資源簡介

第2節　微生物的培養技術及應用
第2課時 微生物的選擇培養和計數
學習目標
1.舉例說明通過調整培養基的配方可有目的地培養某種微生物。
2概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計數法是測定微生物數量的常用方法。
3.討論土壤中分解尿素的細菌的分離與計數的方法。
預學案--教材研讀（自主學習）
選擇培養基
1._______________ ______（PCR）是一種在體外擴增DNA片段的技術，此項技術要求使用_ ______的DNA聚合酶。1973年，科學家從美國黃石國家公園的熱泉中篩選出水生棲熱菌，進而提取出____ _的DNA聚合酶。這種酶目前已被廣泛用于_______________（PCR）。
2.概念：在微生物學中，將允許_ _________的微生物生長，同時_ ____或__ ___其他種類微生物生長的培養基。
3.類型：
（1）利用改變培養條件進行選擇培養。_______________→分離耐高溫的水生棲熱菌。
（2）利用添加某種化學物質進行選擇培養。加入_____→分離酵母菌、霉菌等真菌。加_____________→金黃色葡萄球菌。
（3）利用營養缺陷進行選擇培養。
不加碳源（含碳有機物）的培養基→分離出____ ___微生物。___ _____的培養基→分離出固氮菌。
4.實驗室中微生物的篩選原理
人為提供有利于 生長的條件（包括 、 和 ），同時 或 其他微生物的生長。
二、微生物的選擇培養
如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的細菌，還需要對土樣進行適當的處理以及科學的測定微生物數量的方法——_______________法。
1.稀釋涂布平板法
將菌液進行一系列____ ______，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到_______ ___培養基的表面，進行培養。基本操作：（1）_____ _____；（2）_____ _____。
2.實驗操作流程
①鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。
②將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。
③取0.1mL菌液，滴加到培養基表面。
④將__ ___浸在盛有__ ___的燒杯中。
⑤將__ ___放在火焰上灼燒，待____ _燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布。⑥用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面。涂布時可_______________，使涂布均勻。
待涂布的菌液被培養基吸收后，將平板_ ____，放入30～37℃的恒溫培養箱中培養1～2d，在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的_______ ___。
注意事項：
①10g土樣加入盛有90mL無菌水中后，已__________，在計算時，不要忽略；
②由于使用的是_____培養基，所以一般情況下，獲得的單菌落即目的菌，但因為有些微生物可以利用目的菌的代謝產物來生長繁殖，所以還需要進一步驗證；
③過程中所有操作都應在_______________旁進行；
④將涂布器從_ ____中取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒；不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。
三、微生物的數量測定
1.間接計數法——_______________法
（1）原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的__________。通過統計平板上的____ ___，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。
（2）計數原則
①一般選擇菌落數為______ ____的平板計數。
②在同一稀釋度下，應至少對__ ___個平板進行重復計數，然后求出平均值。
③適當的__________、_____是否均勻是成功統計菌落數目的關鍵。
（3）結果分析：①統計的菌落數往往比活菌的實際數目___ _______；②統計結果一般用__________而不是用活菌數來表示。
原因：當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是___ _______。
（4）計算公式：每g樣品中的菌落數＝(C÷V)×M
C代表某一稀釋度下平板上生長的_______________；V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)；M代表_______ ___。
2.直接計數法——______ ____計數
（1）原理：利用特定的__ ___計數板或____ ______計數板在顯微鏡下觀察、計數，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數量。___ __計數板可對細菌等較小的細胞進行觀察和計數，_______ ___計數板常用于相對較大的酵母菌細胞、霉菌孢子等的觀察和計數。
（2）缺點：①統計的結果一般是活菌數和死菌數的總和，不能區分死菌與活菌。
②個體___ __的細菌在顯微鏡下難以觀察。
【拓展——分解尿素細菌的進一步鑒定】
1.原理：細菌合成的脲酶將尿素分解為__ ___，__ ___會使培養基的堿性__________，pH_____，因此可以通過檢測培養基pH的變化來判斷是否發生了該化學反應，進而判斷該菌是否為尿素分解細菌。
2.方法：在以__ ___為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，培養某種細菌后，如果pH升高，指示劑將變紅：
（1）液體培養基可以直接看液體的變色情況；
（2）固體培養基上可以觀察菌落周圍是否出現__________，__________直徑與菌落直徑比值越_____，說明分解能力越_____。
【導學案】
一、三種篩選方法的特點及舉例
方法 特點 舉例
利用微生物的營養特點進行選擇培養 通過控制培養基的營養成分，使某種微生物能生長，其他微生物不能生長 利用只含有尿素一種氮源的培養基，可篩選出分解尿素的細菌
利用某種化學物質進行的選擇培養 在完全培養基中加入某些化學物質，利用加入的化學物質對微生物產生的影響，抑制某些微生物，同時選擇所需的微生物 加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌
利用培養條件進行的選擇培養 改變微生物的培養條件 將培養基放在高溫環境中培養可以得到耐高溫的微生物
二、直接計數法和間接計數法比較
項目 直接計數法 間接計數法
原理 利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數量 當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌
主要用具 顯微鏡、細菌計數板 培養基
計數數據 菌體本身 培養基上菌落數
優點 計數方便、操作簡單 計數的是活菌
缺點 死菌、活菌都計算在內 操作較復雜，有一定誤差
計算公式 每毫升原液含菌數＝每小格平均菌體數×400×10 000×稀釋倍數 每毫升原液含菌數＝培養基上平均菌落數×稀釋倍數÷涂布液體積
【固學案】達標練習
1.選擇培養基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物,通過不含有機物的培養基、缺氮培養基、含尿素(不含其他氮源)的培養基,可從土壤中分離出的微生物依次是 ( )
A.硝化細菌、放線菌、根瘤菌 B.根瘤菌、青霉菌、固氮菌
C.異養型細菌、放線菌、硝化細菌 D.自養型細菌、固氮菌、分解尿素的細菌
2.某些土壤細菌可將尿素[CO(NH2)2]分解為CO2和NH3供植物吸收和利用,但分解物CO2不能為該菌提供營養。下列關于配制分離這一菌種的選擇培養基的成分符合要求的是 (　 　)
A.僅尿素 B.尿素+葡萄糖 C.僅葡萄糖 D.牛肉膏蛋白胨
3.以氮源設計選擇培養基,下列敘述錯誤的是 (　 　)
A.培養基中以尿素為唯一氮源,分離的微生物一定是分解尿素的微生物
B.培養基中以NH3為唯一氮源可分離硝化細菌
C.培養基中無氮源,可分離固氮微生物　
D.以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑,培養細菌后,指示劑變紅色,可判斷該細菌能分解尿素
4.下列有關微生物篩選的敘述中,不正確的是 ( )
A.用全營養馬鈴薯瓊脂培養基篩選酵母菌 B.用高NaCl的培養基篩選抗鹽突變菌
C.含酚紅的尿素培養基篩選鑒別出分解尿素的細菌 D.利用高溫條件篩選水生棲熱菌
5.用1 mL無菌移液管吸取100倍的土壤稀釋液0.5 mL,移入多少毫升無菌水的試管中,可得到1 000倍的稀釋液　 (　　)
A.4.5 mL B.5 mL C.10 mL D.49.5 mL
6.稀釋涂布平板法是微生物培養的一種常用的接種方法。下列相關敘述錯誤的是 (　　)
A.操作中需要將菌液進行一系列的濃度梯度稀釋
B.不同濃度的菌液均可在培養基表面形成單個的菌落
C.需將不同稀釋濃度的菌液分別涂布到固體培養基表面
D.操作過程中對培養基和涂布器等均需進行嚴格滅菌處理
7.若在固體培養基上用稀釋涂布平板法接種細菌,看到的培養結果不可能是 (　　)
8.蘋果樹腐爛病是由黑腐皮殼菌引起的,是限制蘋果產量的重要因素之一。生產上主要以化學藥劑防治該病。為開發生物防治途徑,科研人員擬從土壤中分離篩選出能抑制黑腐皮殼菌生長的枯草芽孢桿菌,實驗流程圖如下:
(1)①中木糖和硝酸鉀的作用分別是　　　　　　　　。
(2)②→③中梯度稀釋的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
(3)常用的兩種接種方法中,操作上的共同點是　　　　　　　　　　　。從④到⑤的接種方法是　　　　　　。培養過程中,主要根據　　　　特征鑒別出枯草芽孢桿菌。
9.下列不能測定樣品微生物數目的方法是 (　　)
A.稀釋涂布平板法 B.細菌計數板計數法 C.血細胞計數板計數法 D.平板劃線法
10.用101、102和103倍稀釋液進行涂布培養細菌后,其菌落平均數為2 890、270和50,則每毫升樣品中菌落總數(涂布平板時所用的稀釋液體積為0.1 mL)為 (　　)
A.2.89×105個 B.3.85×105個 C.6.0×105個 D.2.70×105個
11.下列是關于“檢測土壤中細菌總數”實驗操作的敘述,其中錯誤的是 (　 　)
A.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各1 mL,分別涂布于各組平板上
B.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養基,經高溫、高壓滅菌后倒平板
C.統計的菌落數目往往比活菌的實際數目小
D.確定對照組無菌后,選擇菌落數在30~300之間的實驗組平板進行計數
12.測定同一土壤樣品中的細菌數,在對應稀釋倍數為106的培養基中,得到以下幾種統計結果,其中正確的是 (　　)
A.涂布了一個平板,統計的菌落數是230
B.涂布了兩個平板,統計的菌落數是216和260,取平均值238
C.涂布了三個平板,統計的菌落數分別是21、212和256,取平均值163
D.涂布了三個平板,統計的菌落數分別是210、240和256,取平均值235
13.某生物興趣小組嘗試對土壤中分解尿素的細菌進行分離并計數,相關敘述正確的是 (　　)
A.制備選擇培養基時,需加入尿素、瓊脂、葡萄糖、硝酸鹽等物質
B.用活菌計數法統計結果,活菌的實際數目往往比統計的菌落數低
C.脲酶將尿素分解成氨使培養基的pH降低,加入酚紅指示劑后變紅
D.測定土壤中細菌的數目,一般選用104、105、106倍的稀釋液進行平板培養
14.關于“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數”實驗的敘述正確的是 (　　)
A.培養基應以尿素為唯一氮源,該細菌與硝化細菌所利用的碳源是相同的
B.對微生物進行分離、純化用平板劃線法,而計數只能用稀釋涂布平板法
C.對10 mL土樣稀釋106倍后,取0.1 mL該溶液進行重復的涂布實驗,測得的菌落數分別為18、234、276,則該10 mL土樣中分解尿素的細菌數為2.55×108個
D.應該設置對照以排除非測試因素對實驗結果的干擾,提高可信度
15.研究人員用無機鹽、瓊脂和石油配制的培養基從石油污染的土壤中篩選出一種高效石油降解菌。下列相關敘述錯誤的是 (　　)
A.這種培養基是一種選擇培養基
B.培養基中的碳源應該以石油為唯一碳源
C.高效石油降解菌可以降解土壤中的石油,修復土壤
D.高效石油降解菌在未被石油污染的土壤中含量較高
16.幽門螺桿菌(能產生脲酶)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素,嚴重者則發展為胃癌。我國的共餐制是導致幽門螺桿菌高發的重要原因。在患者體內采集樣本并制成菌液后進行培養。下列敘述錯誤的是 (　　)
A.對幽門螺桿菌進行分離和計數可用稀釋涂布平板法
B.分離純化幽門螺桿菌時應使用以尿素為唯一氮源的培養基
C.進行幽門螺桿菌培養需要提供高濕度的環境
D.培養幽門螺桿菌時需將培養基調至中性或弱堿性
17.分解尿素的微生物廣泛存在于農田等土壤中,某生物實驗小組嘗試對分解尿素的微生物進行分離與計數。請回答下列問題:
(1)分解尿素的微生物能產生　　　　酶;配制培養基時應以　　　　作為唯一氮源。
(2)該小組在接種前,隨機取若干滅菌后的空白平板先培養一段時間,這樣做的目的是　　　　　　　　　　　　;然后將1 mL樣液稀釋10 000倍,在3個平板上用稀釋涂布平板法分別涂布0.1 mL稀釋液;經適當培養后,3個平板的菌落數分別為39、42和45。據此可得出每毫升樣液中分解尿素的微生物活菌數為　　　　　　個。
(3)微生物的培養與觀察
①培養:不同種類的微生物,往往需要不同的培養　　　　和培養　　　　。
②觀察:每隔24 h統計一次　　　　　數目,最后選取菌落數目　　　　時的記錄作為結果。
18.尿素最初是從人的尿液中發現的,但隨著科學家成功實現尿素的體外人工合成,尿素的生產逐漸走向工業化,尿素也逐步成為一種重要的農業氮肥。如圖是土壤中分解尿素的細菌分離與計數的基本流程,請回答有關問題:
土壤取樣→制備培養基→接種→培養觀察→計數
(1)配制好的培養基轉移到錐形瓶中后,可采用　　　　　　　　進行滅菌。
(2)該過程采用的接種方法是　　　　　　　　,培養一段時間要能在培養基表面形成單菌落,從操作層面需要滿足兩個條件:一是　　　　　　　　;二是涂布時要盡量做到均勻涂布。
(3)該實驗中的選擇培養基對分解尿素的細菌具有選擇作用,其原理是　　　　　　　　　　　　　　。若要判斷選擇培養基是否起到了篩選的作用,對照組的設置是　　　　　　　　　　　　。
(4)一般選擇菌落數在30~300的平板進行計數,統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
【課后作業】
1.下列有關稀釋涂布平板法計數和顯微鏡直接計數法的描述不正確的是 (　　)
A.利用血細胞計數板計數屬于顯微鏡直接計數法,其缺點是不能區分死菌與活菌
B.兩種計數方法,其統計值與實際值相比均有差異,但差異原因不同
C.兩種計數方法均能在計數的同時能觀察到所研究微生物的形態特征
D.當菌落數目穩定時,一般選取菌落數在30~300的且差異不大的平板進行計數
2.研究小組利用稀釋涂布平板法來估測大腸桿菌的數量,每一個濃度涂布四個平板。下列關于操作步驟的敘述正確的是 (　　)
A.因為實驗前后形成對照,因此本實驗不必設置空白對照組
B.涂布前將沾有少量酒精的涂布器引燃,待涂布器冷卻后再涂布
C.為避免混淆應在培養皿的皿蓋上做標記,并將培養皿倒置培養
D.用此法估測的數值往往偏小,故應以菌落數最多平板計數為準
3.某科研人員欲從被石油污染的土壤中分離獲得能降解石油成分“多環芳烴菲”的菌株X,為消除石油污染提供微生物資源。下列敘述錯誤的是 (　　)
A.若圖中A~C以“多環芳烴菲”為唯一碳源的選擇培養基進行培養,可提高降解菌的濃度
B.本實驗用到的固體培養基在接種前是不透明的,周圍有透明圈的菌落即為目的菌落
C.在接種前,可將滅菌后的空白平板先培養一段時間,目的是檢測培養基平板滅菌是否合格
D.可用平板劃線法或稀釋涂布平板法對分離出的菌種進行純化并計數
4.大腸桿菌含量是國家飲用水重要檢測指標之一,如圖所示,用濾膜法和伊紅—亞甲藍瓊脂培養基(EMB培養基)測定水中大腸桿菌含量的大致流程為準備工作→用濾膜過濾待測水樣→將濾膜轉移到EMB培養基上→培養→觀察并統計菌落數目。下列敘述正確的是 (　　)
伊紅—亞甲藍瓊脂培養基配方
基礎培養基 100 mL
20%乳糖溶液 2 mL
2%伊紅水溶液 2 mL
0.5%亞甲藍水溶液 1 mL
瓊脂 1.5 g
A.EMB培養基從用途來分屬于選擇培養基
B.配方的基礎培養基中除水外還必須含有無機鹽和碳源
C.觀察并統計菌落數目時,應選擇培養基上的深紫色菌落進行計數
D.選用濾膜孔徑的大小不會影響實驗結果
5.營養缺陷型菌株是野生型菌株經過人工誘變或自發突變失去合成某種成長因子的能力,只能在補充了相應的生長因子的基本培養基中才能正常生長的變異菌株。某研究小組對酵母菌用紫外線照射后將其接種到甲培養皿的培養基上,一段時間后將甲培養皿的菌落影印接種(不改變菌落位置)到乙、丙兩培養皿的培養基中,進一步培養得到如圖所示結果。
下列分析正確的是 (　　)
A.接種到甲培養皿采用的是稀釋涂布平板法
B.甲、丙兩培養皿中的培養基是基本培養基
C.甲培養皿中菌落數有可能比接種的酵母菌數少
D.甲、乙、丙三個培養皿都可能存在營養缺陷型
6.某種物質S(一種含氮有機物)難以降解,會對環境造成污染,只有某些細菌能降解S。研究人員按照如圖1所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細菌菌株。實驗過程中需要Ⅰ、Ⅱ兩種培養基,Ⅰ的組分為無機鹽、水和S,Ⅱ的組分為無機鹽、水、S和Y。
回答下列問題:
(1)實驗中,盛有水或培養基的搖瓶通常采用　　　　　　進行滅菌。Ⅱ培養基中的Y物質是　　　　。Ⅰ、Ⅱ培養基均屬于　　　　培養基。
(2)實驗中初步估測搖瓶M中細菌細胞數為2×107個/mL,若要在每個平板上涂布0.1 mL稀釋后的菌液,且保證每個平板上長出的菌落數不超過200個,則至少應將搖瓶M中的菌液稀釋　　　　倍。
(3)物質S在培養基中達到一定量時培養基表現為不透明。從淤泥中分離目標菌的過程中,發現培養基上甲、乙兩種細菌都能生長并形成菌落(如圖2所示)。如果要得到目標菌,應該選擇　　　　菌落進一步純化,選擇的依據是　。
(4)淤泥中的某些微生物可以利用空氣中的氮氣作為氮源。若要設計實驗進一步確定甲菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源,請簡要寫出實驗思路、預期結果和結論,即　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　。
【綜合練】
1. 我國的釀酒技術歷史悠久,古人在實際生產中積累了很多經驗。《齊民要術》記載:將蒸熟的米和酒曲混合前需“浸曲發,如魚眼湯,凈淘米八斗,炊作飯,舒令極冷”。意思是將酒曲浸到活化,冒出魚眼大小的氣泡,把八斗米淘凈,蒸熟,攤開冷透。下列說法錯誤的是 (　　)
A.“浸曲發”過程中酒曲中的微生物代謝加快
B.“魚眼湯”現象是微生物呼吸作用產生的CO2釋放形成的
C.“凈淘米”是為消除雜菌對釀酒過程的影響而采取的主要措施
D.“舒令極冷”的目的是防止蒸熟的米溫度過高導致酒曲中的微生物死亡
2.工業上所說的發酵是指微生物在有氧或無氧條件下通過分解與合成代謝將某些原料物質轉化為特定產品的過程。利用微生物發酵制作醬油在我國具有悠久的歷史。某企業通過發酵制作醬油的流程示意圖如下。
回答下列問題:
(1)米曲霉發酵過程中,加入大豆、小麥和麥麩可以為米曲霉的生長提供營養物質,大豆中的　　　　　　可為米曲霉的生長提供氮源,小麥中的淀粉可為米曲霉的生長提供　　　　。
(2)米曲霉發酵過程的主要目的是使米曲霉充分生長繁殖,大量分泌制作醬油過程所需的酶類,這些酶中的　　　　、　　　　能分別將發酵池中的蛋白質和脂肪分解成易于吸收、風味獨特的成分,如將蛋白質分解為小分子的肽和　　　　。米曲霉發酵過程需要提供營養物質、通入空氣并攪拌,由此可以判斷米曲霉屬于　　　　(填“自養厭氧”“異養厭氧”或“異養好氧”)微生物。
(3)在發酵池發酵階段添加的乳酸菌屬于　　　　(填“真核生物”或“原核生物”);添加的酵母菌在無氧條件下分解葡萄糖的產物是　　　　。在該階段抑制雜菌污染和繁殖是保證醬油質量的重要因素,據圖分析該階段中可以抑制雜菌生長的物質是　　　　(答出1點即可)。
3.含硫蛋白質在某些微生物的作用下產生硫化氫導致生活污水發臭,硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結合形成黑色沉淀。為探究發臭水體中甲、乙菌是否產生硫化氫及兩種菌的運動能力,用穿刺接種的方法分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養基上進行培養,如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等,下列說法錯誤的是 (　　)
A.乙菌的運動能力比甲菌強
B.為不影響菌的運動需選用液體培養基
C.該實驗不能比較出兩種菌產生硫化氫的量
D.穿刺接種等接種技術的核心是防止雜菌的污染
4.為純化菌種,在鑒別培養基上劃線接種纖維素降解細菌,培養結果如圖所示。下列敘述正確的是 (　　)
A.倒平板后需間歇晃動,以保證表面平整
B.圖中Ⅰ、Ⅱ區的細菌數量均太多,應從Ⅲ區挑取單菌落
C.該實驗結果因單菌落太多,不能達到菌種純化的目的
D.菌落周圍的纖維素被降解后,可被剛果紅染成紅色
5.大熊貓是我國特有的珍稀野生動物,每只成年大熊貓每日進食竹子量可達12~38 kg。大熊貓可利用竹子中8%的纖維素和27%的半纖維素。研究人員從大熊貓糞便和土壤中篩選纖維素分解菌。回答下列問題:
(1)為篩選纖維素分解菌,將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以　　　　為唯一碳源的固體培養基上進行培養,該培養基從功能上分類屬于　　　　培養基。
(2)配制的培養基必須進行滅菌處理,目的是　　　　　　　　　　　　。檢測固體培養基滅菌效果的常用方法是　 　　　　　　　　　　　　。
(3)簡要寫出測定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數的實驗思路
。
(4)為高效降解農業秸稈廢棄物,研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌,在37 ℃條件下進行玉米秸稈降解實驗,結果如表所示。在該條件下纖維素酶活力最高的是菌株　　　　,理由是　
。
菌株 秸稈總重(g) 秸稈殘重(g) 秸稈失重(%) 纖維素 降解率(%)
A 2.00 1.51 24.50 16.14
B 2.00 1.53 23.50 14.92
C 2.00 1.42 29.00 23.32
6.溫泉中含有能夠分解淀粉的耐熱古細菌,在固體培養基中,該類細菌分解淀粉會形成透明圈。如圖表示篩選能高效產生淀粉酶的耐熱古細菌的過程,下列分析正確的是 (　　)
A.②過程是利用稀釋涂布平板法分離并篩選耐熱古細菌的
B.配制Ⅰ號培養基時需要加入瓊脂,先滅菌再調節pH
C.為防止雜菌污染需要對Ⅰ、Ⅱ培養基及培養皿進行干熱滅菌
D.從Ⅰ號培養基中選擇透明圈最小的菌落接種到Ⅱ號培養基上
7.某些細菌能產生β-內酰胺酶水解抗生素,給抗感染治療帶來很大困難。利用檢測試條可檢測細菌是否產生β-內酰胺酶,試條左右兩側對稱含有一定濃度梯度的抗生素,并在一側添加克拉維酸(一種β-內酰胺酶抑制劑)。將兩個含不同抗生素的檢測試條放置在涂布有待檢菌株的培養基上,培養一段時候后結果如圖所示。下列說法正確的是 (　　)
A.抗生素的大量使用會導致產β-內酰胺酶細菌的出現
B.由實驗結果可知,越靠近試條兩端的抗生素濃度越大
C.該菌能產生β-內酰胺酶,試條1中克拉維酸添加在試條右側
D.使用試條2中所含抗生素治療該菌感染的效果更好
8.黃曲霉毒素是黃曲霉等菌株產生的一類劇毒的含碳有機物,常見于發霉糧食及糧食制品中,其中以黃曲霉毒素B1(AFB1)毒性最強。為保障食品安全,科研人員嘗試開發能有效降解AFB1的生物菌劑。
(1)欲篩選AFB1降解菌,科研人員需配制　　　　　　　　　的選擇培養基,對牦牛糞中的微生物進行培養。
(2)經連續選擇培養后,初步分離得到能降解AFB1的菌株,用　　　　　　　法接種于固體培養基上獲得　　　　,通過觀察　　　　　,初步鑒定菌種類別,進而篩選得到分泌AFB1降解酶的菌株A。
(3)用菌株A進行AFB1降解實驗,72 h內定時取樣檢測,結果如圖所示:
① 0~60 h內,發酵裝置中菌株A的種群接近于　　　形增長,60 h后菌株A密度下降,從發酵條件分析,其原因是　。
② 發酵66~72 h內,AFB1降解率幾乎不再增加,請從分子水平對這一結果作出合理解釋:　　　　　　　　　　　　。
(4)將菌株A制成用于保障食品安全的生物菌劑時,還需要解決什么問題 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
答案：
預學案
一、1.（1）聚合酶鏈式反應 耐高溫 耐高溫 聚合酶鏈式反應
2.特定種類 抑制 阻止
3.70～80℃的高溫 青霉素 高濃度食鹽 自養型 不加氮源
4.目的菌 營養 溫度 pH 抑制 阻止
二、1.稀釋涂布平板 梯度稀釋 瓊脂固體 梯度稀釋 涂布平板
2.涂布器 酒精 涂布器 酒精 轉動培養皿 倒置 單菌落
注意事項：稀釋10倍 選擇 酒精燈火焰 酒精
三、1.（1）稀釋涂布平板 一個活菌 菌落數
（2） 30～300 3 稀釋度 涂布 少 菌落數 一個菌落
（4）平均菌落數 稀釋倍數
2.顯微鏡直接 細菌 血細胞 細菌 血細胞 小
拓展： 氨 氨 增強 升高 尿素 紅色環帶 紅色環帶 大 強。
導學案
固學案：
1.D 2.B 3.A 4.A 5.A 6.B 7.D 9.D
10.B 11.A 12.D 13.D 14.D 15.D 16.D
17 . (1)脲　尿素　(2)檢測平板滅菌是否合格　4.2×106　(3)①溫度　時間　②菌落　穩定
課后作業
1.C 2.B 3.D 4.C 5.AC
6. (1)高壓蒸汽　瓊脂　選擇　(2)104　(3)乙　乙菌落周圍出現透明圈,說明乙菌能降解S　(4)將甲菌接種在不含氮源的培養基上,若甲菌能生長,則說明該細菌能利用空氣中的氮氣作為氮源
綜合練
1.C 3.B 4.B
2.答案　(1)蛋白質　碳源　(2)蛋白酶　脂肪酶　氨基酸　異養好氧　(3)原核生物　乙醇和CO2　食鹽
5.答案　(1)纖維素　選擇　(2)防止雜菌污染　將未接種的培養基放在適宜條件下培養,觀察平板上有無菌落形成　(3)將稀釋度足夠高的大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液涂布到3個以上固體培養基表面,放在適宜條件下培養,統計各平板菌落數并取平均值　(4)C　菌株C組秸稈殘重最低,秸稈失重率最大,纖維素降解率最高
6.A 7.BCD
8.答案　(1)以AFB1為唯一碳源　(2)稀釋涂布平板(或平板劃線)　單菌落　菌落特征　(3)①S　AFB1被降解,菌株A的營養物質不足;菌株A的代謝物導致裝置中溶解氧、pH等發酵條件改變,不利于菌體生長繁殖　②裝置內的AFB1降解酶活性下降　(4)需檢驗菌株A降解AFB1后生成的產物是否安全無毒

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