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選擇性必修三 第1章 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用
一、你從教材上找到的關(guān)鍵性語句：
Ⅰ、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)
1. 微生物的定義：
肉眼難以看清，需要借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能觀察到的 一切微小生物 的總稱。
微生物菌落：
分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成 肉眼可見 的、有 一定形態(tài)結(jié)構(gòu) 的 子細(xì)胞群體 ，這就是菌落。由單個(gè)微生物繁殖 形成的純培養(yǎng)物就是一個(gè)單菌落 ；
培養(yǎng)基的配制
（1）概念：人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。
（2）培養(yǎng)基作用：培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物 或 積累其代謝物
（3）培養(yǎng)基類型：
①按物理狀態(tài)可分為 液體培養(yǎng)基 和 固體培養(yǎng)基 。
②按功能可分為 選擇培養(yǎng)基 和 鑒別培養(yǎng)基 。
（4）成分：各種培養(yǎng)基一般都含有 水、碳源、氮源 和 無機(jī)鹽 ，此外還要滿足微生物生長對(duì)、、、、、、、、、、、以及、、、的要求。
5. 無菌技術(shù)
（1）關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵 。
（2）無菌技術(shù)工作兩個(gè)方面：
①對(duì)操作的_空間 、操作者的_衣著_和_手_進(jìn)行_清潔_和_消毒_；
②對(duì)用于微生物培養(yǎng)的_器皿_、__接種用具_(dá)_和__培養(yǎng)基_等進(jìn)行__滅菌_；
（3）無菌技術(shù)主要包括消毒和滅菌
項(xiàng)目 理化因素的作用強(qiáng)度 能否消滅芽孢和孢子 常用方法
消毒 較為溫和 不能 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥物消毒法、紫外線照射
滅菌 強(qiáng)烈 能 灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、濕熱滅菌法
6. 微生物的純培養(yǎng)
（1）培養(yǎng)物：在微生物學(xué)中，將接種于_培養(yǎng)基_內(nèi)，在_合適條件_下形成的__含特定種類微生物的群體_稱為培養(yǎng)物。
（2）純培養(yǎng)物：由_單一個(gè)體_繁殖所獲得的_微生物群體_稱為純培養(yǎng)物。
（3）純培養(yǎng)：__獲得純培養(yǎng)物的過程_就是純培養(yǎng)。
（4）微生物純培養(yǎng)步驟：配制培養(yǎng)基—滅菌—接種—分離—培養(yǎng)。
Ⅱ、探究.實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)
1.原理：
采用_平板劃線法_和__稀釋涂布平板法_將_單個(gè)_微生物_分散_在_固體培養(yǎng)基_上，之后得到的_單菌落_一般是由單個(gè)微生物形成的_純培養(yǎng)物_。
2.步驟
（1）制備培養(yǎng)基：配制培養(yǎng)基—滅菌—倒平板
（2）接種和分離酵母菌：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)可以分離得到 單菌落 。
（3）培養(yǎng)酵母菌：完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板（一般做三組，重復(fù)實(shí)驗(yàn)）和一個(gè)未接種的平板倒置，放入 28 ℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h h。
Ⅲ、微生物的選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
1. 選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，_允許特定種類_的微生物生長，同時(shí)_抑制或阻止其他種類_微生物生長的培養(yǎng)基。
2. 微生物的選擇培養(yǎng)：
（1）方法：_稀釋涂布平板法__；
（2）方法概述：
①由于土壤細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到特定微生物的純培養(yǎng)物，必須要對(duì)土壤進(jìn)行_充分稀釋_，然后再將菌液_涂布_到制備好的_選擇培養(yǎng)基_上；
②兩個(gè)基本操作：_梯度稀釋_和_涂布平板_。
（3）操作流程
―→―→―→―→
微生物的數(shù)量測定
間接計(jì)數(shù)法(稀釋涂布平板法) 直接計(jì)數(shù)法(顯微計(jì)數(shù)法)
原理 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌 利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量
公式 每克樣品中的菌落數(shù)＝×M；C：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù) 每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)：每小格內(nèi)平均細(xì)菌數(shù)40010稀釋倍數(shù)細(xì)細(xì)細(xì)細(xì)細(xì)細(xì)細(xì)細(xì)細(xì)細(xì)細(xì)
缺點(diǎn) 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 不能區(qū)分細(xì)胞死活
結(jié)果 比實(shí)際值偏小 比實(shí)際值偏大
Ⅳ. 探究.實(shí)踐：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
1.原理：分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶 將尿素分解為氨 ，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng) 。
2.方法：在以尿素 為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅 指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌，若指示劑變紅 ，可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。
二、判斷訓(xùn)練：
倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。(　　)
消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害。(　　)
為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落。(　　)
不同培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。(　　)
獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。(　　)
對(duì)牛奶應(yīng)采用煮沸消毒法進(jìn)行消毒。(　　)
因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量不同，所以，為獲得不同類型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離。(　　)
測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍不同。(　　)
如果在某一稀釋度下得到了兩個(gè)或兩個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。(　　)
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌具有明顯選擇作用。(　　)
培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基都需要有碳源和氮源。( )
配制固體培養(yǎng)基，加入的瓊脂可以充當(dāng)微生物的營養(yǎng)物質(zhì)。( )
接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒。( )
培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。( )
只有高壓蒸汽滅菌才能殺死微生物的芽孢和孢子。( )
可運(yùn)用平板劃線法對(duì)微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)。( )
用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，所得數(shù)據(jù)往往比實(shí)際值偏小。( )
尿素被土壤中的細(xì)菌分解成NH3，NH3再轉(zhuǎn)化為NO3－、NH4＋等被植物利用。( )
通常用以尿素為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選分解尿素的細(xì)菌。( )
以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上長出的一定都是尿素分解菌。( )
根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的特征可初步判斷和鑒別細(xì)菌的類型。( )
三、邊練邊講
練習(xí)1：微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)
1．下列關(guān)于滅菌和消毒的敘述中，不正確的是(　　)（多選）
滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子
消毒和滅菌實(shí)質(zhì)上是相同的
常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌
配制好的培養(yǎng)基應(yīng)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌
實(shí)驗(yàn)中避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)實(shí)驗(yàn)室噴灑石炭酸同時(shí)配合紫外線照射
實(shí)驗(yàn)室里可以用煮沸消毒法或巴氏消毒法進(jìn)行消毒
接種環(huán)、接種針等金屬用具，直接在酒精燈火焰的不充分燃燒層灼燒滅菌
在實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被微生物感染
玻璃器皿和金屬用具等可以采用干熱滅菌
2、微生物培養(yǎng)過程中，十分重視無菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無菌操作，防止雜菌污染。下列無菌操作錯(cuò)誤的是(　　)
A．接種時(shí)培養(yǎng)皿蓋只打開一條縫隙
B．菌種和培養(yǎng)基使用前均需滅菌處理
C．接種前后都要通過酒精燈火焰灼燒斜面菌種試管口
D．高壓蒸汽滅菌既能殺死微生物的營養(yǎng)體，也能殺死芽孢等休眠體
3、在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。回答下列問題：
(1)在實(shí)驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具_(dá)_______(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是______________________________________。
(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能__________，在照射前，適量噴灑________，可強(qiáng)化消毒效果。
(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過________(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。
(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的原因是__________________。
4、下面是倒平板的幾項(xiàng)操作，回答相關(guān)問題：
(1)請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：______________。
(2)乙中用到的滅菌方法是________。
(3)甲操作時(shí)培養(yǎng)基的溫度大約為________。
(4)丁中的操作需要等待______________才能進(jìn)行。
(5)在倒平板時(shí)為何要在酒精燈的火焰旁進(jìn)行？
_______________________________________________________
(6)接種操作時(shí)每次劃線接種前與接種后都要灼燒接種環(huán)或接種針，其目的分別是什么？
____________________________________________________________________________________________________________________________
5、右圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌的部分操作步驟，下列說法錯(cuò)誤的是(　　)
A．該分離純化大腸桿菌的方法屬于平板劃線法
B．步驟①中為操作方便，可將皿蓋放在桌面上
C．步驟②在操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行
D．步驟④中接種環(huán)共需6次灼燒處理
講解1：微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)
1．培養(yǎng)基
2．無菌技術(shù)
3．特別提醒　做好消毒和滅菌工作后，還要注意以下兩點(diǎn)：
①要注意避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸；
②許多操作都應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。
4．平板劃線法
⑴操作流程
→→
⑵注意事項(xiàng)
①灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。
②每次灼燒接種環(huán)的目的
項(xiàng)目 第一次操作 每次劃線之前 劃線結(jié)束
目的 殺死接種環(huán)上原有的微生物 殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少 殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免微生物污染環(huán)境和感染操作者
③第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)微生物繁殖而來的菌落。
④劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。
⑤倒平板的注意事項(xiàng)
A.培養(yǎng)基滅菌后為什么要冷卻到50℃左右時(shí)開始倒平板？
瓊脂是一種多糖，在44℃以下凝固，倒平板時(shí)，若低于50℃不及時(shí)操作，瓊脂會(huì)凝固。
B.為什么倒平板和接種整個(gè)過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行？
避免雜菌污染
C.倒平板時(shí)為什么要使錐形瓶的瓶口通過火焰？
通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基
D.在倒平板的過程中，若不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？
不能；因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生
E.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？
平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)。
⑥為什么測定活菌的數(shù)量不能用平板劃線法？
由于在所劃的線中，一般只有最后一次劃線的末端才會(huì)形成只由一個(gè)微生物形成的菌落，而其他一些菌落往往由兩個(gè)微生物或多個(gè)微生物繁殖而成，而在計(jì)數(shù)時(shí)一個(gè)菌落對(duì)應(yīng)著一個(gè)微生物，這樣在劃線所得的平板中，菌落數(shù)目遠(yuǎn)低于活菌的實(shí)際數(shù)值，所以不能用平板劃線法測定活菌數(shù)量。
練習(xí)2：微生物的選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
1、解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯(cuò)誤的是(　　)
A．甲菌屬于解脂菌
B．實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源
C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比
D．該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力
2、細(xì)菌對(duì)各種抗生素的藥敏程度實(shí)驗(yàn)方法如下圖：將含有一定濃度不同抗生素的濾紙片放置在已接種被檢菌的固體培養(yǎng)基表面，抗生素向周圍擴(kuò)散，如果抑制被檢菌生長，則在濾紙片周圍出現(xiàn)抑菌圈，結(jié)果如圖所示。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　)
A．抗生素Ⅲ的效果大于抗生素Ⅰ
B．為了獲得上述結(jié)果，應(yīng)使用稀釋涂布平板法
C．抑菌圈中離紙片越近的菌落對(duì)抗生素Ⅳ的抗性越強(qiáng)
D．抑菌圈中出現(xiàn)菌落的原因可能是病原菌中出現(xiàn)了能抗抗生素Ⅳ的突變株
3、圓褐固氮菌和巨大芽孢桿菌組合可以將有機(jī)廚余垃圾迅速分解成水和二氧化碳，減輕環(huán)境污染。為制備分解有機(jī)廚余垃圾的微生物菌劑，某科研小組對(duì)兩菌種進(jìn)行了最佳接種量比的探究實(shí)驗(yàn)，并得出下圖的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下列敘述正確的是(　　)
A．巨大芽孢桿菌生長過程中需要氮源，圓褐固氮菌生長過程中不需要氮源
B．要統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)量可采用平板劃線法和稀釋涂布平板法
C．將1 mL菌液稀釋100倍，在3個(gè)平板上分別接0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為42、39和36。據(jù)此可得出每升菌液中的活菌數(shù)為3.9×105
D．處理該類廚余垃圾廢液，兩種菌種的最佳接種量比為1∶1
4、為了判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染和選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需要設(shè)置的對(duì)照組的培養(yǎng)基分別是(　　)
A．未接種的選擇培養(yǎng)基，未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
B．未接種的培養(yǎng)基，接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
C．接種了的選擇培養(yǎng)基，接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
D．接種了的培養(yǎng)基，未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
5、已知一種有機(jī)物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會(huì)造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細(xì)菌(目標(biāo)菌)。
Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X(5 g/L)。
Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5 g/L)，硝酸銨(3 g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(15 g/L)。
Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5 g/L)，硝酸銨(3 g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(45 g/L)。
回答下列問題。
(1)在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基中，為微生物提供氮源的是_______________。Ⅱ、Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機(jī)物是________。
(2)若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號(hào)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，不能降解X的細(xì)菌比例會(huì)________，其原因是_______________________________________
___________________________________________________________________。
(3)Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標(biāo)菌并對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，接種時(shí)，應(yīng)采用的方法是________________。
(4)假設(shè)從Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基中得到了能高效降解X的細(xì)菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供____和______________。
6、某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列問題：
(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生________。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是______________
______________________________________________________________，
但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是___________________________________________________(答出2點(diǎn)即可)。
(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是______________________________________________________________________________________________________________________________。
(3)用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________________________________________________(答出2點(diǎn)即可)。
7、生活在土壤中的微生物種類、數(shù)量繁多，某生物小組試圖探究土壤中微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示，培養(yǎng)基成分如下表所示。請(qǐng)分析回答下列問題：
(1)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選________，這種培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。
(2)目的菌生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的________和________，實(shí)驗(yàn)中需要振蕩培養(yǎng)，目的是______________________________________________________。
(3)轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時(shí)，常采用____________________法接種，獲得單個(gè)菌落后繼續(xù)篩選。
(4)下列材料或用具中，需要滅菌的是________；需要消毒的是________(填序號(hào))。
①培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿②玻璃棒、試管、錐形瓶和吸管③實(shí)驗(yàn)操作者的雙手
(5)在做分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有________(填字母)。
①土樣不同　②培養(yǎng)基被污染　③操作失誤　④沒有設(shè)置對(duì)照
A．①②③　　B．②③④ C．①③④ D．①②④
講解2：微生物的選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
一、選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法及實(shí)例
1、加入某些特定的物質(zhì)(前提是培養(yǎng)基具備全部營養(yǎng)成分)
2、改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分
3、利用培養(yǎng)基“特定化學(xué)成分”分離
4、通過某些“特殊環(huán)境”分離
二、微生物的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組的設(shè)置
1、分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染：對(duì)照組培養(yǎng)基不接種。如果沒有接種的培養(yǎng)基上沒有菌落生長，說明培養(yǎng)物沒有被雜菌污染。
2、分析選擇培養(yǎng)基的篩選效果：對(duì)照組為完全培養(yǎng)基(如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)，如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些目標(biāo)菌。
三、微生物的數(shù)量測定
1．稀釋涂布平板法——活菌計(jì)數(shù)法
(1)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)單菌落，來源于__________________。
(2)計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M。
C：代表某一稀釋度下平板上生長的_______________。
V：代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的_________ (mL)。
M：代表_____________。
(3)統(tǒng)計(jì)方法：為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，選擇菌落數(shù)在____________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，一個(gè)稀釋度下一般設(shè)置3～5個(gè)平板，并取其___________。
(4)結(jié)果分析：當(dāng)___________細(xì)胞連在一起時(shí)，培養(yǎng)后平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_____。
2．顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
四、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
1．原理
選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基，以___________作為唯一氮源，只有能合成__________的微生物才能分解尿素。
2．操作提示
(1)無菌操作：
①取土樣的用具在使用前都需要________。
②應(yīng)在酒精燈________旁稱取土壤，并在酒精燈火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好_________。
③在稀釋土壤溶液及涂布的過程中，都要在酒精燈________旁操作，涂布前需對(duì)涂布器進(jìn)行____________。
(2)做好標(biāo)記：本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多，為避免混淆，最好在使用前就做好_______。
(3)制定計(jì)劃：對(duì)于耗時(shí)較長的生物實(shí)驗(yàn)，要事先___________，以便提高工作效率。
3．菌種鑒定
在以_______為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入________指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌，若指示劑變_____，可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。
4. 兩種純培養(yǎng)方法對(duì)比
比較項(xiàng)目 平板劃線法 稀釋涂布平板法
關(guān)鍵操作 接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線 ①一系列的梯度稀釋 ②涂布平板操作
注意事項(xiàng) 每次劃線前后 均需灼燒接種環(huán) 稀釋度要足夠高，為確保實(shí)驗(yàn)成功可以增加稀釋度的范圍
菌體獲取 在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取菌體 從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體
適用范圍 適用于好氧菌 適用于厭氧菌 和兼性厭氧菌
優(yōu)點(diǎn) 可以根據(jù)菌落的特點(diǎn)獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落 既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對(duì)微生物計(jì)數(shù)
缺點(diǎn) 不能對(duì)微生物計(jì)數(shù) 操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板
五、土壤中纖維素分解菌的分離
1、原理：剛果紅可以與纖維素形成 ，但不和纖維二糖和葡萄糖發(fā)生反應(yīng)，當(dāng)纖維素被 分解后，剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn) ，可以通過 來篩選纖維素分解菌。
2、實(shí)驗(yàn)方案
（1）土壤取樣：選擇富含纖維素的環(huán)境
（2）選擇培養(yǎng)
稱取土樣20g，在無菌條件下加入裝有30mL培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)1～2d，直至培養(yǎng)液變 。
（3）梯度稀釋
（4）將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上
（5）挑選菌落：挑選產(chǎn)生 的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。透明圈越大，說明纖維素分解菌分解利用纖維素的能力 。
3、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)
設(shè)置對(duì)照，若對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中 則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生 ，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。

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