能原因:培養(yǎng)基制備過(guò)程中被雜菌污染;接種過(guò)程中,無(wú)菌操作不符合要求;系列稀釋時(shí),無(wú)菌操作不符合要求等。
[知識(shí)梳理]
微生物選擇培養(yǎng)的原理和方法
1.選擇培養(yǎng)的原理:根據(jù)不同微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)需求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培養(yǎng)基。
2.三種選擇培養(yǎng)方法的比較
方法 特點(diǎn) 舉例
利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型選擇培養(yǎng)基 通過(guò)控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分,使?fàn)I養(yǎng)缺陷型微生物不能正常生長(zhǎng) 缺乏氮源時(shí)可以分離固氮微生物
利用加入某種化學(xué)物質(zhì) 在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì),利用加入的化學(xué)物質(zhì)對(duì)微生物產(chǎn)生的影響,抑制某些微生物生長(zhǎng),同時(shí)選擇所需的微生物 加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌
利用培養(yǎng)條件 改變微生物的培養(yǎng)條件 將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物
[對(duì)點(diǎn)練習(xí)]
1.(2022·菏澤二模)精氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型谷氨酸棒狀桿菌缺乏將鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)化為精氨酸的酶,不能在缺少精氨酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng),但可作為鳥(niǎo)氨酸發(fā)酵的優(yōu)良菌種。如圖為野生型谷氨酸棒狀桿菌經(jīng)誘變獲得精氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型谷氨酸棒狀桿菌并進(jìn)行篩選的過(guò)程示意圖,過(guò)程②將紫外線照射處理的菌液接種在某培養(yǎng)基上。培養(yǎng)至菌落不再增加時(shí),平板上的菌落如圖甲所示。過(guò)程③向培養(yǎng)基中添加某種物質(zhì)繼續(xù)培養(yǎng)得到如圖乙所示平板。下列敘述正確的是(  )
A.紫外線照射可導(dǎo)致谷氨酸棒狀桿菌發(fā)生基因突變或染色體變異
B.圖乙中菌落B為精氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型谷氨酸棒狀桿菌
C.過(guò)程③向培養(yǎng)基中添加的某種物質(zhì)是谷氨酸
D.過(guò)程②所用培養(yǎng)基是一種鑒別培養(yǎng)基
解析:選B 谷氨酸棒狀桿菌為原核生物,其細(xì)胞中不含染色體,因此不會(huì)發(fā)生染色體變異,A錯(cuò)誤;與圖甲平板相比,圖乙平板上菌落多,說(shuō)明過(guò)程③向培養(yǎng)基中添加的某種物質(zhì)是精氨酸,新出現(xiàn)的菌落為精氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型谷氨酸棒狀桿菌,B正確,C錯(cuò)誤;過(guò)程②所用培養(yǎng)基缺少精氨酸,只有能產(chǎn)生精氨酸的微生物才能生存,因此該培養(yǎng)基是一種選擇培養(yǎng)基,D錯(cuò)誤。
2.下表為某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基配方:
成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 顯色劑(伊紅美藍(lán)) 瓊脂
含量/g 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0
將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1 000 mL
請(qǐng)結(jié)合所學(xué)知識(shí)分析,下列相關(guān)敘述不正確的是(  )
A.根據(jù)用途劃分,該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基
B.若要分離能分解尿素的細(xì)菌,需將蛋白胨換成尿素
C.若還需鑒定分解尿素的細(xì)菌,需將伊紅美藍(lán)換成酚紅
D.該培養(yǎng)基中蛋白胨只是提供了氮源
解析:選D 伊紅美藍(lán)是鑒定大腸桿菌的試劑,根據(jù)用途劃分,該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基,A正確;若要分離能分解尿素的細(xì)菌,應(yīng)以尿素為唯一氮源,需要將蛋白胨換成尿素,B正確;鑒定分解尿素的細(xì)菌,需要使用酚紅指示劑。若培養(yǎng)基中存在分解尿素的細(xì)菌,其菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶,這是由于尿素被分解產(chǎn)生的氨使pH升高,指示劑產(chǎn)生顏色變化,從而證明這一菌株以尿素為氮源,C正確;該培養(yǎng)基中蛋白胨主要提供了碳源、氮源、維生素,D錯(cuò)誤。
[知識(shí)梳理]
微生物計(jì)數(shù)的原理和方法
1.平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較
項(xiàng)目 平板劃線法 稀釋涂布平板法
關(guān)鍵操作 接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線 一系列的梯度稀釋、涂布平板操作
菌體獲得 在具有顯著的菌落特征的區(qū)域中挑取單個(gè)的菌落 從適宜稀釋度平板上的菌落中挑取單個(gè)的菌落
成功關(guān)鍵 (1)接種環(huán)的灼燒 ①第一次劃線前:殺死接種環(huán)上的微生物,避免污染培養(yǎng)物;②之后每次劃線前:殺死上次劃線后殘留菌種,保證每次劃線菌種來(lái)自上次劃線末端;③劃線結(jié)束后:殺死殘留菌種,避免污染環(huán)境和感染操作者 (2)接種環(huán)灼燒之后,要冷卻后再進(jìn)行操作,以免溫度太高殺死菌種 (3)劃線時(shí)最后一次的劃線不要與第一次的劃線相連 (4)劃線力度要適宜,避免將培養(yǎng)基劃破 (1)稀釋操作時(shí):盛有9 mL無(wú)菌水的所有試管、移液管等均需滅菌;操作時(shí),試管口和移液管應(yīng)在離酒精燈火焰1~2 cm處 (2)涂布平板時(shí) ①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒,取出時(shí)讓多余酒精在燒杯中滴盡,然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃;②不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中,以免引燃其中的酒精;③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適,移液管管頭不要接觸任何物體
優(yōu)點(diǎn) 可以根據(jù)菌落的特點(diǎn)獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落 既可以獲得單細(xì)胞菌落,又能對(duì)微生物計(jì)數(shù)
缺點(diǎn) 不能對(duì)微生物計(jì)數(shù) 操作復(fù)雜,需要涂布多個(gè)平板
2.兩種微生物計(jì)數(shù)方法的比較
項(xiàng)目 間接計(jì)數(shù)法(稀釋涂布平板法) 直接計(jì)數(shù)法(顯微鏡直接計(jì)數(shù)法)
原理 通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌 在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù),然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量
公式 每毫升菌液中微生物細(xì)胞的數(shù)量=×M C:某稀釋倍數(shù)下至少3個(gè)平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù);V:涂布平板時(shí)所用的菌液稀釋液體積(mL); M:稀釋倍數(shù) 每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格內(nèi)平均細(xì)菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)
缺點(diǎn) 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 不能區(qū)分細(xì)胞死活
結(jié)果 比實(shí)際值偏小 比實(shí)際值偏大
[對(duì)點(diǎn)練習(xí)]
3.用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù),在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中,對(duì)該實(shí)驗(yàn)有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(  )
A.涂布了三個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250,取平均值233
B.涂布了一個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230
C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度
D.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5,取其平均值作為該樣品菌落數(shù)估計(jì)值
解析:選B 該實(shí)驗(yàn)中,至少要涂布3個(gè)平板,選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),求平均值,A、D正確;實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)和重復(fù)實(shí)驗(yàn),排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度,B錯(cuò)誤,C正確。
4.(2020·全國(guó)卷Ⅰ)某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的有機(jī)物)難以降解,會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染,只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基,甲的組分為無(wú)機(jī)鹽、水和S,乙的組分為無(wú)機(jī)鹽、水、S和Y。
回答下列問(wèn)題:
(1)實(shí)驗(yàn)時(shí),盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用____________的方法進(jìn)行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是________。甲、乙培養(yǎng)基均屬于________培養(yǎng)基。
(2)實(shí)驗(yàn)中初步估測(cè)搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個(gè)/mL,若要在每個(gè)平板上涂布100 μL稀釋后的菌液,且保證每個(gè)平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)不超過(guò)200個(gè),則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋________倍。
(3)在步驟⑤的篩選過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過(guò)某一濃度時(shí),某菌株對(duì)S的降解量反而下降,其原因可能是______________________(答出1點(diǎn)即可)。
(4)若要測(cè)定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù),請(qǐng)寫(xiě)出主要實(shí)驗(yàn)步驟:________________________________________________________________________。
(5)上述實(shí)驗(yàn)中,甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同,但都能為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供4類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),即__________________________。
解析:(1)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,對(duì)盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶進(jìn)行滅菌時(shí),常采用高壓蒸汽滅菌法。據(jù)題圖分析可知,乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基,與甲培養(yǎng)基相比,其特有的組分Y應(yīng)是凝固劑瓊脂。甲、乙培養(yǎng)基均只允許能利用物質(zhì)S作為氮源和碳源的微生物生長(zhǎng),因此均為選擇培養(yǎng)基。(2)據(jù)題意可知,假設(shè)至少將搖瓶M中的菌液稀釋X倍,才能保證稀釋后的100 μL菌液涂布的平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)不超過(guò)200個(gè),初步估測(cè)搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個(gè)/mL,則稀釋之前100 μL菌液中有2×106個(gè)細(xì)菌,可得2×106×(1/X)=200,則X=104,因此至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋104倍。(3)在篩選過(guò)程中,若培養(yǎng)基中S濃度過(guò)高,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞失水,進(jìn)而抑制菌株的生長(zhǎng)。(4)將含有能降解S的細(xì)菌的淤泥加入無(wú)菌水中,進(jìn)行適當(dāng)稀釋后,利用稀釋涂布平板法,取適量的菌液涂布到乙培養(yǎng)基上,在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng),一段時(shí)間后,統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),即可估算出淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)。(5)本實(shí)驗(yàn)中,甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同,但都能為細(xì)菌生長(zhǎng)提供水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
答案:(1)高壓蒸汽滅菌 瓊脂 選擇 (2)104 (3)S的濃度超過(guò)某一值時(shí)會(huì)抑制菌株的生長(zhǎng) (4)取淤泥加入無(wú)菌水中,涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后計(jì)數(shù) (5)水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽
[課時(shí)驗(yàn)收評(píng)價(jià)]
1.下列關(guān)于微生物培養(yǎng)的說(shuō)法,錯(cuò)誤的是(  )
A.倒平板時(shí),培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后要立即倒置放置
B.實(shí)驗(yàn)中錐形瓶、培養(yǎng)皿常用干熱滅菌法滅菌
C.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)應(yīng)標(biāo)記在皿底
D.純化培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)皿應(yīng)倒置培養(yǎng)在恒溫培養(yǎng)箱中
解析:選A 倒平板時(shí),培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后需要等培養(yǎng)基凝固后,才能倒置放置,A錯(cuò)誤。
2.下列關(guān)于消毒和滅菌的理解正確的是(  )
A.無(wú)菌技術(shù)中,若處理對(duì)象為液體,則只能消毒,不能滅菌
B.培養(yǎng)皿、MS培養(yǎng)基可用干熱滅菌法滅菌
C.高壓蒸汽滅菌完成后,待壓力表降至零時(shí),再打開(kāi)排氣閥排氣
D.外植體消毒時(shí)常用硝酸銀溶液處理1~2 min
解析:選C 無(wú)菌技術(shù)中,若處理對(duì)象為液體,可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌,A錯(cuò)誤;培養(yǎng)皿可用干熱滅菌法滅菌,培養(yǎng)基一般用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌,B錯(cuò)誤;高壓蒸汽滅菌完成后,待壓力表降至零時(shí),再打開(kāi)排氣閥排氣,C正確;外植體消毒一般采用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精和次氯酸鈉溶液處理,D錯(cuò)誤。
3.平板劃線法和稀釋涂布平板法是常用的獲取純培養(yǎng)物的方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(  )
A.兩種純化方法的核心都是要防止雜菌污染,保證培養(yǎng)物的純度
B.用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí),所得數(shù)據(jù)往往比實(shí)際值偏小
C.獲取純培養(yǎng)物的過(guò)程中,應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pH
D.對(duì)10 mL土樣樣液稀釋106倍后,取0.1 mL稀釋液涂布,測(cè)得的菌落數(shù)分別為218、266、305,則該10 mL土樣中目的菌數(shù)為2.63×1010個(gè)
解析:選D 用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量時(shí),一般選擇菌落數(shù)在30~300的至少3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù),求出平均值,D錯(cuò)誤。
4.在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中,劃線接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如圖。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(  )
A.甲中a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置
B.接種前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌
C.連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落
D.接種過(guò)程中至少需要對(duì)接種環(huán)灼燒5次
解析:選A 每次劃線的菌種來(lái)自上一區(qū)域的末端,因此劃線的起始區(qū)域菌落最多。由圖乙可知,圖甲中的d區(qū)域菌落多,為劃線的起始位置,A錯(cuò)誤。
5.牛奶消毒及細(xì)菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的過(guò)程如圖所示,下列相關(guān)敘述不正確的是(  )
A.步驟①為巴氏消毒法,步驟②為系列梯度稀釋,步驟③中的牛肉膏蛋白胨均可提供碳源、氮源
B.實(shí)驗(yàn)中對(duì)試管、培養(yǎng)皿的滅菌方法是干熱滅菌,適用這種方法的是能耐高溫且需要保持干燥的物品
C.實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)基適宜的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌
D.實(shí)驗(yàn)中采用平板劃線法計(jì)數(shù),最可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低
解析:選D 平板劃線法不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù),D錯(cuò)誤。
6.(2022·泰州模擬)如圖表示土壤中微生物為植物提供氮的過(guò)程,圖中①②③分別代表相關(guān)物質(zhì),下列有關(guān)說(shuō)法正確的是(  )
A.①是N2、③是NH3,X代表的細(xì)菌異化作用類型是需氧型
B.①是NH3、②是NO,固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費(fèi)者
C.②是NH3、③是NO,X代表的細(xì)菌以有機(jī)物作為碳源
D.在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)固氮菌可用二氧化碳為碳源的無(wú)氮培養(yǎng)基
解析:選C ①是N2,②是NH3,③是NO,X代表土壤中的分解者,其異化作用方式可能是需氧型,以土壤中的有機(jī)物作為碳源,固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費(fèi)者,A、B錯(cuò)誤,C正確;在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)固氮菌不能用二氧化碳為碳源的無(wú)氮培養(yǎng)基,D錯(cuò)誤。
7.產(chǎn)脂肪酶的細(xì)菌可用于含油廢水處理。科研人員用射線照射從土壤中分離的菌株,反復(fù)篩選后獲得產(chǎn)酶能力提高的菌株,具體流程如圖。下列相關(guān)敘述正確的是(  )
A.步驟①取土壤樣品溶于無(wú)菌水中制成菌懸液
B.步驟②的固體平板可以是以脂肪為唯一氮源的培養(yǎng)基
C.步驟②射線照射可引起細(xì)菌基因突變或染色體變異
D.步驟③透明圈越大的菌落,其脂肪酶活性一定越高
解析:選A 步驟①取土壤樣品溶于無(wú)菌水中制成菌懸液,A正確;組成脂肪的化學(xué)元素有C、H、O,要篩選可以產(chǎn)生脂肪酶的細(xì)菌,需要用以脂肪作為唯一碳源的固體培養(yǎng)基,B錯(cuò)誤;細(xì)菌是原核生物,沒(méi)有成形的細(xì)胞核和染色體,不會(huì)發(fā)生染色體變異,C錯(cuò)誤;透明圈大的菌落,酶活性不一定高,因此需要對(duì)初篩選的菌株進(jìn)一步進(jìn)行酶活性檢測(cè),D錯(cuò)誤。
8.野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng),氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株由于發(fā)生基因突變而無(wú)法合成某種氨基酸只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng),如圖為純化某氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖,數(shù)字代表培養(yǎng)基,a、b、c表示操作步驟。有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是(  )
A.①②④為完全培養(yǎng)基,③為基本培養(yǎng)基
B.a(chǎn)操作的目的是提高突變菌株的濃度
C.b操作可用涂布器蘸取菌液均勻的涂布在②表面
D.經(jīng)c過(guò)程影印及培養(yǎng)后,可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)
解析:選C 結(jié)合題圖信息分析可知,①②④為完全培養(yǎng)基,③為基本培養(yǎng)基,A正確;紫外線可用于誘導(dǎo)突變,提高突變的頻率,故a操作的目的是提高突變菌株的濃度,B正確;b操作是先將菌液滴加到培養(yǎng)基表面,再用涂布器蘸取菌液均勻的涂布在②表面,C錯(cuò)誤;由圖可知,D菌落在基本培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng),而在完全培養(yǎng)基上能夠生長(zhǎng),這說(shuō)明D菌落是氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株,故經(jīng)c過(guò)程影印及培養(yǎng)后,可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進(jìn)行純化培養(yǎng),D正確。
9.(2022·衡水模擬)自生固氮菌是土壤中能獨(dú)立固定空氣中N2的細(xì)菌,將玉米種子用自生固氮菌拌種后播種,可顯著提高產(chǎn)量并降低化肥的使用量。科研人員進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測(cè)定的研究,部分實(shí)驗(yàn)流程如圖1。回答下列問(wèn)題:
(1)步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)乇韺油寥赖脑蚴莀___________________________________;步驟②需充分振蕩的主要目的是____________________________________。
(2)下表為兩種培養(yǎng)基的配方,步驟④應(yīng)選其中的________培養(yǎng)基,原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
培養(yǎng)基類型 培養(yǎng)基組分
Ashby培養(yǎng)基 甘露醇(C6H14O6)、KH2PO4、MgSO4·7H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸餾水、瓊脂
LB培養(yǎng)基 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸餾水、瓊脂
(3)步驟④所用的接種工具是__________,若在④的平板上統(tǒng)計(jì)的菌落平均數(shù)量為126個(gè),則每克土壤中含有的固氮菌為_(kāi)___________個(gè)。
(4)將純化的固氮菌置于完全培養(yǎng)液中擴(kuò)大培養(yǎng)48小時(shí),經(jīng)離心后收集下層細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至特定培養(yǎng)基中進(jìn)行固氮能力的測(cè)定,篩選出固氮能力最強(qiáng)的菌種CM12,為進(jìn)一步鑒定其固氮能力,科研人員選用發(fā)芽一致的玉米種子進(jìn)行3組盆栽實(shí)驗(yàn),30天后測(cè)定土壤微生物有機(jī)氮含量,結(jié)果如圖2。
注:CK:對(duì)照處理組;N:尿素處理組(每盆土壤中50 mL有氮全營(yíng)養(yǎng)液:成分為在1 000 mL無(wú)氮植物營(yíng)養(yǎng)液中加入0.12 g尿素);CM12:自生固氮菌CM12處理組(每盆土壤澆50 mL接種自身固氮菌的無(wú)氮植物營(yíng)養(yǎng)液)。
①對(duì)照組(CK)的處理為_(kāi)____________________________________________________。
②實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:施用尿素處理和接種固氮菌CM12處理均能顯著增加土壤微生物有機(jī)氮含量。與尿素處理組相比,CM12處理組土壤微生物有機(jī)氮含量增加了約__________%(保留1位小數(shù))。
③自生固氮菌較共生固氮菌(如根瘤菌)的應(yīng)用范圍更廣,原因是________________________________________________________________________。
解析:(1)步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)乇韺油寥赖脑蚴窃诟缓袡C(jī)質(zhì)的土壤表層,有更多的固氮菌生長(zhǎng);步驟②需充分振蕩的主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無(wú)菌水中。(2)由表格中培養(yǎng)基配方分析可知,步驟④應(yīng)選其中的Ashby培養(yǎng)基,這是因?yàn)樵撆囵B(yǎng)基不含氮源具有選擇作用,自生固氮菌可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗鳯B培養(yǎng)基中的蛋白胨可以提供氮源,不具有選擇作用。(3)由圖1觀察可知,步驟④平板中的菌落分布均勻,故所用的接種工具是涂布器,若在④的平板上統(tǒng)計(jì)的菌落的平均數(shù)量為126個(gè),則每克土壤中含有的固氮菌為126÷0.1×104=1.26×107(個(gè))。(4)①設(shè)置對(duì)照組時(shí)需要排除無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,故對(duì)照組(CK)的處理為每盆土壤澆50 mL無(wú)氮植物營(yíng)養(yǎng)液。②由柱形圖分析可知,空白對(duì)照組中土壤微生物有機(jī)氮含量為10 mg·kg-1,尿素處理組的土壤微生物有機(jī)氮含量為12 mg·kg-1,而CM12處理組土壤微生物有機(jī)氮含量為22 mg·kg-1,故與尿素處理組相比,CM12處理組土壤微生物有機(jī)氮含量增加了(22-12)÷12×100%≈83.3%。③自生固氮菌較共生固氮菌(如根瘤菌)的應(yīng)用范圍更廣,這是因?yàn)樽陨痰茉谕寥乐歇?dú)立固氮,不受宿主的限制。
答案:(1)在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層,有更多的固氮菌生長(zhǎng) 使土壤中的微生物充分釋放到無(wú)菌水中 (2)Ashby 該培養(yǎng)基不含氮源具有選擇作用,自生固氮菌可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗琇B培養(yǎng)基中的蛋白胨可以提供氮源,不具有選擇作用 (3)涂布器 1.26×107 (4)①每盆土壤澆50 mL無(wú)氮植物營(yíng)養(yǎng)液 ②83.3 ③自生固氮菌能在土壤中獨(dú)立固氮,不受宿主的限制

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