資源簡介

中小學教育資源及組卷應用平臺
新人教生物一輪復習課堂互動探究案
12-4　動物細胞工程
考點一　動物細胞培養(yǎng)和細胞核移植
任務驅(qū)動·探究突破
任務1　補充動物細胞培養(yǎng)過程示意圖，并填空
(1)與植物細胞培養(yǎng)相比，動物細胞培養(yǎng)過程所用的培養(yǎng)基一般是__________培養(yǎng)基，并加入__________。
(2)動物細胞培養(yǎng)過程中兩次用到胰蛋白酶，第一次的作用是將剪碎的組織分散成________；第二次是將貼壁生長的細胞從瓶壁上________下來，其目的是避免動物細胞的________現(xiàn)象。
(3)動物細胞培養(yǎng)時加入CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的____；O2 的作用是促進細胞________。
任務2　比較動物細胞培養(yǎng)與動物體細胞核移植的不同點
動物細胞培養(yǎng) 動物體細胞核移植
原理 ________ ________________
過程
結(jié)果 獲得________ 獲得________
應用 ①生產(chǎn)生物制品 ②用于基因工程 ③檢測有毒物質(zhì) ①加速家畜遺傳改良進程，促進良種繁育 ②保護瀕危物種 ③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 ④提供克隆器官、組織等
　細胞工程的兩個總結(jié)
(1)植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)過程都存在細胞的培養(yǎng)過程，但植物細胞可以先分裂再分化，而動物細胞不分化只分裂。
(2)克隆動物的起點是經(jīng)過核移植后形成的重組細胞，其遺傳物質(zhì)主要來自供體，因此形成的個體性狀主要同供體，但也有部分性狀同受體。
動物細胞培養(yǎng)和核移植時注意的五個問題
(1)在分散細胞時，需用胰蛋白酶分散細胞，不能用胃蛋白酶，因為胃蛋白酶作用的適宜pH約為1.8，胰蛋白酶作用的適宜pH為7.2～7.8，而多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4。
(2)取供體動物的體細胞培養(yǎng)，一般選用10代以內(nèi)的細胞，因為10代以內(nèi)的細胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了供體細胞正常的遺傳基礎。
(3)克隆動物是由重組的細胞經(jīng)培養(yǎng)而來的，該重組細胞的細胞質(zhì)基因來源于受體細胞，細胞核基因來源于提供細胞核的親本，其遺傳物質(zhì)來自兩個親本。
(4)克隆動物絕大部分性狀與供體動物相同，少數(shù)性狀與提供去核卵母細胞的動物相同，與代孕動物的性狀無遺傳關系。
(5)從生殖方式的角度看，動物體細胞核移植技術(shù)(克隆)屬無性生殖，重組細胞相當于受精卵，需要動物細胞培養(yǎng)和胚胎工程技術(shù)的支持。
任務3　細胞核移植技術(shù)
(1)理清克隆動物培育流程
(2)細胞核移植技術(shù)中的三個注意點
①動物細胞核移植技術(shù)，體現(xiàn)了動物細胞核的全能性而非細胞的全能性。
②克隆屬于無性繁殖，產(chǎn)生新個體的性別、絕大多數(shù)性狀與供核親本一致。
③核移植技術(shù)獲得的動物與供核動物性狀不完全相同的原因：a.克隆動物線粒體中的DNA來自去核卵母細胞；b.性狀受環(huán)境的影響；c.在個體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變。
考向分類·對點落實
考向一 動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的考查
1.[經(jīng)典高考]下列關于動物細胞培養(yǎng)的敘述，正確的是(　　)
A．連續(xù)細胞系的細胞大多具有二倍體核型
B．某些癌細胞在合適條件下能逆轉(zhuǎn)為正常細胞
C．由多個祖細胞培養(yǎng)形成的細胞群為一個克隆
D．未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細胞系細胞具有相同的性狀
2．(不定項選擇)實驗小鼠皮膚細胞培養(yǎng)(非克隆培養(yǎng))的基本過程如圖所示。下列敘述正確的是(　　)
A．甲過程需要對實驗小鼠進行消毒
B．乙過程對皮膚組織可用胰蛋白酶處理
C．丙過程得到的細胞大多具有異倍體核型
D．丁過程得到的細胞具有異質(zhì)性
3．[2022·四川成都棠湖中學高三月考]食品保鮮劑——青鮮素能抑制植物細胞生長與分裂從而抑制發(fā)芽，被用于蔬菜的保鮮，但其殘留會損害人體健康。根據(jù)材料回答下列問題。
(1)青鮮素是人工合成的對植物的生長發(fā)育有調(diào)節(jié)作用的化學物質(zhì)，屬于________。
(2)青鮮素殘留毒性可能會使________發(fā)生突變，導致正常細胞生長和分裂失控而變成癌細胞。
(3)科研人員以小兔為實驗材料，用“動物細胞培養(yǎng)技術(shù)”對青鮮素毒害性進行了檢測。
①請完善檢測青鮮素毒性的實驗：
主要實驗步驟：
第一步：取大小相同的六只培養(yǎng)瓶編號為1～6，分別加入等量的相同培養(yǎng)液和小兔細胞。
第二步：向1號培養(yǎng)瓶中加入生理鹽水，向2～6號培養(yǎng)瓶中分別加入________________________。
第三步：培養(yǎng)一段時間后，取樣制成臨時裝片，用顯微鏡觀察，____________，____________。
結(jié)果如下表：
培養(yǎng)瓶編號 1 2 3 4 5 6
添加劑中青鮮素濃度(mg/L) 水 10 30 90 270 810
變異細胞比例 0 0 1/106 1/106 2/106 8/106
分析表中數(shù)據(jù)可得出結(jié)論：_________________________________________________
________________________________________________________________________。
②該實驗檢測有毒物質(zhì)毒性的指標是___________________________________________
________________________________________________________________________，
所用培養(yǎng)液中需要加入的特殊營養(yǎng)成分是________。
考向二 體細胞克隆技術(shù)及應用
4.(不定項選擇)有關“治療性克隆”的說法正確的是(　　)
A．可解決臨床上供體器官不足和器官移植后免疫排斥問題
B．其核心技術(shù)是胚胎干細胞培養(yǎng)技術(shù)
C．胚胎干細胞可以克隆出不同組織細胞的根本原因是基因的選擇性表達
D．中國政府既反對生殖性克隆人，也反對治療性克隆
5．[經(jīng)典高考]下圖表示通過核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動物(二倍體)的流程。
回答下列問題：
(1)圖中A表示正常細胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為______________。過程①表示去除細胞核，該過程一般要在卵母細胞培養(yǎng)至適當時期再進行，去核時常采用________________的方法。②代表的過程是______________。
(2)經(jīng)過多次傳代后，供體細胞中__________的穩(wěn)定性會降低。因此，選材時必須關注傳代次數(shù)。
(3)若獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是________________________________________。
(4)與克隆羊“多莉”培養(yǎng)成功一樣，其他克隆動物的成功獲得也證明了________________________________________________________________________。
[題后反思]　(1)克隆技術(shù)形成重組細胞發(fā)育成一個新個體，體現(xiàn)了動物細胞核的全能性而非動物細胞的全能性。
(2)克隆屬于無性繁殖，產(chǎn)生新個體的性別、絕大多數(shù)性狀與供核親本一致。
(3)核移植技術(shù)獲得的動物與供核動物性狀不完全相同：
①克隆動物絕大部分DNA來自于供體細胞核，但其核外線粒體中的DNA主要來自于受體卵細胞。
②性狀是基因與環(huán)境共同作用的結(jié)果。供核動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同，其性狀也不可能和供核動物完全相同。
③在個體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變，產(chǎn)生供核動物沒有的性狀。
6．科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過乳腺生物反應器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線如圖。
(1)由過程①獲得的A為___________________________________________________。
(2)在核移植之前，必須先去掉受體卵母細胞的核，目的是____________________________。受體應選用________期卵母細胞。
(3)進行胚胎移植時，代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生__________，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。
(4)采用胎兒成纖維細胞進行轉(zhuǎn)基因體細胞克隆，理論上可獲得無限個轉(zhuǎn)基因綿羊，這是因為________________________________________________________________________。
考點二　動物細胞融合和單克隆抗體的制備
任務驅(qū)動·探究突破
任務1　比較植物體細胞雜交與動物細胞融合的不同點
植物體細胞雜交 動物細胞融合
原理 細胞膜的流動性、 細胞的全能性 ____________
過程 細胞A、B 　 ↓去壁 原生質(zhì)體A、B 　 ↓融合 融合的原生質(zhì)體 　 ↓再生壁 雜種細胞 　 　　　↓植物組織培養(yǎng) 雜種植株 細胞A、B 　↓融合 雜交細胞 ↓有絲分裂 多個相同雜交細胞
相關酶 ____________ 胰蛋白酶或膠原蛋白酶
融合 方法 物理法：電融合法、離心法等；化學法：聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2＋—高pH融合法等 除物理法和化學法外，還可以用滅活病毒誘導法
結(jié)果 ________ ________
意義 ________________ 突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能
任務2　據(jù)圖完成下列各題
　圖1中，a、b分別為骨髓瘤細胞和已免疫的B淋巴細胞，圖2為單克隆抗體制備的流程(順序已被打亂)。
(1)由圖1分析：①誘導a、b兩種細胞融合的方法有聚乙二醇(PEG)融合法、________、電融合法等；②a、b兩種細胞可發(fā)生融合，融合的原理是______________________；③融合后形成圖中的d細胞，d細胞的特點是________________________；④由d細胞產(chǎn)生的抗體與普通血清抗體相比，具有__________________________等特點。
(2)圖2 B中小鼠注射的物質(zhì)是________，其目的是刺激機體發(fā)生免疫應答，從而產(chǎn)生效應B細胞(漿細胞)。
(3)在獲取C細胞時，被篩選淘汰的細胞類型有________________________，只有融合的__________才能生長。
(4)請用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過程的順序連接起來：
[師說拓展]　單克隆抗體制備過程的關鍵分析
(1)對動物免疫的原因：B淋巴細胞要經(jīng)過免疫過程，即接觸抗原，增殖分化為有特異性免疫功能的B淋巴細胞。
(2)雜交瘤細胞具備雙親的遺傳物質(zhì)，不僅具有漿細胞產(chǎn)生特異性抗體的能力，還具有骨髓瘤細胞在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的能力，可以克服單純B淋巴細胞不能無限增殖的缺點，而大量生產(chǎn)單克隆抗體。
考向分類·對點落實
考向一 結(jié)合動物細胞融合知識，考查歸納與概括能力
1.[2022·山東模擬]下列關于單克隆抗體制備的說法，正確的是(　　)
A．將特定抗原注射到小鼠體內(nèi)，可以從小鼠血清中獲得單克隆抗體
B．經(jīng)特定抗原免疫過的B淋巴細胞在體外培養(yǎng)時可分泌單克隆抗體
C．誘導B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后，發(fā)生融合的細胞均為雜交瘤細胞
D．篩選岀雜交瘤細胞后，需利用特定抗原再次篩選分泌單克隆抗體的細胞
2．[2019·江蘇卷](不定項選擇)如圖為雜交瘤細胞制備示意圖。骨髓瘤細胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT－)，在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述正確的是(　　)
A．可用滅活的仙臺病毒誘導細胞融合
B．兩兩融合的細胞都能在HAT培養(yǎng)液中生長
C．雜交瘤細胞需進一步篩選才能用于生產(chǎn)
D．細胞膜的流動性是細胞融合的基礎
考向二 結(jié)合單克隆抗體的特點，考查科學思維能力
3.[2022·天津模擬]細胞毒素可有效殺傷腫瘤細胞，但沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害。如圖為特異性殺死腫瘤細胞的過程，圖中抗體是利用單克隆抗體技術(shù)制備的。下列敘述正確的是(　　)
A．單克隆抗體制備過程中需要使用TaqDNA聚合酶
B．抗體與細胞毒素結(jié)合增加了細胞毒素的殺傷力
C．細胞毒素具有與腫瘤細胞膜上的糖蛋白發(fā)生特異性結(jié)合的能力
D．溶酶體破裂導致其中的水解酶釋放，加速了腫瘤細胞凋亡
4．[江蘇卷]牛雄性胚胎中存在特異性H－Y 抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H－Y 單克隆抗體，篩選胚胎進行移植，以利用乳腺生物反應器進行生物制藥。下列相關敘述正確的是(　　)
A．H－Y單克隆抗體由骨髓瘤細胞分泌
B．應選用原腸胚做雌雄鑒別
C．鑒別后的雄性胚胎可直接做胚胎移植
D．用H－Y抗原免疫母牛可獲得相應抗體
5．(不定項選擇)如圖是單克隆抗體制備流程的簡明示意圖。下列有關敘述，正確的是(　　)
A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的細胞毒性T細胞
B．②中使用聚乙二醇有利于雜交瘤細胞的形成
C．③同時具有脾臟細胞和鼠骨髓瘤細胞的特性
D．④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細胞群
6．某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫五次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如下圖所示。
若要制備雜交瘤細胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導細胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細胞?；卮鹣铝袉栴}：
(1)制備融合所需的B淋巴細胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過________次免疫后才能有符合要求的。達到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細胞的是________小鼠，理由是________________________________________________________________________。
(2)細胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交瘤細胞外，可能還有__________________________________________________，體系中出現(xiàn)多種類型細胞的原因是________________________________________________________________________。
(3)雜交瘤細胞中有__________個細胞核。
(4)未融合的B淋巴細胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是________________________________________________________________________。
[題后反思]　比較制備單克隆抗體過程中的幾種細胞
細胞 特點
漿細胞 能產(chǎn)生單一抗體，但不能無限增殖
骨髓瘤細胞 能無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體
雜交瘤細胞 既能產(chǎn)生單一抗體，又能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖
[網(wǎng)絡建構(gòu)提升]
[長句應答必備]
1．動物細胞融合需要誘導。
2．動物細胞培養(yǎng)需要各種營養(yǎng)成分及血清。
3．動物細胞融合可用于單克隆抗體的制備。
4．產(chǎn)生單克隆抗體的細胞是雜交瘤細胞，它既能產(chǎn)生單克隆抗體，又能無限增殖。
[等級選考研考向]
1．[2020·天津卷]在克隆哺乳動物過程中，通常作為核移植受體細胞的是去核的(　　)
A．卵原細胞 B．初級卵母細胞
C．次級卵母細胞 D．卵細胞
2．[2020·浙江7月]下列關于病毒的敘述，錯誤的是　(　　)
A．有的病毒經(jīng)滅活處理后，可用于細胞工程中介導動物細胞的融合
B．適當增加機體內(nèi)參與免疫的細胞數(shù)量與活性，可提高對新型冠狀病毒的抵御能力
C．在某人的分泌物中檢測到新型冠狀病毒，推測該病毒的增殖不依賴于宿主細胞
D．用高溫高壓處理病毒使其失去感染能力，原因之一是病毒的蛋白質(zhì)發(fā)生了熱變性
3．[2020·江蘇卷]新型冠狀病毒可通過表面的刺突蛋白(S蛋白)與人呼吸道黏膜上皮細胞的ACE2受體結(jié)合，侵入人體，引起肺炎。圖1為病毒侵入后，人體內(nèi)發(fā)生的部分免疫反應示意圖。單克隆抗體可阻斷病毒的粘附或入侵，故抗體藥物的研發(fā)已成為治療新冠肺炎的研究熱點之一。圖2為篩選、制備抗S蛋白單克隆抗體的示意圖。請據(jù)圖回答下列問題：
(1)圖1中人體內(nèi)抗原遞呈細胞吞噬病毒，并將病毒的抗原暴露在細胞表面，被________細胞表面的受體識別后激活該細胞。
(2)B細胞識別入侵的病毒后，在淋巴因子作用下，經(jīng)過細胞的________，形成________細胞。
(3)為判斷疑似患者是否為新型冠狀病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原學檢查，檢測病毒的________；采集血液樣本主要用于血清學檢查，檢測____________________。
(4)據(jù)圖2所示，研制抗S蛋白單克隆抗體，需先注射________免疫小鼠以激活小鼠的免疫細胞，再提取激活的B細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養(yǎng)基篩選獲得________細胞。因為同一種抗原可能激活________細胞，還需繼續(xù)篩選才能獲得分泌單克隆抗體的細胞株。
[國考真題研規(guī)律]
4．[2020·全國卷Ⅰ]為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學以小鼠甲為實驗材料設計了以下實驗流程。
回答下列問題：
(1)上述實驗前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是________________________________________________________________________。
(2)寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細胞懸液的主要實驗步驟：________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞，需要進行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于________，使用該培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)的結(jié)果是________________。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是________________________________________________________________________。
(4)若要使能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞大量增殖，可采用的方法有________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________(答出2點即可)。
5．[全國卷Ⅲ]2018年《細胞》期刊報道，中國科學家率先成功地應用體細胞對非人靈長類動物進行克隆，獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”?；卮鹣铝袉栴}：
(1)“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程，核移植是指______________________________________________________。通過核移植方法獲得的克隆猴，與核供體相比，克隆猴體細胞的染色體數(shù)目________(填“減半”“加倍”或“不變”)。
(2)哺乳動物的核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植，胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度________(填“大于”或“小于”)體細胞核移植，其原因是________________________________________________________________________。
(3)在哺乳動物核移植的過程中，若分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體，通常，所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數(shù)目________(填“相同”或“不同”)，性染色體組合________(填“相同”或“不同”)。
6．[2018·全國卷Ⅱ，節(jié)選]某種熒光蛋白(GFP)在紫外光或藍光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細胞中目的基因的表達。某科研團隊將某種病毒的外殼蛋白(L1)基因連接在GFP基因的5′末端，獲得了L1－GFP融合基因(簡稱為甲)，并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點的示意圖如下，圖中E1～E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。
回答下列問題：
(2)將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細胞后，若在該細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了________和________過程。
(3)為了獲得含有甲的牛，該團隊需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細胞的________移入牛的________中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。
課堂互動探究案4
考點一
【任務驅(qū)動·探究突破】
任務1　胰蛋白酶　胰蛋白酶　(1)液體　動物血清或血漿　(2)單個細胞　分離　接觸抑制　(3)pH　有氧呼吸
任務2　細胞增殖　動物細胞核的全能性　原代　胰蛋白酶　傳代　去核卵母細胞　重組細胞　早期胚胎　細胞群　克隆動物
【考向分類·對點落實】
1．解析：連續(xù)細胞系的細胞其核型已發(fā)生改變；一個祖細胞培養(yǎng)形成的細胞群才為一個克?。晃唇?jīng)克隆化培養(yǎng)的細胞系細胞可能是不同細胞分裂形成的，其性狀可能不同。
答案：B
2．解析：動物細胞培養(yǎng)需要無毒無菌的環(huán)境，甲過程指從實驗小鼠身上取下皮膚組織，該過程需要對小鼠進行消毒處理，A正確；乙過程表示將得到的皮膚組織分散成單個細胞制備成細胞懸液，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶進行處理，B正確；丙過程表示原代培養(yǎng)，此時的細胞仍能保持正常的二倍體核型，C錯誤；丁過程表示傳代培養(yǎng)，此時得到的細胞會克服細胞壽命的自然極限，獲得不死性，這些細胞已經(jīng)發(fā)生突變，正在朝著等同于癌細胞的方向發(fā)展，D正確。
答案：ABD
3．解析：(1)人工合成的植物激素類似物叫植物生長調(diào)節(jié)劑。(2)細胞癌變的機理是原癌基因和抑癌基因發(fā)生突變，導致正常細胞分裂失控而發(fā)生癌變。(3)①從表中可以看出實驗的自變量為青鮮素濃度，在第二步中分別向各組加入等量10、30、90、270、810 mg/L的青鮮素溶液。
第三步：培養(yǎng)一段時間后，取樣制成臨時裝片，用顯微鏡觀察并記錄細胞分裂中期的變異細胞數(shù)目和正常細胞數(shù)目，統(tǒng)計其變異細胞的百分比。
最后得出結(jié)論：濃度在10 mg/L以下沒有影響，大于90 mg/L毒性增加明顯。
②檢查青鮮素的毒性，通常用變異細胞占全部正常細胞的百分數(shù)作為指標，培養(yǎng)液中特殊的成分是動物血清。
答案：(1)植物生長調(diào)節(jié)劑　(2)原癌基因和抑癌基因　(3)第二步：等量的不同濃度(10、30、90、270、810mg/L)的青鮮素溶液　第三步：記錄變異細胞的數(shù)目　統(tǒng)計變異細胞百分比　結(jié)論：低濃度的青鮮素毒性很小，濃度90 mg/L以上毒性增加明顯　變異細胞占全部培養(yǎng)細胞的百分數(shù)(變異細胞比例)　動物血清
4．解析：用患者自身的胚胎干細胞克隆器官，可以克服供體器官不足，器官移植后又不會發(fā)生免疫排斥反應；治療性克隆的核心是胚胎干細胞的培養(yǎng)；胚胎干細胞克隆出不同組織細胞屬于細胞分化，細胞分化是基因的選擇性表達；中國政府禁止生殖性克隆人，但不反對治療性克隆。
答案：ABC
5．解析：(1)提供體細胞的供體可能為雌性，也可能為雄性，因此圖中A(正常細胞核)的性染色體組成為XX或XY。常采用顯微操作去核法來去除卵母細胞的細胞核。②過程表示將早期胚胎移入受體，其過程為胚胎移植。(2)取供體動物的體細胞培養(yǎng)，一般選用傳代10代以內(nèi)的細胞，因為10代以內(nèi)的細胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了供體細胞正常的遺傳基礎。超過10代繼續(xù)培養(yǎng)，則其遺傳物質(zhì)(或核型)的穩(wěn)定性會降低。(3)克隆動物的細胞核基因來自供體，因此大部分性狀與供體相同，但細胞質(zhì)基因來源于受體(或提供卵母細胞的個體)，即卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的性狀產(chǎn)生影響，這就決定了克隆動物的性狀與供體不完全相同。(4)克隆動物的培育采用的是核移植技術(shù)，核移植技術(shù)的原理是已分化的體細胞的細胞核具有全能性。
答案：(1)XX或XY　顯微操作　胚胎移植　(2)遺傳物質(zhì)　(3)卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的性狀產(chǎn)生影響　(4)動物已分化體細胞的細胞核具有全能性
6．解析：(1)根據(jù)題意可知，要將人凝血因子IX基因?qū)刖d羊胎兒成纖維細胞，必須構(gòu)建基因表達載體，所以由過程①獲得的A為基因表達載體。(2)在核移植之前，保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細胞，必須先去掉受體卵母細胞的核。受體應選用減數(shù)分裂Ⅱ(MⅡ)期的卵母細胞。(3)進行胚胎移植時，代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。(4)采用胎兒成纖維細胞進行轉(zhuǎn)基因體細胞克隆，理論上可獲得無限個轉(zhuǎn)基因綿羊，這是因為整合有目的基因的成纖維細胞可進行傳代培養(yǎng)。
答案：(1)含目的基因的表達載體　(2)保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細胞　MⅡ　(3)免疫排斥反應　(4)整合有目的基因的成纖維細胞可進行傳代培養(yǎng)
考點二
【任務驅(qū)動·探究突破】
任務1　細胞膜的流動性、細胞增殖　纖維素酶和果膠酶　雜種植株　雜交細胞　克服了遠緣雜交的不親和性，獲得雜種植株
任務2　(1)滅活病毒誘導法　細胞膜的流動性　既能無限增殖，又能產(chǎn)生特定的抗體　特異性強、靈敏度高、并可大量制備　(2)特定抗原　(3)未融合細胞、同種細胞相互融合后的細胞　雜交瘤細胞
(4)
【考向分類·對點落實】
1．解析：單克隆抗體是指由單個B淋巴細胞進行無性繁殖形成的細胞系所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體，A錯誤；經(jīng)過特定抗原免疫過的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞雜交融合后，接著利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，再進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細胞，然后再進行體外培養(yǎng)或注入小鼠腹腔培養(yǎng)獲得單克隆抗體，B錯誤、D正確；誘導B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后，發(fā)生融合的細胞除了雜交瘤細胞外，也可能是B淋巴細胞相互融合的細胞或骨髓瘤細胞相互融合的細胞，C錯誤。
答案：D
2．解析：滅活的仙臺病毒是誘導動物細胞融合的方法之一，A正確；骨髓瘤細胞之間融合因為都缺少次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT－)而不能生長，B錯誤；第二次篩選能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，C正確；細胞融合體現(xiàn)了細胞膜的流動性這一結(jié)構(gòu)特點，D正確。
答案：ACD
3．解析：單克隆抗體制備過程中不需要使用TaqDNA聚合酶，A錯誤；抗體與細胞毒素結(jié)合增加了細胞毒素的定向性，細胞毒素的殺傷力并未改變，B錯誤；細胞毒素殺傷腫瘤細胞沒有特異性，能與腫瘤細胞膜上的糖蛋白發(fā)生特異性結(jié)合的是抗體，C錯誤；溶酶體破裂使其中的多種水解酶釋放出來，破壞細胞結(jié)構(gòu)，加速腫瘤細胞凋亡，D正確。
答案：D
4．解析：單克隆抗體由雜交瘤細胞分泌，A錯誤；做雌雄性別鑒別時應選擇囊胚期的滋養(yǎng)層細胞，B錯誤；由于是利用乳腺生物反應器進行生物制藥，則鑒別后的雌性胚胎可直接做胚胎移植，雄性胚胎沒有實用價值，C錯誤；用H－Y抗原免疫母牛，使其體內(nèi)產(chǎn)生體液免疫，產(chǎn)生相應的漿細胞，從而獲得相應抗體，D正確。
答案：D
5．解析：①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的B淋巴細胞；②中使用聚乙二醇或滅活的病毒等，有利于雜交瘤細胞的形成；③同時具有漿細胞和骨髓瘤細胞的特性；④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細胞群。
答案：BD
6．解析：(1)據(jù)圖分析，第四次免疫后，X、Y、Z小鼠的血清抗體效價均達到16 000以上，小鼠Y的B淋巴細胞產(chǎn)生抗體效價最高，此時最適用于制備單克隆抗體。(2)融合體系中除了未融合的細胞和雜交瘤細胞之外，還有骨髓瘤細胞和B淋巴細胞的自身融合產(chǎn)物，由于細胞膜具有流動性，且誘導之后的細胞融合不具有特異性，故體系中會出現(xiàn)多種類型的細胞。(3)兩個細胞的細胞核融合成一個細胞核標志著融合的完成，雜交瘤細胞中有一個細胞核。(4)未融合的B淋巴細胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，仍然不是能惡性增殖的細胞，同時正常細胞的分裂次數(shù)是有限的，最終不能存活。
答案：(1)四　Y　Y小鼠的血清抗體效價最高　(2)B淋巴細胞相互融合形成的細胞，骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞　細胞融合是隨機的，且融合率達不到100%　(3)1　(4)正常細胞不能無限增殖
課堂總結(jié)　網(wǎng)絡聚焦大概念
網(wǎng)絡建構(gòu)提升
①動物細胞融合　②單克隆抗體的制備
歷屆真題　分類集訓培素養(yǎng)
1．解析：克隆哺乳動物時，通常作為核移植受體細胞的是去核的次級卵母細胞，C正確。
答案：C
2．解析：動物細胞工程中，可利用滅活的病毒誘導動物細胞融合，A正確；新型冠狀病毒作為病原體，可激發(fā)機體特異性免疫，適當增加機體內(nèi)參與免疫的細胞數(shù)量和活性，例如注射免疫活性物質(zhì)，刺激機體免疫細胞活化，可提高機體清除病原體的能力，B正確；病毒為專一性活細胞內(nèi)寄生生物，只能在宿主細胞內(nèi)進行增殖，C錯誤；高溫高壓滅菌的原理之一是蛋白質(zhì)在高溫條件下變性，其空間結(jié)構(gòu)被破壞，活性徹底喪失，使得病原體失去侵染、繁殖和致病的能力，D正確。
答案：C
3．解析：(1)圖1中，抗原遞呈細胞吞噬病毒，并將病毒抗原呈遞給T細胞，后者識別抗原后被激活，分泌淋巴因子。(2)B細胞識別入侵的病毒后，在淋巴因子作用下，經(jīng)過細胞的增殖、分化，形成漿細胞和記憶細胞。(3)為判斷疑似患者是否為新型冠狀病毒感染者，采集鼻咽拭子用于病原學檢查時，檢測的是病毒的核酸；采集血液樣本用于血清學檢查時，檢測的是抗新冠病毒抗體。(4)為了誘導小鼠產(chǎn)生能夠分泌抗S蛋白抗體的B淋巴細胞，實驗時需先給小鼠注射S蛋白，再提取激活的B細胞與骨髓瘤細胞融合，用HAT培養(yǎng)基篩選可獲得雜交瘤細胞。因為同一種抗原可能激活多種B淋巴細胞，還需繼續(xù)篩選才能獲得分泌單克隆抗體的細胞株。
答案：(1)T　(2)增殖、分化　漿細胞和記憶　(3)核酸　抗新型冠狀病毒抗體　(4)刺突蛋白(或S蛋白)　雜交瘤　多種B
4．解析：(1)實驗前給小鼠甲注射病毒A，其目的是刺激機體發(fā)生免疫反應，從而產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細胞。(2)制備單細胞懸液的主要實驗步驟：從健康小鼠體內(nèi)取出組織塊，剪碎，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理一段時間，這樣組織就會分散成單個細胞，然后用培養(yǎng)液將分散的細胞稀釋制成單細胞懸液。(3)圖中篩選1采用特定的選擇培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基上，未融合的細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生存。圖中篩選2含多次篩選，利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，就可獲得能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。(4)要使能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞大量增殖，可將雜交瘤細胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。
答案：(1)誘導小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細胞　(2)取小鼠甲脾臟剪碎，用胰蛋白酶處理使其分散成單個細胞，加入培養(yǎng)液制成單細胞懸液　(3)選擇培養(yǎng)基　只有雜交瘤細胞能夠生存　抗原與抗體的反應具有特異性　(4)將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)
5．解析：(1)核移植是指將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個胚胎最后發(fā)育成為一個動物個體；通過核移植方法獲得的克隆猴的細胞核來自供體，因此克隆猴體細胞的染色體數(shù)目和供體一致。(2)動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，因此胚胎細胞核移植的難度小于體細胞核移植。(3)哺乳動物雌性個體和雄性個體的體細胞中常染色體相同，性染色體前者是XX，后者是XY，因此分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體，通常所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數(shù)目相同，性染色體組合不同。
答案：(1)將動物的一個細胞核，移入一個已去掉細胞核的卵母細胞中　不變　(2)小于　胚胎細胞分化程度低，恢復全能性相對容易　(3)相同　不同
6．解析：(2)構(gòu)建的真核表達載體P1中含有GFP基因，而GFP基因的表達產(chǎn)物“某種熒光蛋白(GFP)”在紫外光或藍光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光。若在導入P1的牛皮膚細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了表達，基因的表達過程包括轉(zhuǎn)錄和翻譯。(3)若要獲得含有甲的牛，可采用核移植技術(shù)，即將能夠產(chǎn)生綠色熒光細胞的細胞核移入牛的去核卵母細胞中獲得重組細胞，并將該重組細胞在體外培養(yǎng)成重組胚胎，再經(jīng)過胚胎移植等獲得含有甲的牛。
答案：(2)轉(zhuǎn)錄　翻譯　(3)細胞核　去核卵母細胞

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