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第1課時(shí)
發(fā)酵工程的培養(yǎng)基與無(wú)菌技術(shù)
課標(biāo)要求
1.概述培養(yǎng)基的類型及用途。
2.闡明無(wú)菌技術(shù)的操作方法。
3.概述利用平板劃線法和稀釋涂布平板法，進(jìn)行微生物分離和純化。
考點(diǎn)一　發(fā)酵工程的培養(yǎng)基
考點(diǎn)二　發(fā)酵工程的無(wú)菌技術(shù)
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考點(diǎn)一
發(fā)酵工程的培養(yǎng)基
培養(yǎng)基
(1)概念：主要是指為人工培養(yǎng)微生物等而制備的，適合微生物等_____
的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。
歸納 夯實(shí)必備知識(shí)
生長(zhǎng)、
繁殖或積累代謝產(chǎn)物
(2)類型
①按成分分類
培養(yǎng)基種類 成分 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 用途
天然培養(yǎng)基 或 以及它們的提取物或粗消化物 取材便利、____ 、配制簡(jiǎn)便 營(yíng)養(yǎng)成分難以控制，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性較差 工業(yè)化生產(chǎn)
合成培養(yǎng)基 準(zhǔn)確稱量的高純度_________ 加_______ 化學(xué)成分 ，實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性好 配制過程繁瑣，成本較高 研究與育種
動(dòng)植物組織
微生物細(xì)胞
營(yíng)養(yǎng)
豐富
化學(xué)試劑
明確
蒸餾水
②按物理狀態(tài)分類
培養(yǎng)基種類 特點(diǎn) 用途
培養(yǎng)基 不含 ，呈 狀態(tài) 工業(yè)生產(chǎn)
培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基 含 ，呈_____或半固體狀態(tài) 微生物的分離、鑒定，活菌計(jì)數(shù)，菌種保藏
液體
凝固劑
液體
固體
凝固劑(如瓊脂)
固體
③按用途分類： 培養(yǎng)基和特殊培養(yǎng)基
基礎(chǔ)
特殊培養(yǎng)基種類 選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基 培養(yǎng)基
用途 將某種或某類 從混雜的微生物中分離出來(lái) 快速 不同微生物，也用于 和篩選產(chǎn)生某種________ 的菌種 用于培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求比較苛刻的 微生物。可增加所需微生物的
_____
微生物
分類鑒定
分離
代謝產(chǎn)物
異養(yǎng)
數(shù)量
加富
(3)成分
成分 含義 作用 來(lái)源
碳源 ___________ _______ 構(gòu)成生物體的細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì) 無(wú)機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)碳源：糖類、牛肉膏等
氮源 ___________ _______ _______________________ 無(wú)機(jī)氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：蛋白胨等
提供碳元素的物質(zhì)
提供氮元素的物質(zhì)
合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)
無(wú)機(jī)鹽 為微生物提供除碳、氮之外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素 為微生物提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH等 無(wú)機(jī)化合物：KH2PO4、
K2HPO4、NaCl等
水 生物體含量最高的無(wú)機(jī)化合物 良好的溶劑，參與化學(xué)反應(yīng)等 培養(yǎng)基、代謝產(chǎn)物
考向　培養(yǎng)基配制及其作用
1.(多選)現(xiàn)有兩種固體培養(yǎng)基，已知其配制時(shí)所加的成分和含量如下表，假設(shè)用這兩種培養(yǎng)基分別去分離土壤中的兩種微生物，甲、乙適合分離的微生物是
突破 強(qiáng)化關(guān)鍵能力
成分 KH2PO4 MgSO4· 7H2O NaCl CaSO4· 2H2O CaCO3 葡萄糖 純淀粉
甲培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% 0.5% 2%
乙培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% － －
成分 KH2PO4 MgSO4· 7H2O NaCl CaSO4· 2H2O CaCO3 葡萄糖 純淀粉
甲培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% 0.5% 2%
乙培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% － －
A.甲培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌
B.甲培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌
C.乙培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌
D.乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌
√
√
成分 KH2PO4 MgSO4· 7H2O NaCl CaSO4· 2H2O CaCO3 葡萄糖 純淀粉
甲培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% 0.5% 2%
乙培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% － －
甲培養(yǎng)基中含有的葡萄糖和淀粉是有機(jī)物，可以作為碳源和能源，適用于異養(yǎng)微生物生長(zhǎng)，由此推出該培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型的自生固氮菌，A錯(cuò)誤，B正確；
乙培養(yǎng)基中不含有機(jī)碳源，不含氮源，可用來(lái)分離培養(yǎng)自養(yǎng)型的自生固氮菌，C正確，D錯(cuò)誤。
2.在微生物培養(yǎng)的過程中，需要通過選擇培養(yǎng)或鑒別培養(yǎng)的方法來(lái)篩選出目標(biāo)菌種。下列與之相關(guān)的敘述中，不正確的是
A.纖維素分解菌能夠分解剛果紅染料，從而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈
B.尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘保瑥亩狗蛹t指示劑變紅
C.在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應(yīng)抗性的菌株
D.在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的乳酸菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)“溶鈣圈”
√
纖維素分解菌能夠分解纖維素，在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，A錯(cuò)誤；
尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘保古囵B(yǎng)基呈堿性，從而使酚紅指示劑變紅，B正確。
3.(2023·江蘇無(wú)錫高三模擬)培養(yǎng)微生物需要提供適宜的培養(yǎng)基。下列關(guān)于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是
A.培養(yǎng)基為目標(biāo)微生物提供適宜的生長(zhǎng)環(huán)境
B.培養(yǎng)基的成分需根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)而定
C.培養(yǎng)基需滿足各種微生物生長(zhǎng)繁殖的需求
D.培養(yǎng)基通常需包含水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
√
培養(yǎng)基中含有微生物生長(zhǎng)需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還能滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)環(huán)境的要求，A正確；
配制培養(yǎng)基時(shí)，需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要，B正確；
培養(yǎng)基是根據(jù)不同微生物的生長(zhǎng)繁殖需求進(jìn)行配制的，不能滿足各種微生物生長(zhǎng)繁殖的需求，C錯(cuò)誤。
考點(diǎn)二
發(fā)酵工程的無(wú)菌技術(shù)
1.發(fā)酵工程的滅菌方法
(1)化學(xué)試劑滅菌法：采用 滅菌的方法。一般不用于培養(yǎng)基滅菌。
(2)射線滅菌法：利用紫外線等產(chǎn)生的 進(jìn)行滅菌的方法。
(3)干熱滅菌法：包括 滅菌法和 法等。
(4)濕熱滅菌法：利用 進(jìn)行滅菌的方法。
(5)過濾除菌法：通過 從而達(dá)到除菌目的的方法。
歸納 夯實(shí)必備知識(shí)
滅菌劑
高能粒子
干熱空氣
火焰灼燒
飽和蒸汽
過濾阻留微生物
2.發(fā)酵工程的滅菌設(shè)備
(1)電熱鼓風(fēng)干燥箱： 滅菌設(shè)備常用于空的 、金屬用具和其他耐高溫的物品的滅菌。
(2)高壓蒸汽滅菌鍋： 滅菌設(shè)備，其使用包括加水、 、加熱、排空冷空氣、 、出鍋等步驟。
(3)空氣除菌設(shè)備。
干熱
玻璃器皿
濕熱
裝鍋
保溫保壓
3.發(fā)酵工程的無(wú)菌操作器具
(1)接種器具
①接種：是指在 條件下將微生物接入 的操作過程。
②常用的工具有 等，在涂布平板接種時(shí)要用 ，穿刺接種時(shí)要用接種針，在 或在平板培養(yǎng)基上進(jìn)行 時(shí)要用接種環(huán)。
無(wú)菌
培養(yǎng)基
玻璃涂布器、接種針、接種環(huán)
玻璃涂布器
斜面接種
劃線接種
(2)轉(zhuǎn)移器具
①移液管：用來(lái)準(zhǔn)備移取一定 的溶液或 化學(xué)試劑的量器。
②微量取液器：取液量 時(shí)使用，分為固定容量的和可調(diào)容量的兩種。
③超凈工作臺(tái)：是一種經(jīng)過空氣凈化而形成 操作環(huán)境的設(shè)備。優(yōu)點(diǎn)是操作 。
體積
分裝
很少
高潔凈
方便
4.微生物接種和傳代的無(wú)菌技術(shù)
(1)穿刺接種：常用于 微生物。
(2)斜面接種：常用的菌種傳代和低溫下 菌種的方法。
(3)斜面接種和培養(yǎng)酵母菌
①主要目的： 、擴(kuò)大培養(yǎng)和 等。
②主要步驟：準(zhǔn)備接種→ →試管口滅菌→挑取少許菌種→
→培養(yǎng)。
厭氧
保存
菌種轉(zhuǎn)移
保存純凈菌種
接種環(huán)滅菌
劃線接種
5.微生物分離、純化和培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)
(1)兩種純化方法的比較
項(xiàng)目 平板劃線法 稀釋涂布平板法
分離結(jié)果
關(guān)鍵操作 接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線 ①一系列的梯度稀釋；②涂布平板操作
接種用具 接種環(huán) 涂布器
優(yōu)點(diǎn) 可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離 可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征
缺點(diǎn) 不能計(jì)數(shù) 操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板
共同點(diǎn) 都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無(wú)菌操作；都會(huì)在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落；都可用于觀察菌落特征
(2)酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟
15~20 g瓊脂
濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)
干熱滅菌
酒精燈火焰
灼燒滅菌
平板劃線法
恒溫培養(yǎng)箱
28
①平板冷凝后，要將平板倒置的原因是什么？
提示　因?yàn)槠桨謇淠螅笊w上會(huì)凝結(jié)水珠，平板倒置后，既可避免培養(yǎng)基表面的水分過快地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。
②在接種前隨機(jī)取若干個(gè)滅菌后的未接種的平板，先行培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是 。
檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格
③平板劃線第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，這樣做的目的是什么？
提示　能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。
④平板劃線時(shí)最后一次劃線為何不能與第一次劃線相連？
提示　最后一次劃線已經(jīng)將酵母菌稀釋成單個(gè)細(xì)胞，如果與第一次劃線相連，則增加了酵母菌數(shù)目，得不到純化的效果。
(3)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
①分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣? ，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過程中起到 作用。
②統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目一般用 法。
脲酶
催化
涂布平板
③計(jì)數(shù)：統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的1個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中 個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
④公式： 。
1
30～300
(平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積)×稀釋倍數(shù)
延伸應(yīng)用
篩選能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)的培養(yǎng)基成分如下表所示：
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 瓊脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至
1 000 mL
(1)該培養(yǎng)基是如何實(shí)現(xiàn)對(duì)分解尿素的細(xì)菌的篩選的？
提示　該培養(yǎng)基中唯一氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能夠分解尿素，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，會(huì)因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)繁殖，所以用該培養(yǎng)基能夠篩選出分解尿素的細(xì)菌。
延伸應(yīng)用
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 瓊脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至
1 000 mL
(2)如何證明該選擇培養(yǎng)基的確起到了篩選作用？
提示　同時(shí)設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基并進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目；若牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，則證明了選擇培養(yǎng)基的確起到了篩選作用。
延伸應(yīng)用
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 瓊脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至
1 000 mL
(3)如何證明所用的選擇培養(yǎng)基沒有受到環(huán)境污染？
提示　將未接種的上述培養(yǎng)基與接種的上述培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng)，觀察是否有菌落的產(chǎn)生；若未接種的培養(yǎng)基無(wú)菌落產(chǎn)生，則證明培養(yǎng)基沒有受到環(huán)境污染。
延伸應(yīng)用
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 瓊脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至
1 000 mL
(4)若甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的該細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。
①甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果是否真實(shí)可靠？為什么？
提示　不可靠。為增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在同一稀釋度下涂布至少3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值。
延伸應(yīng)用
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 瓊脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至
1 000 mL
②乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理是否合理？為什么？
提示　不合理。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致的情況，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)過程中可能的影響因素，找出差異的原因，需重新實(shí)驗(yàn)，而不能簡(jiǎn)單地舍棄。
考向一　發(fā)酵工程滅菌的方法設(shè)備與無(wú)菌技術(shù)操作器具
4.下列有關(guān)使用高壓蒸汽滅菌鍋的操作，錯(cuò)誤的是
A.加水時(shí)，水面應(yīng)與三角擱架平齊
B.加蓋時(shí)，將排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)
C.加熱時(shí)，待冷空氣完全排盡后關(guān)上排氣閥
D.切斷電源后，打開排氣閥使壓力表降到零后開蓋
突破 強(qiáng)化關(guān)鍵能力
√
在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，加水時(shí)的水面應(yīng)與三角擱架平齊，A正確；
加蓋時(shí)，應(yīng)該將排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，B正確；
加熱時(shí)，應(yīng)該等冷空氣完全排盡后再關(guān)上排氣閥，C正確；
切斷電源后，應(yīng)該等壓力表降到零后再打開排氣閥并開蓋，D錯(cuò)誤。
5.微生物培養(yǎng)時(shí)常利用無(wú)菌技術(shù)避免雜菌的污染，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是
A.配制好的培養(yǎng)基應(yīng)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌
B.實(shí)驗(yàn)中避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸
C.接種前后的接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒
D.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)實(shí)驗(yàn)室噴灑石碳酸同時(shí)配合紫外線照射
√
對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法，A錯(cuò)誤；
為避免雜菌污染，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸，B正確；
為了防止雜菌污染，每次接種前后，接種環(huán)都要進(jìn)行灼燒滅菌，C正確；
紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)，密閉空間內(nèi)的空氣常采用紫外線照射消毒，噴灑石碳酸同時(shí)配合紫外線照射可提高對(duì)密閉空間的消毒效果，D正確。
考向二　微生物接種和傳代、分離、純化和培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)
6.(2023·江蘇南通高三模擬)下圖為微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的有關(guān)操作，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是
A.步驟①中，需將接種工具灼燒至變紅，以殺滅雜菌
B.步驟②中，將接種工具冷卻時(shí)不宜距酒精燈火焰太遠(yuǎn)
C.圖中接種方法的目的是使菌種逐漸稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后獲得單個(gè)菌落
D.接種后應(yīng)將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)后可以根據(jù)結(jié)果進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)
√
步驟②中，將接種工具冷卻時(shí)不宜距酒精燈火焰太遠(yuǎn)，防止受到雜菌污染，B正確；
圖中所示的接種方法是平板劃線法，目的是使接種的菌種逐漸稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后獲得由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落，C正確；
圖示的平板劃線法不能用于微生物的計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。
步驟①中，接種前灼燒接種環(huán)至變紅，目的是殺滅接種環(huán)上可能引起污染的微生物，A正確；
7.(2018·江蘇，31)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問題：
(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的_____，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行_______________
滅菌。
pH
高壓蒸汽(濕熱)
配制培養(yǎng)基時(shí)，進(jìn)行計(jì)算、稱量、溶解、定容后，需先調(diào)pH再分裝到錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。
(2)取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約________(在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇)的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。
50 ℃
倒平板時(shí)的培養(yǎng)基溫度約為50 ℃，冷凝后倒置培養(yǎng)。
(3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有_________。
a.為保證無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌
b.劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落
c.挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量
d.可以通過逐步提高培養(yǎng)基中的甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株
a、b、d
平板劃線時(shí)，接種針、接種環(huán)使用前和每次劃線后都需要進(jìn)行灼燒滅菌，以免造成雜菌污染，a正確；
劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基表面，否則不能形成正常菌落，b正確；
挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)不同的菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中蛋白質(zhì)含量，c錯(cuò)誤；
逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，能篩選出其中的耐受菌，獲得甲醇高耐受菌株，d正確。
(4)步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和______供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1 000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用25×16型血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上_____色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于______，才能達(dá)到每毫升3×109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。
氧氣
無(wú)
30
酵母是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖。酵母擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣等條件。由題中信息“經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色”可知，計(jì)數(shù)室中培養(yǎng)液容積實(shí)際只有0.1÷2＝0.05 mm3。設(shè)5個(gè)中方格中無(wú)色(活細(xì)胞不能被臺(tái)盼藍(lán)染色)的細(xì)胞數(shù)目為x個(gè)，則3×109＝x/5×25×1 000×1 000÷0.05，解得x＝30(個(gè))。
三
重溫高考 真題演練
1.(2021·山東，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是
A.甲菌屬于解脂菌
B.實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源
C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比
D.該平板可用來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力
1
2
3
4
√
5
根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”，說(shuō)明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色，因此甲菌屬于解脂菌，A項(xiàng)正確；
乙菌菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍(lán)色，說(shuō)明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌也可以在培養(yǎng)基上生存，說(shuō)明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B項(xiàng)錯(cuò)誤；
1
2
3
4
5
可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比，更加直觀，C項(xiàng)正確；
可以利用該平板來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標(biāo)可以是菌落周圍深藍(lán)色圈的大小，D項(xiàng)正確。
1
2
3
4
5
2.(2021·山東，20)含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是
A.乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)
B.為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基
C.該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量
D.穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染
1
2
3
4
5
√
從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說(shuō)明了乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)，A正確；
為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用半固體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；
該實(shí)驗(yàn)可以根據(jù)黑色沉淀的多少初步比較細(xì)菌產(chǎn)生
硫化氫的能力，但不能測(cè)定產(chǎn)生硫化氫的量，C正確；
微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。
1
2
3
4
5
3.(2020·江蘇，19)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是
A.倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整
B.圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取
單菌落
C.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的
D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色
√
1
2
3
4
5
溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時(shí)輕輕晃動(dòng)，以保持均一性，A項(xiàng)錯(cuò)誤；
由題圖可見，隨著劃線次數(shù)增多，細(xì)菌密度減小，Ⅲ區(qū)開始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B項(xiàng)正確；
菌落是由單個(gè)微生物細(xì)胞或多個(gè)同種細(xì)胞繁殖到一定程度后形成的，能得到單菌落即可以達(dá)到菌種純化的目的，C項(xiàng)錯(cuò)誤；
剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周圍的纖維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D項(xiàng)錯(cuò)誤。
1
2
3
4
5
4.(2020·江蘇，31)產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請(qǐng)回答下列問題：
(1)常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)中，下列物品及其滅菌方法錯(cuò)誤的是_____(填編號(hào))。
1
2
3
4
5
編號(hào) ① ② ③ ④
物品 培養(yǎng)基 接種環(huán) 培養(yǎng)皿 涂布器
滅菌方法 高壓蒸汽 火焰灼燒 干熱 臭氧
④
1
2
3
4
5
(2)稱取1.0 g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99 mL無(wú)菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)__________后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0.1 mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長(zhǎng)出了46個(gè)酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌___________________個(gè)。
梯度稀釋
4.6×105(或460 000)
1
2
3
4
5
利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，需要將制備的菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，以獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液，一般來(lái)說(shuō)，菌落數(shù)在30～300個(gè)的平板最適于計(jì)數(shù)。0.1 mL菌懸液中含有46個(gè)酵母菌落，則1 mL菌懸液中含有460個(gè)酵母菌落；1.0 g土壤樣品首先稀釋100倍，然后稀釋10倍，共稀釋了1 000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌460×1 000
＝4.6×105(個(gè))。
1
2
3
4
5
(3)為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對(duì)分離所得的菌株，采用射線輻照進(jìn)行______育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑______的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。
誘變
脂肪
較大
1
2
3
4
5
采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進(jìn)行初步篩選，直徑大的說(shuō)明產(chǎn)酶能力強(qiáng)，利用的脂肪(碳源)多，直徑小的說(shuō)明產(chǎn)酶能力弱，利用的脂肪(碳源)少。
(4)在處理含油廢水的同時(shí)，可獲得單細(xì)胞蛋白，實(shí)現(xiàn)污染物資源化。為評(píng)價(jià)A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株____進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是_________________________
_______________________________________。
B
該菌株增殖速度快，單細(xì)胞
蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強(qiáng)，凈化效果好
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
通過分析題圖可知，相同時(shí)間內(nèi)，菌株B細(xì)胞密度大，說(shuō)明該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；相同時(shí)間內(nèi)，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少，說(shuō)明該菌株降解脂肪的能力強(qiáng)，凈化效果好。
5.(2022·全國(guó)乙，37)化合物S被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)。用菌株C可生產(chǎn)S，S的產(chǎn)量與菌株C培養(yǎng)所利用的碳源關(guān)系密切。為此，某小組通過實(shí)驗(yàn)比較不同碳源對(duì)菌體生長(zhǎng)和S產(chǎn)量的影響，結(jié)果見表。
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
回答下列問題：
(1)通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時(shí)，需要對(duì)所用的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有___________________________________(答出2點(diǎn)即可)。
干熱滅菌、濕熱滅菌(或高壓蒸汽滅菌)
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵，對(duì)所需的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有干熱滅菌、濕熱滅菌(或高壓蒸汽滅菌，濕熱滅菌中效果最好的方法)、灼燒滅菌。
1
2
3
4
5
(2)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C生長(zhǎng)的最適碳源是________；用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是__________。菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要_______
________(答出2點(diǎn)即可)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
葡萄糖
制糖廢液
氮源、
無(wú)機(jī)鹽
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
分析題干實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以葡萄糖為碳源時(shí)，細(xì)胞干重最大，故菌株C生長(zhǎng)的最適碳源是葡萄糖；以制糖廢液為碳源時(shí)，S產(chǎn)量最高，故用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是制糖廢液。微生物的生長(zhǎng)需要水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源以及特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，故菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
1
2
3
4
5
(3)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，碳源為淀粉時(shí)菌株C不能生長(zhǎng)，其原因是___________。
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
缺少淀粉酶
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C可以利用葡萄糖，但在以淀粉為碳源時(shí)，菌株C不能生長(zhǎng)，說(shuō)明菌株C無(wú)法利用淀粉，分析其原因是菌株C不能合成淀粉酶，導(dǎo)致其無(wú)法利用淀粉。
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
(4)若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)思路：_________________________
____________________________________________________________________________________________。
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
設(shè)計(jì)一系列不同濃度的制糖
廢液分別培養(yǎng)菌株C，測(cè)定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，確定最適碳源濃度
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
以制糖廢液作為碳源，進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，可以以碳源濃度作為自變量，不同碳源濃度下S產(chǎn)量作為因變量，實(shí)驗(yàn)思路為：設(shè)計(jì)一系列不同濃度的制糖廢液分別培養(yǎng)菌株C，測(cè)定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，從而確定最適碳源濃度。
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
(5)利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用，其意義是________________
___________________。
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
減少污染、節(jié)省
原料、降低生產(chǎn)成本
一、易錯(cuò)辨析
1.消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害
(　　)
2.倒平板就是等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來(lái)放置(　　)
3.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(　　)
4.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(　　)
5.分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(　　)
五分鐘　查落實(shí)
√
×
×
×
×
二、填空默寫
1.培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括 等。
2.選擇培養(yǎng)基是_________________________________________________
。
3.平板冷凝后，要將平板倒置的原因是_____________________________
______________________________________________________________
。
4.在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因是_____________
。
水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源
一種能將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離
出來(lái)的特殊培養(yǎng)基
平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，
凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以減少培養(yǎng)基
中的水分過快地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染
以免接種環(huán)溫
度太高，殺死菌種
5.在第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線的原因是__________________________________________________________
________________________________________________________________
。
6.同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì) 個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值。
7.絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以 作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。
8.當(dāng) ，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。
劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次
劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終
能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落
3
尿素
兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落
四
課時(shí)精練
一、單項(xiàng)選擇題
1.下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述，不正確的是
A.純化微生物和植物組織培養(yǎng)時(shí)常用的是固體培養(yǎng)基
B.在固體培養(yǎng)基中加入無(wú)菌水稀釋，可直接用于擴(kuò)大化培養(yǎng)細(xì)菌
C.根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的特征可初步判斷和鑒別細(xì)菌的類型
D.用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基滅菌時(shí)，初期需排氣1～2次，否則壓力
達(dá)到溫度達(dá)不到
√
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
1
2
3
4
5
6
7
8
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10
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12
13
純化微生物需要獲得單個(gè)菌落，用固體培養(yǎng)基，而植物組織培養(yǎng)一般用固體培養(yǎng)基，因?yàn)橹参镄枰潭ǎ珹正確；
大量培養(yǎng)微生物要用液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基用于分離純化微生物，B錯(cuò)誤；
不同細(xì)菌的菌落形態(tài)、顏色、大小等菌落特征不同，因此根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的特征可初步判斷和鑒別細(xì)菌的類型，C正確；
用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基滅菌時(shí)，初期需排氣1～2次，排出滅菌鍋內(nèi)的冷空氣，否則壓力達(dá)到溫度達(dá)不到，D正確。
2.下圖表示土壤中微生物為植物提供氮的過程，圖中①、②、③分別代表相關(guān)物質(zhì)，下列有關(guān)說(shuō)法，正確的是
A.①是N2、③是NH3，X代表的細(xì)菌異化作用類型是需氧型
B.①是NH3、②是 ，固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費(fèi)者
C.②是NH3、③是 ，X代表的細(xì)菌以有機(jī)物作為碳源
D.在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)固氮菌可用二氧化碳為碳源的無(wú)氮培養(yǎng)基
√
1
2
3
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5
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13
①是N2、③是 ，X代表的細(xì)菌異化作用方式可能是需氧型，A錯(cuò)誤；
①是N2、②是NH3，固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費(fèi)者，B錯(cuò)誤；
②是NH3、③是 ，X表示土壤中的分解者，X代表的細(xì)菌以土壤中的有機(jī)物為碳源，C正確；
固氮菌屬于異養(yǎng)微生物，在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)固氮菌不能用二氧化碳為碳源的無(wú)氮培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。
1
2
3
4
5
6
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9
10
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12
13
3.下列有關(guān)以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的描述中，錯(cuò)誤的是
A.銨鹽和硝酸鹽等無(wú)機(jī)氮為該微生物提供必要的氮素
B.碳源物質(zhì)不是該微生物的能源物質(zhì)
C.水、無(wú)機(jī)鹽也是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
D.瓊脂是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一
√
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2
3
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5
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8
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2
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8
9
10
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12
13
銨鹽和硝酸鹽等無(wú)機(jī)氮為該微生物提供必要的氮素，A正確；
以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物，CO2不是該微生物的能源物質(zhì)，B正確；
水、無(wú)機(jī)鹽也是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，C正確；
瓊脂是凝固劑，不是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一，D錯(cuò)誤。
4.下列關(guān)于無(wú)菌操作技術(shù)的說(shuō)法，正確的是
A.消毒僅能殺死物體表面的芽孢和孢子
B.液態(tài)的牛奶可用巴氏消毒法消毒
C.培養(yǎng)皿、膠頭吸管可用干熱滅菌法滅菌
D.高壓蒸汽滅菌時(shí)間達(dá)到后立即排氣降溫
1
2
3
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6
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消毒不能殺死物體表面的芽孢和孢子，A錯(cuò)誤；
牛奶用巴氏消毒法消毒，B正確；
干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具，膠頭吸管可用高壓蒸汽滅菌，C錯(cuò)誤；
高壓蒸汽滅菌時(shí)間達(dá)到后待壓力降至零時(shí)，再打開排氣閥排氣，D錯(cuò)誤。
5.(2023·江蘇鎮(zhèn)江高三模擬)微生物的計(jì)數(shù)方法有多種，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是
A.用濾膜法測(cè)定飲用水中大腸桿菌數(shù)目時(shí)，需利用鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)后計(jì)數(shù)
B.用平板劃線法和稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，結(jié)果往往比實(shí)際少
C.用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯微計(jì)數(shù)時(shí)，高倍鏡下觀察不到完整的計(jì)數(shù)室
D.用已知密度紅細(xì)胞懸液對(duì)待測(cè)菌液以比例計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，兩種液體需混合
均勻
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測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目可取一定量的飲用水，之后按一定倍數(shù)稀釋，再用加入伊紅美藍(lán)的鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)，取黑色金屬光澤菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，A正確；
微生物接種到固體培養(yǎng)基常用的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中稀釋涂布平板法接種可以形成單菌落，所以常用來(lái)進(jìn)行微生物的計(jì)數(shù)，平板培養(yǎng)基上長(zhǎng)出一個(gè)菌落就代表原待測(cè)樣品中一個(gè)微生物個(gè)體，由于有時(shí)候一個(gè)菌落是由多個(gè)細(xì)胞連在一起形成的，因此導(dǎo)致計(jì)數(shù)偏小；平板劃線法常用來(lái)篩選分離微生物，不用于計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；
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用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯微計(jì)數(shù)時(shí)，高倍鏡下觀察不到完整的計(jì)數(shù)室，C正確；
將已知顆粒(如霉菌孢子或紅細(xì)胞)濃度的液體與一待測(cè)細(xì)胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目，即可得未知菌液的細(xì)胞濃度，D正確。
6.(2023·江蘇泰州高三期末)稀釋涂布平板是常用的微生物培養(yǎng)方法，下列相關(guān)敘述正確的是
A.滅菌鍋中取出的培養(yǎng)基應(yīng)趁燙時(shí)倒平板，如此可對(duì)培養(yǎng)皿滅菌
B.稀釋涂布平板法不可用于微生物的分離，可用于微生物的計(jì)數(shù)
C.用此法估測(cè)的數(shù)值往往偏小，應(yīng)以菌落數(shù)最多的平板計(jì)數(shù)為準(zhǔn)
D.稀釋涂布平板法分離到的單菌落需進(jìn)一步純化，可用平板劃線法
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滅菌鍋中取出的培養(yǎng)基應(yīng)冷卻至50 ℃左右時(shí)倒平板，A錯(cuò)誤；
稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；
當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，因此統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；
稀釋涂布平板法分離到的單菌落仍需進(jìn)一步劃線純化，以獲得純種，D正確。
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7.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，正確的是
A.純化培養(yǎng)時(shí)，對(duì)培養(yǎng)皿皿蓋做標(biāo)記，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)的
搖床上培養(yǎng)
B.涂布接種時(shí)，需將涂布器蘸酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用
C.培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，高壓滅菌加熱結(jié)束后，打開放氣閥使壓力表
指針回到零后，開啟鍋蓋
D.可用平板劃線操作對(duì)微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)
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純化培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)，不需要放在搖床上培養(yǎng)，以免雜菌污染，A錯(cuò)誤；
涂布接種時(shí)，需將涂布器蘸酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用，以免高溫將部分微生物殺死，B正確；
高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，C錯(cuò)誤；
稀釋涂布平板法和平板劃線法都能對(duì)微生物進(jìn)行分離純化，但只有稀釋涂布平板法可用于計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。
8.在做分離“分解尿素的細(xì)菌”實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從對(duì)應(yīng)10－6培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。下列有關(guān)敘述不正確的是
A.甲同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同
B.可以將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對(duì)照，
以證明培養(yǎng)基是否受到污染
C.讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與甲同學(xué)一樣，
則可證明甲同學(xué)無(wú)誤
D.B選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路遵循了實(shí)驗(yàn)的對(duì)照原則，而C選項(xiàng)的沒有
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甲同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同，也可能是操作中污染造成的，A正確；
甲同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能是培養(yǎng)基污染造成的，可以將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染，B正確；
如果是甲同學(xué)實(shí)驗(yàn)操作過程中污染造成的，讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與甲同學(xué)一樣，則可證明甲同學(xué)無(wú)誤，C正確；
B、C選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路都遵循了實(shí)驗(yàn)的對(duì)照原則，D錯(cuò)誤。
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二、多項(xiàng)選擇題
9.下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，正確的是
A.接種前要了解固體培養(yǎng)基是否被污染無(wú)需接種無(wú)菌水來(lái)培育檢測(cè)
B.接種時(shí)連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌體逐步稀釋獲得單個(gè)菌落
C.以尿素為唯一氮源且含剛果紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌
D.利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微
生物
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檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染，應(yīng)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生，A正確；
平板劃線法的原理是通過連續(xù)劃線將聚集的菌體逐步稀釋以獲得單個(gè)菌落，B正確；
以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可選擇尿素分解菌，用含酚紅指示劑的培養(yǎng)基可鑒別尿素分解菌，C錯(cuò)誤；
利用尿素固體培養(yǎng)基可保留利用尿素的微生物，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)，而非殺死，D錯(cuò)誤。
10.(2023·江蘇海門中學(xué)高三期末)野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無(wú)法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，下圖為純化某氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，a、b、c表示操作步驟，d、e為菌落。下列敘述正確的是
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A.圖中①②④為基本培養(yǎng)基，③為完全培養(yǎng)基
B.a操作的目的是提高突變率，增加突變株的數(shù)量
C.b的正確操作是用涂布器把菌液均勻地涂布在②表面
D.經(jīng)c過程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取d菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)
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野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無(wú)法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，根據(jù)題干信息和圖形分析，圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；
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紫外線可以提高突變的頻率，a操作的目的是提高突變菌株的濃度，B正確；
b操作是將菌液滴加到培養(yǎng)基表面，再用涂布器將菌液均勻地涂布在②培養(yǎng)基表面，C正確；
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從圖中可看出，d菌落在基本培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng)，在完全培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)，說(shuō)明d是氨基酸缺陷型菌落，故經(jīng)c過程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取d菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，D正確。
11.某生物興趣小組完成了“分離土壤中分解尿素的細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)”的實(shí)驗(yàn)，具體操作流程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是
A.在酒精燈火焰附近稱取土壤并將其倒入錐形瓶中
B.梯度稀釋時(shí)可用移液管或微量移液器進(jìn)行操作
C.振蕩的目的是為了增加尿素分解菌的濃度
D.由圖示菌落計(jì)數(shù)結(jié)果可知10克土樣中的菌株數(shù)約為1.6×107個(gè)
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酒精燈火焰附近存在一個(gè)無(wú)菌區(qū)，在酒精燈火焰附近稱取土壤并將其倒入錐形瓶中，可以防止稱取的土壤在倒入錐形瓶過程中，土樣被污染，A正確；
只用移液管，分度太低，而只用微量移液器，容量又太小，所以梯度稀釋時(shí)可用移液管或微量移液器進(jìn)行操作，B正確；
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振蕩培養(yǎng)的目的是提高培養(yǎng)液的溶解氧的含量，使菌體充分接觸培養(yǎng)液，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，C錯(cuò)誤；
由分析可知，每克土壤中的菌株數(shù)為1.6×106，即10克土樣中的菌株數(shù)約為1.6×107個(gè)，D正確。
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三、非選擇題
12.牛奶是適合微生物生長(zhǎng)的良好培養(yǎng)基。牛奶在飲用前都要用巴氏消毒法消毒，以殺死有害微生物。某小組為檢測(cè)自制酸奶是否被雜菌污染，進(jìn)行了如圖所示操作。請(qǐng)回答下列問題：
(1)取最終的牛奶稀釋液0.1 mL在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，應(yīng)選擇的工具是圖2中的_____。
B
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圖1表示的是稀釋涂布平板法，可以用來(lái)分離菌種和對(duì)菌種進(jìn)行計(jì)數(shù)；圖2中A為接種環(huán)，B為涂布器，C為滴管，D為接種針。將牛奶稀釋液在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布的方法是稀釋涂布平板法，所用的接種工具是涂布器，即圖2中的B。
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(2)圖1所示方法為稀釋涂布平板法，理想情況下，培養(yǎng)一段時(shí)間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為65、63、64，則可以推測(cè)每毫升酸奶中所含細(xì)菌數(shù)為__________，運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值______(填“大”或“小”)，如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)_______________________的菌落，說(shuō)明自制酸奶已被雜菌污染。
6.4×107
小
(形狀、大小、顏色)不同
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據(jù)圖分析，圖中10 mL酸奶稀釋了105倍，最后取了10 mL稀釋液中的0.1 mL，因此每毫升酸奶中所含細(xì)菌數(shù)為(65＋63＋64)
÷3÷0.1×105＝6.4×107。由于經(jīng)此方法接種培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，所以運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值小。如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)(形狀、大小、顏色)不同的菌落，說(shuō)明自制酸奶已被雜菌污染。
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(3)已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，要進(jìn)一步分離純化乳酸菌，應(yīng)采用圖3中______(填字母)所示的劃線分離操作，其正確操作過程中，劃線工具至少要灼燒______次。
B
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要進(jìn)一步分離純化乳酸菌，應(yīng)采用平板劃線法進(jìn)行操作，圖3中操作正確的是B；接種環(huán)在每次接種前和接種結(jié)束后都要通過灼燒來(lái)滅菌，即圖3 B中的4次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次，以防止造成污染，因此完成劃線共需灼燒接種環(huán)5次。
13.苯酚(C6H5OH)是重要的化工原料，被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中，易形成污染，具有致癌、致畸和致突變作用。苯酚降解菌能分解工業(yè)廢水中的苯酚。自然界中能分解苯酚的微生物有幾百種，多為細(xì)菌、放線菌等。分離和純化高效降解苯酚的微生物的實(shí)驗(yàn)流程如圖1所示：
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請(qǐng)回答下列問題：
(1)在制作苯酚降解菌的富集培養(yǎng)基和平板分離培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基中應(yīng)以______為唯一碳源，后者除基本營(yíng)養(yǎng)成分外，還應(yīng)添加______(物質(zhì))，然后用___________________________(方法)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。
苯酚
瓊脂
高壓蒸汽滅菌法(濕熱滅菌法)
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本實(shí)驗(yàn)的目的是篩選能降解苯酚的微生物，故在配制相應(yīng)的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)該以苯酚為唯一碳源，制作成選
擇培養(yǎng)基，才可達(dá)到篩選的目的。而平板分離培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)基相比，平板分離培養(yǎng)基是在培養(yǎng)皿上分離微生物，得到單菌落，故應(yīng)制成固體培養(yǎng)基，應(yīng)再添加凝固劑瓊脂，制作好的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法(或濕熱滅菌法)滅菌。
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(2)用平板劃線法分離得到的單個(gè)菌落大小、顏色、隆起度等不完全一致的原因是_______________________________________________________
_________________________。
工業(yè)廢水中能降解苯酚的微生物有多種，不同種類的微生物在
平板上形成的菌落特征不同
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(3)對(duì)分離得到的某株苯酚降解菌進(jìn)行菌株生長(zhǎng)及苯酚降解實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖2所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此菌株適于降解的苯酚濃度為_____g/L，判斷依據(jù)是_________________________________________________________。
1.0
此苯酚濃度下菌體繁殖快(或菌體數(shù)量最多)，且苯酚的降解率高第1課時(shí)　發(fā)酵工程的培養(yǎng)基與無(wú)菌技術(shù)
課標(biāo)要求　1.概述培養(yǎng)基的類型及用途。2.闡明無(wú)菌技術(shù)的操作方法。3.概述利用平板劃線法和稀釋涂布平板法，進(jìn)行微生物分離和純化。
考點(diǎn)一　發(fā)酵工程的培養(yǎng)基
培養(yǎng)基
(1)概念：主要是指為人工培養(yǎng)微生物等而制備的，適合微生物等生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。
(2)類型
①按成分分類
培養(yǎng)基種類 成分 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 用途
天然培養(yǎng)基 動(dòng)植物組織或微生物細(xì)胞以及它們的提取物或粗消化物 取材便利、營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)便 營(yíng)養(yǎng)成分難以控制，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性較差 工業(yè)化生產(chǎn)
合成培養(yǎng)基 準(zhǔn)確稱量的高純度化學(xué)試劑加蒸餾水 化學(xué)成分明確，實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性好 配制過程繁瑣，成本較高 研究與育種
②按物理狀態(tài)分類
培養(yǎng)基種類 特點(diǎn) 用途
液體培養(yǎng)基 不含凝固劑，呈液體狀態(tài) 工業(yè)生產(chǎn)
固體培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基 含凝固劑(如瓊脂)，呈固體或半固體狀態(tài) 微生物的分離、鑒定，活菌計(jì)數(shù)，菌種保藏
③按用途分類：基礎(chǔ)培養(yǎng)基和特殊培養(yǎng)基
特殊培養(yǎng)基種類 選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基 加富培養(yǎng)基
用途 將某種或某類微生物從混雜的微生物中分離出來(lái) 快速分類鑒定不同微生物，也用于分離和篩選產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物的菌種 用于培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求比較苛刻的異養(yǎng)微生物。可增加所需微生物的數(shù)量
(3)成分
成分 含義 作用 來(lái)源
碳源 提供碳元素的物質(zhì) 構(gòu)成生物體的細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì) 無(wú)機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)碳源：糖類、牛肉膏等
氮源 提供氮元素的物質(zhì) 合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì) 無(wú)機(jī)氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：蛋白胨等
無(wú)機(jī)鹽 為微生物提供除碳、氮之外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素 為微生物提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH等 無(wú)機(jī)化合物：KH2PO4、 K2HPO4、NaCl等
水 生物體含量最高的無(wú)機(jī)化合物 良好的溶劑，參與化學(xué)反應(yīng)等 培養(yǎng)基、代謝產(chǎn)物
考向　培養(yǎng)基配制及其作用
1．(多選)現(xiàn)有兩種固體培養(yǎng)基，已知其配制時(shí)所加的成分和含量如下表，假設(shè)用這兩種培養(yǎng)基分別去分離土壤中的兩種微生物，甲、乙適合分離的微生物是(　　)
成分 KH2PO4 MgSO4· 7H2O NaCl CaSO4· 2H2O CaCO3 葡萄糖 純淀粉
甲培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% 0.5% 2%
乙培養(yǎng)基 0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% － －
A．甲培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌
B．甲培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌
C．乙培養(yǎng)基適于分離自養(yǎng)型自生固氮菌
D．乙培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型自生固氮菌
答案　BC
解析　甲培養(yǎng)基中含有的葡萄糖和淀粉是有機(jī)物，可以作為碳源和能源，適用于異養(yǎng)微生物生長(zhǎng)，由此推出該培養(yǎng)基適于分離異養(yǎng)型的自生固氮菌，A錯(cuò)誤，B正確；乙培養(yǎng)基中不含有機(jī)碳源，不含氮源，可用來(lái)分離培養(yǎng)自養(yǎng)型的自生固氮菌，C正確，D錯(cuò)誤。
2．在微生物培養(yǎng)的過程中，需要通過選擇培養(yǎng)或鑒別培養(yǎng)的方法來(lái)篩選出目標(biāo)菌種。下列與之相關(guān)的敘述中，不正確的是(　　)
A．纖維素分解菌能夠分解剛果紅染料，從而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈
B．尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘保瑥亩狗蛹t指示劑變紅
C．在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應(yīng)抗性的菌株
D．在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的乳酸菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)“溶鈣圈”
答案　A
解析　纖維素分解菌能夠分解纖維素，在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，A錯(cuò)誤；尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘保古囵B(yǎng)基呈堿性，從而使酚紅指示劑變紅，B正確。
3．(2023·江蘇無(wú)錫高三模擬)培養(yǎng)微生物需要提供適宜的培養(yǎng)基。下列關(guān)于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是(　　)
A．培養(yǎng)基為目標(biāo)微生物提供適宜的生長(zhǎng)環(huán)境
B．培養(yǎng)基的成分需根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)而定
C．培養(yǎng)基需滿足各種微生物生長(zhǎng)繁殖的需求
D．培養(yǎng)基通常需包含水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
答案　C
解析　培養(yǎng)基中含有微生物生長(zhǎng)需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還能滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)環(huán)境的要求，A正確；配制培養(yǎng)基時(shí)，需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要，B正確；培養(yǎng)基是根據(jù)不同微生物的生長(zhǎng)繁殖需求進(jìn)行配制的，不能滿足各種微生物生長(zhǎng)繁殖的需求，C錯(cuò)誤。
考點(diǎn)二　發(fā)酵工程的無(wú)菌技術(shù)
1．發(fā)酵工程的滅菌方法
(1)化學(xué)試劑滅菌法：采用滅菌劑滅菌的方法。一般不用于培養(yǎng)基滅菌。
(2)射線滅菌法：利用紫外線等產(chǎn)生的高能粒子進(jìn)行滅菌的方法。
(3)干熱滅菌法：包括干熱空氣滅菌法和火焰灼燒法等。
(4)濕熱滅菌法：利用飽和蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。
(5)過濾除菌法：通過過濾阻留微生物從而達(dá)到除菌目的的方法。
2．發(fā)酵工程的滅菌設(shè)備
(1)電熱鼓風(fēng)干燥箱：干熱滅菌設(shè)備常用于空的玻璃器皿、金屬用具和其他耐高溫的物品的滅菌。
(2)高壓蒸汽滅菌鍋：濕熱滅菌設(shè)備，其使用包括加水、裝鍋、加熱、排空冷空氣、保溫保壓、出鍋等步驟。
(3)空氣除菌設(shè)備。
3．發(fā)酵工程的無(wú)菌操作器具
(1)接種器具
①接種：是指在無(wú)菌條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過程。
②常用的工具有玻璃涂布器、接種針、接種環(huán)等，在涂布平板接種時(shí)要用玻璃涂布器，穿刺接種時(shí)要用接種針，在斜面接種或在平板培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線接種時(shí)要用接種環(huán)。
(2)轉(zhuǎn)移器具
①移液管：用來(lái)準(zhǔn)備移取一定體積的溶液或分裝化學(xué)試劑的量器。
②微量取液器：取液量很少時(shí)使用，分為固定容量的和可調(diào)容量的兩種。
③超凈工作臺(tái)：是一種經(jīng)過空氣凈化而形成高潔凈操作環(huán)境的設(shè)備。優(yōu)點(diǎn)是操作方便。
4．微生物接種和傳代的無(wú)菌技術(shù)
(1)穿刺接種：常用于厭氧微生物。
(2)斜面接種：常用的菌種傳代和低溫下保存菌種的方法。
(3)斜面接種和培養(yǎng)酵母菌
①主要目的：菌種轉(zhuǎn)移、擴(kuò)大培養(yǎng)和保存純凈菌種等。
②主要步驟：準(zhǔn)備接種→接種環(huán)滅菌→試管口滅菌→挑取少許菌種→劃線接種→培養(yǎng)。
5．微生物分離、純化和培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)
(1)兩種純化方法的比較
項(xiàng)目 平板劃線法 稀釋涂布平板法
分離結(jié)果
關(guān)鍵操作 接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線 ①一系列的梯度稀釋；②涂布平板操作
接種用具 接種環(huán) 涂布器
優(yōu)點(diǎn) 可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離 可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征
缺點(diǎn) 不能計(jì)數(shù) 操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板
共同點(diǎn) 都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無(wú)菌操作；都會(huì)在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落；都可用于觀察菌落特征
(2)酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟
請(qǐng)思考以下問題：
①平板冷凝后，要將平板倒置的原因是什么？
提示　因?yàn)槠桨謇淠螅笊w上會(huì)凝結(jié)水珠，平板倒置后，既可避免培養(yǎng)基表面的水分過快地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。
②在接種前隨機(jī)取若干個(gè)滅菌后的未接種的平板，先行培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。
③平板劃線第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，這樣做的目的是什么？
提示　能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。
④平板劃線時(shí)最后一次劃線為何不能與第一次劃線相連？
提示　最后一次劃線已經(jīng)將酵母菌稀釋成單個(gè)細(xì)胞，如果與第一次劃線相連，則增加了酵母菌數(shù)目，得不到純化的效果。
(3)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
①分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕福@種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過程中起到催化作用。
②統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目一般用涂布平板法。
③計(jì)數(shù)：統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的1個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中1個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
④公式：(平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積)×稀釋倍數(shù)。
延伸應(yīng)用　篩選能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)的培養(yǎng)基成分如下表所示：
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 瓊脂 H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 定容至1 000 mL
(1)該培養(yǎng)基是如何實(shí)現(xiàn)對(duì)分解尿素的細(xì)菌的篩選的？
提示　該培養(yǎng)基中唯一氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能夠分解尿素，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，會(huì)因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)繁殖，所以用該培養(yǎng)基能夠篩選出分解尿素的細(xì)菌。
(2)如何證明該選擇培養(yǎng)基的確起到了篩選作用？
提示　同時(shí)設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基并進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目；若牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，則證明了選擇培養(yǎng)基的確起到了篩選作用。
(3)如何證明所用的選擇培養(yǎng)基沒有受到環(huán)境污染？
提示　將未接種的上述培養(yǎng)基與接種的上述培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng)，觀察是否有菌落的產(chǎn)生；若未接種的培養(yǎng)基無(wú)菌落產(chǎn)生，則證明培養(yǎng)基沒有受到環(huán)境污染。
(4)若甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的該細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。
①甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果是否真實(shí)可靠？為什么？
提示　不可靠。為增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在同一稀釋度下涂布至少3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值。
②乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理是否合理？為什么？
提示　不合理。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致的情況，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)過程中可能的影響因素，找出差異的原因，需重新實(shí)驗(yàn)，而不能簡(jiǎn)單地舍棄。
考向一　發(fā)酵工程滅菌的方法設(shè)備與無(wú)菌技術(shù)操作器具
4．下列有關(guān)使用高壓蒸汽滅菌鍋的操作，錯(cuò)誤的是(　　)
A．加水時(shí)，水面應(yīng)與三角擱架平齊
B．加蓋時(shí)，將排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)
C．加熱時(shí)，待冷空氣完全排盡后關(guān)上排氣閥
D．切斷電源后，打開排氣閥使壓力表降到零后開蓋
答案　D
解析　在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，加水時(shí)的水面應(yīng)與三角擱架平齊，A正確；加蓋時(shí)，應(yīng)該將排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，B正確；加熱時(shí)，應(yīng)該等冷空氣完全排盡后再關(guān)上排氣閥，C正確；切斷電源后，應(yīng)該等壓力表降到零后再打開排氣閥并開蓋，D錯(cuò)誤。
5．微生物培養(yǎng)時(shí)常利用無(wú)菌技術(shù)避免雜菌的污染，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　)
A．配制好的培養(yǎng)基應(yīng)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌
B．實(shí)驗(yàn)中避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸
C．接種前后的接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒
D．實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)實(shí)驗(yàn)室噴灑石碳酸同時(shí)配合紫外線照射
答案　A
解析　對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法，A錯(cuò)誤；為避免雜菌污染，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸，B正確；為了防止雜菌污染，每次接種前后，接種環(huán)都要進(jìn)行灼燒滅菌，C正確；紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)，密閉空間內(nèi)的空氣常采用紫外線照射消毒，噴灑石碳酸同時(shí)配合紫外線照射可提高對(duì)密閉空間的消毒效果，D正確。
考向二　微生物接種和傳代、分離、純化和培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)
6．(2023·江蘇南通高三模擬)下圖為微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的有關(guān)操作，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　)
A．步驟①中，需將接種工具灼燒至變紅，以殺滅雜菌
B．步驟②中，將接種工具冷卻時(shí)不宜距酒精燈火焰太遠(yuǎn)
C．圖中接種方法的目的是使菌種逐漸稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后獲得單個(gè)菌落
D．接種后應(yīng)將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)后可以根據(jù)結(jié)果進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)
答案　D
解析　步驟①中，接種前灼燒接種環(huán)至變紅，目的是殺滅接種環(huán)上可能引起污染的微生物，A正確；步驟②中，將接種工具冷卻時(shí)不宜距酒精燈火焰太遠(yuǎn)，防止受到雜菌污染，B正確；圖中所示的接種方法是平板劃線法，目的是使接種的菌種逐漸稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后獲得由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落，C正確；圖示的平板劃線法不能用于微生物的計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。
7．(2018·江蘇，31)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問題：
(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的________，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行____________滅菌。
(2)取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約________(在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇)的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。
(3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有_______。
a．為保證無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌
b．劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落
c．挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量
d．可以通過逐步提高培養(yǎng)基中的甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株
(4)步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和________供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1 000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用25×16型血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上________色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于________，才能達(dá)到每毫升3×109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。
答案　(1)pH　高壓蒸汽(濕熱)　(2)50 ℃　(3)a、b、d　(4)氧氣　無(wú)　30
解析　(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，進(jìn)行計(jì)算、稱量、溶解、定容后，需先調(diào)pH再分裝到錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。(2)倒平板時(shí)的培養(yǎng)基溫度約為50 ℃，冷凝后倒置培養(yǎng)。(3)平板劃線時(shí)，接種針、接種環(huán)使用前和每次劃線后都需要進(jìn)行灼燒滅菌，以免造成雜菌污染，a正確；劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基表面，否則不能形成正常菌落，b正確；挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)不同的菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中蛋白質(zhì)含量，c錯(cuò)誤；逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，能篩選出其中的耐受菌，獲得甲醇高耐受菌株，d正確。(4)酵母是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖。酵母擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣等條件。由題中信息“經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色”可知，計(jì)數(shù)室中培養(yǎng)液容積實(shí)際只有0.1÷2＝0.05 mm3。設(shè)5個(gè)中方格中無(wú)色(活細(xì)胞不能被臺(tái)盼藍(lán)染色)的細(xì)胞數(shù)目為x個(gè)，則3×109＝x/5×25×1 000×1 000÷0.05，解得x＝30(個(gè))。
1．(2021·山東，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是(　　)
A．甲菌屬于解脂菌
B．實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源
C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比
D．該平板可用來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力
答案　B
解析　根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”，說(shuō)明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色，因此甲菌屬于解脂菌，A項(xiàng)正確；乙菌菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍(lán)色，說(shuō)明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌也可以在培養(yǎng)基上生存，說(shuō)明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B項(xiàng)錯(cuò)誤；可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比，更加直觀，C項(xiàng)正確；可以利用該平板來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標(biāo)可以是菌落周圍深藍(lán)色圈的大小，D項(xiàng)正確。
2.(2021·山東，20)含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是(　　)
A．乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)
B．為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基
C．該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量
D．穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染
答案　B
解析　從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說(shuō)明了乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)，A正確；為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用半固體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；該實(shí)驗(yàn)可以根據(jù)黑色沉淀的多少初步比較細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫的能力，但不能測(cè)定產(chǎn)生硫化氫的量，C正確；微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。
3.(2020·江蘇，19)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是(　　)
A．倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整
B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落
C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的
D．菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色
答案　B
解析　溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時(shí)輕輕晃動(dòng)，以保持均一性，A項(xiàng)錯(cuò)誤；由題圖可見，隨著劃線次數(shù)增多，細(xì)菌密度減小，Ⅲ區(qū)開始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B項(xiàng)正確；菌落是由單個(gè)微生物細(xì)胞或多個(gè)同種細(xì)胞繁殖到一定程度后形成的，能得到單菌落即可以達(dá)到菌種純化的目的，C項(xiàng)錯(cuò)誤；剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周圍的纖維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D項(xiàng)錯(cuò)誤。
4．(2020·江蘇，31)產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請(qǐng)回答下列問題：
(1)常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)中，下列物品及其滅菌方法錯(cuò)誤的是________(填編號(hào))。
編號(hào) ① ② ③ ④
物品 培養(yǎng)基 接種環(huán) 培養(yǎng)皿 涂布器
滅菌方法 高壓蒸汽 火焰灼燒 干熱 臭氧
(2)稱取1.0 g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99 mL無(wú)菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)_____________后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0.1 mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長(zhǎng)出了46個(gè)酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌____________個(gè)。
(3)為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對(duì)分離所得的菌株，采用射線輻照進(jìn)行________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。
(4)在處理含油廢水的同時(shí)，可獲得單細(xì)胞蛋白，實(shí)現(xiàn)污染物資源化。為評(píng)價(jià)A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株____________進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是____________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案　(1)④　(2)梯度稀釋　4.6×105(或460 000)　(3)誘變　脂肪　較大　(4)B　該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強(qiáng)，凈化效果好
解析　(2)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，需要將制備的菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，以獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液，一般來(lái)說(shuō)，菌落數(shù)在30～300個(gè)的平板最適于計(jì)數(shù)。0.1 mL菌懸液中含有46個(gè)酵母菌落，則1 mL菌懸液中含有460個(gè)酵母菌落；1.0 g土壤樣品首先稀釋100倍，然后稀釋10倍，共稀釋了1 000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌460×1 000＝4.6×105(個(gè))。(3)采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進(jìn)行初步篩選，直徑大的說(shuō)明產(chǎn)酶能力強(qiáng)，利用的脂肪(碳源)多，直徑小的說(shuō)明產(chǎn)酶能力弱，利用的脂肪(碳源)少。(4)通過分析題圖可知，相同時(shí)間內(nèi)，菌株B細(xì)胞密度大，說(shuō)明該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；相同時(shí)間內(nèi)，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少，說(shuō)明該菌株降解脂肪的能力強(qiáng)，凈化效果好。
5．(2022·全國(guó)乙，37)化合物S被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)。用菌株C可生產(chǎn)S，S的產(chǎn)量與菌株C培養(yǎng)所利用的碳源關(guān)系密切。為此，某小組通過實(shí)驗(yàn)比較不同碳源對(duì)菌體生長(zhǎng)和S產(chǎn)量的影響，結(jié)果見表。
碳源 細(xì)胞干重(g/L) S產(chǎn)量(g/L)
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
回答下列問題：
(1)通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時(shí)，需要對(duì)所用的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有_____________________________________________________________(答出2點(diǎn)即可)。
(2)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C生長(zhǎng)的最適碳源是______________；用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是______________。菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要_____________(答出2點(diǎn)即可)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
(3)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，碳源為淀粉時(shí)菌株C不能生長(zhǎng)，其原因是__________________。
(4)若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)思路：____________________________________________________
________________________________________________________________________。
(5)利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用，其意義是__________________________。
答案　(1)干熱滅菌、濕熱滅菌(或高壓蒸汽滅菌)　(2)葡萄糖　制糖廢液　氮源、無(wú)機(jī)鹽　
(3)缺少淀粉酶　(4)設(shè)計(jì)一系列不同濃度的制糖廢液分別培養(yǎng)菌株C，測(cè)定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，確定最適碳源濃度　(5)減少污染、節(jié)省原料、降低生產(chǎn)成本
解析　(1)防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵，對(duì)所需的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有干熱滅菌、濕熱滅菌(或高壓蒸汽滅菌，濕熱滅菌中效果最好的方法)、灼燒滅菌。(2)分析題干實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以葡萄糖為碳源時(shí)，細(xì)胞干重最大，故菌株C生長(zhǎng)的最適碳源是葡萄糖；以制糖廢液為碳源時(shí)，S產(chǎn)量最高，故用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是制糖廢液。微生物的生長(zhǎng)需要水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源以及特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，故菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C可以利用葡萄糖，但在以淀粉為碳源時(shí)，菌株C不能生長(zhǎng)，說(shuō)明菌株C無(wú)法利用淀粉，分析其原因是菌株C不能合成淀粉酶，導(dǎo)致其無(wú)法利用淀粉。(4)以制糖廢液作為碳源，進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，可以以碳源濃度作為自變量，不同碳源濃度下S產(chǎn)量作為因變量，實(shí)驗(yàn)思路為：設(shè)計(jì)一系列不同濃度的制糖廢液分別培養(yǎng)菌株C，測(cè)定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，從而確定最適碳源濃度。
一、易錯(cuò)辨析
1．消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害(　√　)
2．倒平板就是等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來(lái)放置(　×　)
3．倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(　×　)
4．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(　×　)
5．分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(　×　)
二、填空默寫
1．培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源等。
2．選擇培養(yǎng)基是一種能將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來(lái)的特殊培養(yǎng)基。
3．平板冷凝后，要將平板倒置的原因是平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以減少培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。
4．在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因是以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。
5．在第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線的原因是劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。
6．同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值。
7．絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。
8．當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。
課時(shí)精練
一、單項(xiàng)選擇題
1．下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述，不正確的是(　　)
A．純化微生物和植物組織培養(yǎng)時(shí)常用的是固體培養(yǎng)基
B．在固體培養(yǎng)基中加入無(wú)菌水稀釋，可直接用于擴(kuò)大化培養(yǎng)細(xì)菌
C．根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的特征可初步判斷和鑒別細(xì)菌的類型
D．用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基滅菌時(shí)，初期需排氣1～2次，否則壓力達(dá)到溫度達(dá)不到
答案　B
解析　純化微生物需要獲得單個(gè)菌落，用固體培養(yǎng)基，而植物組織培養(yǎng)一般用固體培養(yǎng)基，因?yàn)橹参镄枰潭ǎ珹正確；大量培養(yǎng)微生物要用液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基用于分離純化微生物，B錯(cuò)誤；不同細(xì)菌的菌落形態(tài)、顏色、大小等菌落特征不同，因此根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的特征可初步判斷和鑒別細(xì)菌的類型，C正確；用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基滅菌時(shí)，初期需排氣1～2次，排出滅菌鍋內(nèi)的冷空氣，否則壓力達(dá)到溫度達(dá)不到，D正確。
2．下圖表示土壤中微生物為植物提供氮的過程，圖中①、②、③分別代表相關(guān)物質(zhì)，下列有關(guān)說(shuō)法，正確的是(　　)
A．①是N2、③是NH3，X代表的細(xì)菌異化作用類型是需氧型
B．①是NH3、②是NO，固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費(fèi)者
C．②是NH3、③是NO，X代表的細(xì)菌以有機(jī)物作為碳源
D．在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)固氮菌可用二氧化碳為碳源的無(wú)氮培養(yǎng)基
答案　C
解析　①是N2、③是NO，X代表的細(xì)菌異化作用方式可能是需氧型，A錯(cuò)誤；①是N2、②是NH3，固氮菌在生態(tài)系統(tǒng)中屬于消費(fèi)者，B錯(cuò)誤；②是NH3、③是NO，X表示土壤中的分解者，X代表的細(xì)菌以土壤中的有機(jī)物為碳源，C正確；固氮菌屬于異養(yǎng)微生物，在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)固氮菌不能用二氧化碳為碳源的無(wú)氮培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。
3．下列有關(guān)以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的描述中，錯(cuò)誤的是(　　)
A．銨鹽和硝酸鹽等無(wú)機(jī)氮為該微生物提供必要的氮素
B．碳源物質(zhì)不是該微生物的能源物質(zhì)
C．水、無(wú)機(jī)鹽也是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
D．瓊脂是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一
答案　D
解析　銨鹽和硝酸鹽等無(wú)機(jī)氮為該微生物提供必要的氮素，A正確；以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物，CO2不是該微生物的能源物質(zhì)，B正確；水、無(wú)機(jī)鹽也是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，C正確；瓊脂是凝固劑，不是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一，D錯(cuò)誤。
4．下列關(guān)于無(wú)菌操作技術(shù)的說(shuō)法，正確的是(　　)
A．消毒僅能殺死物體表面的芽孢和孢子
B．液態(tài)的牛奶可用巴氏消毒法消毒
C．培養(yǎng)皿、膠頭吸管可用干熱滅菌法滅菌
D．高壓蒸汽滅菌時(shí)間達(dá)到后立即排氣降溫
答案　B
解析　消毒不能殺死物體表面的芽孢和孢子，A錯(cuò)誤；牛奶用巴氏消毒法消毒，B正確；干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具，膠頭吸管可用高壓蒸汽滅菌，C錯(cuò)誤；高壓蒸汽滅菌時(shí)間達(dá)到后待壓力降至零時(shí)，再打開排氣閥排氣，D錯(cuò)誤。
5．(2023·江蘇鎮(zhèn)江高三模擬)微生物的計(jì)數(shù)方法有多種，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　)
A．用濾膜法測(cè)定飲用水中大腸桿菌數(shù)目時(shí)，需利用鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)后計(jì)數(shù)
B．用平板劃線法和稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，結(jié)果往往比實(shí)際少
C．用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯微計(jì)數(shù)時(shí)，高倍鏡下觀察不到完整的計(jì)數(shù)室
D．用已知密度紅細(xì)胞懸液對(duì)待測(cè)菌液以比例計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，兩種液體需混合均勻
答案　B
解析　測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目可取一定量的飲用水，之后按一定倍數(shù)稀釋，再用加入伊紅美藍(lán)的鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)，取黑色金屬光澤菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，A正確；微生物接種到固體培養(yǎng)基常用的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中稀釋涂布平板法接種可以形成單菌落，所以常用來(lái)進(jìn)行微生物的計(jì)數(shù)，平板培養(yǎng)基上長(zhǎng)出一個(gè)菌落就代表原待測(cè)樣品中一個(gè)微生物個(gè)體，由于有時(shí)候一個(gè)菌落是由多個(gè)細(xì)胞連在一起形成的，因此導(dǎo)致計(jì)數(shù)偏小；平板劃線法常用來(lái)篩選分離微生物，不用于計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯微計(jì)數(shù)時(shí)，高倍鏡下觀察不到完整的計(jì)數(shù)室，C正確；將已知顆粒(如霉菌孢子或紅細(xì)胞)濃度的液體與一待測(cè)細(xì)胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目，即可得未知菌液的細(xì)胞濃度，D正確。
6．(2023·江蘇泰州高三期末)稀釋涂布平板是常用的微生物培養(yǎng)方法，下列相關(guān)敘述正確的是(　　)
A．滅菌鍋中取出的培養(yǎng)基應(yīng)趁燙時(shí)倒平板，如此可對(duì)培養(yǎng)皿滅菌
B．稀釋涂布平板法不可用于微生物的分離，可用于微生物的計(jì)數(shù)
C．用此法估測(cè)的數(shù)值往往偏小，應(yīng)以菌落數(shù)最多的平板計(jì)數(shù)為準(zhǔn)
D．稀釋涂布平板法分離到的單菌落需進(jìn)一步純化，可用平板劃線法
答案　D
解析　滅菌鍋中取出的培養(yǎng)基應(yīng)冷卻至50 ℃左右時(shí)倒平板，A錯(cuò)誤；稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，因此統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；稀釋涂布平板法分離到的單菌落仍需進(jìn)一步劃線純化，以獲得純種，D正確。
7．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，正確的是(　　)
A．純化培養(yǎng)時(shí)，對(duì)培養(yǎng)皿皿蓋做標(biāo)記，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)的搖床上培養(yǎng)
B．涂布接種時(shí)，需將涂布器蘸酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用
C．培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，高壓滅菌加熱結(jié)束后，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋
D．可用平板劃線操作對(duì)微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)
答案　B
解析　純化培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)，不需要放在搖床上培養(yǎng)，以免雜菌污染，A錯(cuò)誤；涂布接種時(shí)，需將涂布器蘸酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用，以免高溫將部分微生物殺死，B正確；高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，C錯(cuò)誤；稀釋涂布平板法和平板劃線法都能對(duì)微生物進(jìn)行分離純化，但只有稀釋涂布平板法可用于計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。
8．在做分離“分解尿素的細(xì)菌”實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從對(duì)應(yīng)10－6培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。下列有關(guān)敘述不正確的是(　　)
A．甲同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同
B．可以將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染
C．讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與甲同學(xué)一樣，則可證明甲同學(xué)無(wú)誤
D．B選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路遵循了實(shí)驗(yàn)的對(duì)照原則，而C選項(xiàng)的沒有
答案　D
解析　甲同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同，也可能是操作中污染造成的，A正確；甲同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能是培養(yǎng)基污染造成的，可以將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染，B正確；如果是甲同學(xué)實(shí)驗(yàn)操作過程中污染造成的，讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與甲同學(xué)一樣，則可證明甲同學(xué)無(wú)誤，C正確；B、C選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路都遵循了實(shí)驗(yàn)的對(duì)照原則，D錯(cuò)誤。
二、多項(xiàng)選擇題
9．下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，正確的是(　　)
A．接種前要了解固體培養(yǎng)基是否被污染無(wú)需接種無(wú)菌水來(lái)培育檢測(cè)
B．接種時(shí)連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌體逐步稀釋獲得單個(gè)菌落
C．以尿素為唯一氮源且含剛果紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌
D．利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
答案　AB
解析　檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染，應(yīng)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生，A正確；平板劃線法的原理是通過連續(xù)劃線將聚集的菌體逐步稀釋以獲得單個(gè)菌落，B正確；以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可選擇尿素分解菌，用含酚紅指示劑的培養(yǎng)基可鑒別尿素分解菌，C錯(cuò)誤；利用尿素固體培養(yǎng)基可保留利用尿素的微生物，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)，而非殺死，D錯(cuò)誤。
10．(2023·江蘇海門中學(xué)高三期末)野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無(wú)法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，下圖為純化某氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，a、b、c表示操作步驟，d、e為菌落。下列敘述正確的是(　　)
A．圖中①②④為基本培養(yǎng)基，③為完全培養(yǎng)基
B．a(chǎn)操作的目的是提高突變率，增加突變株的數(shù)量
C．b的正確操作是用涂布器把菌液均勻地涂布在②表面
D．經(jīng)c過程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取d菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)
答案　BCD
解析　野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株無(wú)法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，根據(jù)題干信息和圖形分析，圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；紫外線可以提高突變的頻率，a操作的目的是提高突變菌株的濃度，B正確；b操作是將菌液滴加到培養(yǎng)基表面，再用涂布器將菌液均勻地涂布在②培養(yǎng)基表面，C正確；從圖中可看出，d菌落在基本培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng)，在完全培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)，說(shuō)明d是氨基酸缺陷型菌落，故經(jīng)c過程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取d菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，D正確。
11．某生物興趣小組完成了“分離土壤中分解尿素的細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)”的實(shí)驗(yàn)，具體操作流程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是(　　)
A．在酒精燈火焰附近稱取土壤并將其倒入錐形瓶中
B．梯度稀釋時(shí)可用移液管或微量移液器進(jìn)行操作
C．振蕩的目的是為了增加尿素分解菌的濃度
D．由圖示菌落計(jì)數(shù)結(jié)果可知10克土樣中的菌株數(shù)約為1.6×107個(gè)
答案　ABD
解析　酒精燈火焰附近存在一個(gè)無(wú)菌區(qū)，在酒精燈火焰附近稱取土壤并將其倒入錐形瓶中，可以防止稱取的土壤在倒入錐形瓶過程中，土樣被污染，A正確；只用移液管，分度太低，而只用微量移液器，容量又太小，所以梯度稀釋時(shí)可用移液管或微量移液器進(jìn)行操作，B正確；振蕩培養(yǎng)的目的是提高培養(yǎng)液的溶解氧的含量，使菌體充分接觸培養(yǎng)液，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，C錯(cuò)誤；由分析可知，每克土壤中的菌株數(shù)為1.6×106，即10克土樣中的菌株數(shù)約為1.6×107個(gè)，D正確。
三、非選擇題
12．牛奶是適合微生物生長(zhǎng)的良好培養(yǎng)基。牛奶在飲用前都要用巴氏消毒法消毒，以殺死有害微生物。某小組為檢測(cè)自制酸奶是否被雜菌污染，進(jìn)行了如圖所示操作。請(qǐng)回答下列問題：
(1)取最終的牛奶稀釋液0.1 mL在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，應(yīng)選擇的工具是圖2中的__________。
(2)圖1所示方法為稀釋涂布平板法，理想情況下，培養(yǎng)一段時(shí)間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為65、63、64，則可以推測(cè)每毫升酸奶中所含細(xì)菌數(shù)為__________，運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值________(填“大”或“小”)，如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)__________的菌落，說(shuō)明自制酸奶已被雜菌污染。
(3)已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，要進(jìn)一步分離純化乳酸菌，應(yīng)采用圖3中______(填字母)所示的劃線分離操作，其正確操作過程中，劃線工具至少要灼燒______次。
答案　(1)B　(2)6.4×107　小　(形狀、大小、顏色)不同　(3)B　5
解析　(1)圖1表示的是稀釋涂布平板法，可以用來(lái)分離菌種和對(duì)菌種進(jìn)行計(jì)數(shù)；圖2中A為接種環(huán)，B為涂布器，C為滴管，D為接種針。將牛奶稀釋液在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布的方法是稀釋涂布平板法，所用的接種工具是涂布器，即圖2中的B。(2)據(jù)圖分析，圖中10 mL酸奶稀釋了105倍，最后取了10 mL稀釋液中的0.1 mL，因此每毫升酸奶中所含細(xì)菌數(shù)為(65＋63＋64)÷3÷0.1×105＝6.4×107。由于經(jīng)此方法接種培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，所以運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值小。如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)(形狀、大小、顏色)不同的菌落，說(shuō)明自制酸奶已被雜菌污染。(3)要進(jìn)一步分離純化乳酸菌，應(yīng)采用平板劃線法進(jìn)行操作，圖3中操作正確的是B；接種環(huán)在每次接種前和接種結(jié)束后都要通過灼燒來(lái)滅菌，即圖3 B中的4次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次，以防止造成污染，因此完成劃線共需灼燒接種環(huán)5次。
13．苯酚(C6H5OH)是重要的化工原料，被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中，易形成污染，具有致癌、致畸和致突變作用。苯酚降解菌能分解工業(yè)廢水中的苯酚。自然界中能分解苯酚的微生物有幾百種，多為細(xì)菌、放線菌等。分離和純化高效降解苯酚的微生物的實(shí)驗(yàn)流程如圖1所示：
請(qǐng)回答下列問題：
(1)在制作苯酚降解菌的富集培養(yǎng)基和平板分離培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)基中應(yīng)以________為唯一碳源，后者除基本營(yíng)養(yǎng)成分外，還應(yīng)添加__________(物質(zhì))，然后用____________(方法)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。
(2)用平板劃線法分離得到的單個(gè)菌落大小、顏色、隆起度等不完全一致的原因是________________________________________________________________________。
(3)對(duì)分離得到的某株苯酚降解菌進(jìn)行菌株生長(zhǎng)及苯酚降解實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖2所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此菌株適于降解的苯酚濃度為________g/L，判斷依據(jù)是___________________
________________________________________________________________________。
答案　(1)苯酚　瓊脂　高壓蒸汽滅菌法(濕熱滅菌法)　(2)工業(yè)廢水中能降解苯酚的微生物有多種，不同種類的微生物在平板上形成的菌落特征不同　(3)1.0　此苯酚濃度下菌體繁殖快(或菌體數(shù)量最多)，且苯酚的降解率高
解析　(1)本實(shí)驗(yàn)的目的是篩選能降解苯酚的微生物，故在配制相應(yīng)的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)該以苯酚為唯一碳源，制作成選擇培養(yǎng)基，才可達(dá)到篩選的目的。而平板分離培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)基相比，平板分離培養(yǎng)基是在培養(yǎng)皿上分離微生物，得到單菌落，故應(yīng)制成固體培養(yǎng)基，應(yīng)再添加凝固劑瓊脂，制作好的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法(或濕熱滅菌法)滅菌。

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