資源簡(jiǎn)介

新人教生物一輪復(fù)習(xí)學(xué)案
第46講　微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)
課標(biāo)要求 1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是發(fā)酵工程的基礎(chǔ)。 2.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的基礎(chǔ)。 3.闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品和無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。
考點(diǎn)1　培養(yǎng)基及無(wú)菌技術(shù)
概 念 落 實(shí)
1.培養(yǎng)基的配制
（1）培養(yǎng)基的概念：人們按照微生物對(duì)　　　　　的不同需求，配制出供其　　　　　的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。
（2）培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)組成
①一般都含有　　　　、　　　　　、　　　　　和無(wú)機(jī)鹽等。
成分 含義 作用 來(lái)源
碳源 提供　　　　　的物質(zhì) 構(gòu)成生物體的細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì) 無(wú)機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)碳源：糖類(lèi)、牛肉膏等
氮源 提供氮元素的物質(zhì) 合成　　　　　　　等物質(zhì) 無(wú)機(jī)氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等； 有機(jī)氮源：蛋白胨等
無(wú)機(jī) 鹽 為微生物提供除碳、氮之外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素 為微生物提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的　　　　　等 無(wú)機(jī)化合物： KH2PO4、K2HPO4、NaCl等
水 生物體含量最高的無(wú)機(jī)化合物 良好的溶劑，參與化學(xué)反應(yīng)等 培養(yǎng)基、代謝產(chǎn)物
②需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)　　　　　、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及　　　　　的需求。
微生物 對(duì)培養(yǎng)基的需求
乳酸桿菌 添加　　　　
霉菌 將培養(yǎng)基調(diào)至　　　　　性
細(xì)菌 將培養(yǎng)基調(diào)至　　　　　性
厭氧微生物 提供　　　　　的條件
（3）培養(yǎng)基的種類(lèi)
①按物理狀態(tài)可分為以下兩類(lèi)：
培養(yǎng)基種類(lèi) 特點(diǎn) 用途
　　　　培養(yǎng)基 不含凝固劑，呈液體狀態(tài) 工業(yè)生產(chǎn)
　　　　培養(yǎng)基 含凝固劑（如　　　　　），呈固體狀態(tài) 微生物的分離、鑒定，活菌計(jì)數(shù)，菌種保藏
②按功能可分為　　　　　和鑒別培養(yǎng)基（詳見(jiàn)第47講）。
（4）培養(yǎng)基的配制原則：①目的要明確；②營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)；③pH要適宜，培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。
歸 納 總 結(jié)
（1）常見(jiàn)選擇培養(yǎng)基舉例
①缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。
②含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。
③無(wú)有機(jī)碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。
（2）幾種微生物的營(yíng)養(yǎng)和能量來(lái)源
微生物 碳源 氮源 能源
藍(lán)細(xì)菌 CO2 N、N等 光能
硝化細(xì)菌 CO2 NH3 NH3的氧化
根瘤菌 糖類(lèi)等有機(jī)物 N2 有機(jī)物
酵母菌 糖類(lèi)、蛋白質(zhì)等有機(jī)物 蛋白質(zhì)等 有機(jī)物
2.無(wú)菌技術(shù)
（1）無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品與無(wú)菌區(qū)域　　　　　　　的技術(shù)。
（2）主要包括消毒和滅菌。
比較項(xiàng)目 條件 結(jié)果 常用方法 應(yīng)用范圍
消毒 較為溫和的　　　　　或生物等方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物 煮沸消毒法 日常用品
　　　　　　　　　　　　 不耐高溫的液體
　　　　　　　　　　　　 操作空間、操作者的衣物和手等
紫外線消毒法 接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)
滅菌 強(qiáng)烈的理化方法 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括　　　　 　　　　　　　　　　　　 培養(yǎng)基、容器等
　　　　　　　　　　　　 玻璃器皿、金屬用具等
　　　　　　　　　　　　 接種工具等
特 別 提 醒
　　選擇無(wú)菌技術(shù)的原則：一要考慮無(wú)菌技術(shù)的效果，滅菌的效果比消毒要好；二要考慮操作對(duì)象的承受能力，活體生物材料、操作者的手等只能消毒，不能滅菌。
（3）其他操作
①做好消毒和滅菌工作后，要注意避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲方佑|。
②為了避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，許多操作都應(yīng)在超凈工作臺(tái)上并在　　　　　附近進(jìn)行。
③使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行　　　　　，以免污染環(huán)境。
診斷·加強(qiáng)
1.判斷下列說(shuō)法的正誤：
（1）培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，有時(shí)還需要加入一些特殊的物質(zhì)。 （　　）
（2）由于物理狀態(tài)的不同，培養(yǎng)基只有液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基兩種類(lèi)型。 （　　）
（3）消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害。 （　　）
（4）無(wú)菌操作的對(duì)象只要是沒(méi)有生物活性的材料（如培養(yǎng)基、接種環(huán)等），都可采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。 （　　）
2.消毒和滅菌最大的區(qū)別是滅菌能　　　　　　　　　　　　　　　　。
3.鏈接選擇性必修3教材 P11“資料卡”。
（1）與滅菌相比，消毒較為　　　　。
（2）下列適用于消毒處理的是　　　　。
①皮膚　②飲用水　③牛奶　④注射器　⑤試管、燒瓶　⑥玻璃棒和吸管　⑦培養(yǎng)基　⑧果汁　⑨醬油　⑩手術(shù)刀
A.①②③⑧⑨ B.④⑤⑥⑦⑩
C.①②③④⑤⑥⑧ D.以上全部
（3）三種滅菌方法的操作（連線）
　　滅菌方法　　　　　　　　　　條件　　　　　　　　　　　時(shí)間
①高壓蒸汽滅菌 A.干熱滅菌箱，160～170 ℃ a.15～30 min
②干熱滅菌 B.酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒 b.直至燒紅
③灼燒滅菌 C.100 kPa，121 ℃ c.2～3 h
典 題 固 法
（2022·湖北卷）滅菌、消毒、無(wú)菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的操作。下列相關(guān)敘述正確的是（　　）
A.動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行
B.微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C.為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌
D.可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌
（2022·全國(guó)乙卷）化合物S被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)，用菌株C可生產(chǎn)S，S的產(chǎn)量與菌株C培養(yǎng)所利用的碳源關(guān)系密切。為此，某小組通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較不同碳源對(duì)菌體生長(zhǎng)和S產(chǎn)量的影響，結(jié)果見(jiàn)表。回答下列問(wèn)題：
碳源 細(xì)胞干重/（g·L－1） S產(chǎn)量/（g·L－1）
葡萄糖 3.12 0.15
淀粉 0.01 0.00
制糖廢液 2.30 0.18
（1）通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時(shí)，需要對(duì)所需的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有　　　　　　　　　　　（答出2點(diǎn)即可）。
（2）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C生長(zhǎng)的最適碳源是　　　　；用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是　　　　。菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要　　　　　　　　　　（答出2點(diǎn)即可）等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
（3）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，碳源為淀粉時(shí)菌株C不能生長(zhǎng)，其原因是　　　　　　　　。
（4）若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)簡(jiǎn)要寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)思路：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
規(guī)范長(zhǎng)難句——該小題的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖牵捍_定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，應(yīng)該想到設(shè)置一系列濃度梯度的制糖廢液作為自變量，且需要排除其他糖原的影響，應(yīng)該以制糖廢液作為唯一碳源。重復(fù)實(shí)驗(yàn)后，S產(chǎn)量最高時(shí)對(duì)應(yīng)的制糖廢液濃度為最適宜濃度。（實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路重點(diǎn)描述自變量如何控制，如何檢測(cè)因變量，以及預(yù)測(cè)現(xiàn)象及結(jié)論）
（5）利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)驗(yàn)廢物利用，其意義是　　　　　　　　　　　　　　　　（答出1點(diǎn)即可）。
考向1　培養(yǎng)基的配制
1.下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是（　　）
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4
含量 10 g 10 g 2 g
成分 伊紅 亞甲藍(lán) 蒸餾水
含量 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A.從物理性質(zhì)看，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，從功能看，該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基
B.該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖與蛋白胨，蛋白胨又作為氮源
C.該培養(yǎng)基缺少提供無(wú)機(jī)鹽的物質(zhì)
D.該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)至合適的pH后就可以接種使用
2.（2022·廣州一模）下圖表示研究人員從土壤中分離某種細(xì)菌的簡(jiǎn)要過(guò)程。下列敘述正確的是（　　）
A.從土壤中分離目的菌時(shí)，需要對(duì)土壤和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌
B.固體培養(yǎng)基中的瓊脂是一種多糖，可為微生物生長(zhǎng)提供碳源
C.圖中所用的液體培養(yǎng)基是由固體培養(yǎng)基中加入水稀釋后得到的
D.將三角瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)，能提高培養(yǎng)液中的溶氧量和對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率
考向2　無(wú)菌技術(shù)
3.在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常通過(guò)消毒和滅菌來(lái)避免雜菌的污染。下列關(guān)于消毒和滅菌的敘述，錯(cuò)誤的是（　　）
A.牛奶的消毒常用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法
B.水廠供應(yīng)的自來(lái)水通常是經(jīng)過(guò)高錳酸鉀消毒的
C.用紫外燈對(duì)密閉教室消毒前，適量噴灑消毒液可強(qiáng)化消毒效果
D.培養(yǎng)基不能放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌
4.微生物培養(yǎng)過(guò)程中，要重視無(wú)菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止雜菌污染，下列相關(guān)操作正確的是（　　）
A.煮沸消毒法中100 ℃煮沸5～6 min可以殺死全部微生物的細(xì)胞和芽孢、孢子
B.將接種環(huán)直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇?br/>C.加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌
D.家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌
考點(diǎn)2　微生物的純培養(yǎng)
概 念 落 實(shí)
1.概念：由　　　　　　繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程就是純培養(yǎng)。
2.步驟：配制培養(yǎng)基、　　　　、接種、　　　　和培養(yǎng)等。
3.純化方法：平板劃線法和　　　　　　法。
4.酵母菌的純培養(yǎng)
（1）滅菌后的培養(yǎng)基需要倒平板，倒平板的方法如下：
甲 乙 丙 丁
①培養(yǎng)基冷卻至　　　　℃左右倒平板（溫度過(guò)高會(huì)燙手，過(guò)低培養(yǎng)基又會(huì)凝固）。
②請(qǐng)用文字和箭頭寫(xiě)出正確的倒平板操作流程：　　　　　　　。
③乙中的滅菌方法是　　　　　，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。
④甲操作是將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開(kāi)，以免　　　　　　　　　　。
⑤丁操作中倒置培養(yǎng)基需要等待　　　　　才能進(jìn)行。
⑥為防止雜菌污染，倒平板需要在　　　　　　　旁進(jìn)行。
（2）平板劃線法的操作過(guò)程是　　　　　　　　。（請(qǐng)按操作步驟填編號(hào)）
① ② ③ ④
⑤ ⑥ ⑦
（3）平板劃線操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的
操作 第一次劃線前灼燒 每次劃線前灼燒 劃線結(jié)束 后灼燒
目的 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 殺死　　　　　　　　　　　　　　　　，使每次劃線的菌種均來(lái)自　　　　　　　　　　 殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免　　　　　　　
（4）平板劃線法操作的注意事項(xiàng)
①灼燒接種環(huán)之后，要待其　　　　后才能蘸取菌液，以免溫度太高殺死菌種。
②在作第二次及以后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的　　　　開(kāi)始劃線，這樣才能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而減少，最終得到由單個(gè)微生物繁殖而來(lái)的　　　　。
③劃線時(shí)最后一次的劃線不要與　　　　的劃線相連。
④劃線力度要適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。
診斷·加強(qiáng)
1.判斷下列說(shuō)法的正誤：
（1）配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先滅菌再調(diào)pH。 （　　）
（2）平板劃線法中每一次劃線后要將接種環(huán)灼燒。 （　　）
（3）倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。 （　　）
（4）為了防止污染，接種環(huán)鯨火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落。 （　　）
2.平板劃線法如何實(shí)現(xiàn)對(duì)菌種的分離？
3.如何判斷在制備和培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基是否被污染？
典 題 固 法
　（2020·江蘇卷改編）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（　　）
A.倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整
B.圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落
C.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的
D.配制培養(yǎng)基時(shí)不需要根據(jù)微生物的種類(lèi)調(diào)整培養(yǎng)基的pH
　（2022·海南卷）為探究校內(nèi)植物園土壤中的細(xì)菌種類(lèi)，某興趣小組采集園內(nèi)土壤樣本并開(kāi)展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（　　）
A.采樣時(shí)應(yīng)隨機(jī)采集植物園中多個(gè)不同地點(diǎn)的土壤樣本
B.培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，可選用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基
C.土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落
D.鑒定細(xì)菌種類(lèi)時(shí)，除形態(tài)學(xué)鑒定外，還可借助生物化學(xué)的方法
　（2022·全國(guó)甲卷）某同學(xué)從被石油污染的土壤中分離得到A和B兩株可以降解石油的細(xì)菌，在此基礎(chǔ)上采用平板培養(yǎng)法比較二者降解石油的能力，并分析兩個(gè)菌株的其他生理功能。
實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基成分如下：
培養(yǎng)基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。
培養(yǎng)基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。
操作步驟：
①將A、B菌株分別接種在兩瓶液體培養(yǎng)基Ⅰ中培養(yǎng)，得到A、B菌液；
②液體培養(yǎng)基Ⅰ、Ⅱ口中添加瓊脂，分別制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按圖中所示在平板上打甲、乙兩孔。
回答下列問(wèn)題。
　
菌株 透明圈大小
平板Ⅰ 平板Ⅱ
A ＋＋＋ ＋＋
B ＋＋ －
（1）實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基中作為碳源的成分是　　　　　　。培養(yǎng)基中NH4NO3的作用是為菌株的生長(zhǎng)提供氮源，氮源在菌體內(nèi)可以參與合成　　　　　　（答出2種即可）等生物大分子。
（2）步驟①中，在資源和空間不受限制的階段，若最初接種N0個(gè)A細(xì)菌，繁殖n代后細(xì)菌的數(shù)量是　　　　　　。
（3）為了比較A、B降解石油的能力，某同學(xué)利用步驟②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表所示（“＋”表示有透明圈，“＋”越多表示透明圈越大，“－”表示無(wú)透明圈），推測(cè)該同學(xué)的實(shí)驗(yàn)思路是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（4）現(xiàn)有一貧氮且被石油污染的土壤，根據(jù)上表所示實(shí)驗(yàn)結(jié)果，治理石油污染應(yīng)選用的菌株是　　　　　　，理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
考向　微生物的純培養(yǎng)
（2022·湛江一模）酵母中的蛋白含量高，可用作飼料蛋白，且有些酵母能利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行繁殖。研究人員擬從土壤中分離該類(lèi)酵母并大量培養(yǎng)，操作流程如下圖。下列相關(guān)敘述正確的是（　　）
A.土樣、培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿和接種工具等都必須嚴(yán)格滅菌
B.只有過(guò)程③中使用的培養(yǎng)基需以甲醇作為唯一的碳源
C.過(guò)程⑤擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)需要保證充足的營(yíng)養(yǎng)并營(yíng)造無(wú)氧環(huán)境
D.通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度可獲得甲醇高耐受菌株
構(gòu)核心概念
練教材長(zhǎng)句
鏈接選擇性必修3教材 P12“探究·實(shí)踐”。
（1）平板倒置培養(yǎng)的目的有：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　等等。
（2）在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么這個(gè)平板不能用來(lái)培養(yǎng)微生物，因?yàn)椤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　?br/>鏈接選擇性必修3教材P13圖。
（3）平板劃線時(shí)最后一次劃線不能與第一次劃線相連，是因?yàn)椤　　　　　　　　　　　　　　　　　　?br/>拎教材“冷”點(diǎn)
鏈接選擇性必修3 教材P10“旁欄思考題”。
（1）培養(yǎng)基中的氮源可以作為合成　　　　　　　　等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物的原料。
（2）無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還能有效避免　　　　　　　　。
鏈接選擇性必修3 教材P11“資料卡”。
煮沸消毒法可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和　　　　　　　　。一般用　　　　消毒水源。紫外線消毒法可以殺死物體表面和空氣中的微生物，在照射之前還可以適量噴灑　　　　　　　　　　　　　　　　來(lái)加強(qiáng)消毒效果。
第46講　微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)
考點(diǎn)1　培養(yǎng)基及無(wú)菌技術(shù)
【概念落實(shí)】
1.（1）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)　生長(zhǎng)繁殖　（2）①水　碳源　氮源　碳元素　蛋白質(zhì)、核酸　pH　②pH　O2　維生素　酸　中性或弱堿　無(wú)氧　（3）①液體　固體　瓊脂　②選擇培養(yǎng)基
2.（1）不被微生物污染　（2）物理、化學(xué)　巴氏消毒法　化學(xué)藥物消毒法　芽孢和孢子　濕熱滅菌法　干熱滅菌法　灼燒滅菌法　（3）②酒精燈火焰　③滅菌處理
【診斷·加強(qiáng)】
1.（1）√　（2）×　（3）√　（4）×
2.殺死所有微生物，包括芽孢和孢子
3.（1）溫和　（2）A　（3）①—C—a　②—A—c　③—B—b
【典題固法】
【高考典例】
例1　D　解析：動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取不需要無(wú)菌條件，A錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無(wú)菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)不能加入抗生素，B錯(cuò)誤；一般用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，D正確。
例2　（1）高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌　（2）葡萄糖　制糖廢液　氮源、無(wú)機(jī)鹽、水　（3）菌株C缺少淀粉酶　（4）分別配制一系列不同濃度梯度的以制糖廢液為唯一碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)菌株C，其他條件相同且適宜，一段時(shí)間后，測(cè)定并比較不同濃度制糖廢液中S的產(chǎn)量，S產(chǎn)量最高時(shí)對(duì)應(yīng)的制糖廢液濃度即為生產(chǎn)S的最適碳源濃度　（5）減少污染、節(jié)省原料、降低生產(chǎn)成本
解析：（2）由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與以制糖廢液為碳源相比，以葡萄糖為碳源時(shí)菌株C的細(xì)胞干重最大，說(shuō)明最適于菌株C生長(zhǎng)的碳源是葡萄糖；而以制糖廢液為碳源時(shí)，用菌株C生產(chǎn)S的產(chǎn)量高于以葡萄糖為碳源時(shí)的產(chǎn)量，說(shuō)明最適于生產(chǎn)S的碳源是制糖廢液。微生物的生長(zhǎng)一般都需要水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、氧氣以及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求，故菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要氮源、無(wú)機(jī)鹽、水等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。（3）分析題圖表格可以看出在以淀粉為碳源的培養(yǎng)基中，菌株C不能生長(zhǎng)，原因可能是菌株C中缺少分解淀粉的酶，不能利用淀粉。
【對(duì)點(diǎn)演練】
1.B　解析：該培養(yǎng)基不含瓊脂，屬于液體培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；葡萄糖與蛋白胨均為有機(jī)物，提供碳源，而蛋白胨還含有含氮有機(jī)物，可提供氮源，B正確；K2HPO4可提供無(wú)機(jī)鹽，C錯(cuò)誤；調(diào)節(jié)pH后，培養(yǎng)基還應(yīng)該進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，D錯(cuò)誤。
2.D　解析： 從土壤中分離目的菌時(shí)，不需要對(duì)土壤進(jìn)行滅菌，需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，A錯(cuò)誤；固體培養(yǎng)基中的瓊脂是一種多糖，作用是作為凝固劑，不能為微生物生長(zhǎng)提供碳源，B錯(cuò)誤；液體培養(yǎng)基不能通過(guò)往固體培養(yǎng)基中加入水稀釋而得到，C錯(cuò)誤；將三角瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)既能提高溶氧量，提高有氧呼吸的速率，又能提高養(yǎng)料的利用率，D正確。
3.B　解析：高錳酸鉀是強(qiáng)氧化劑，不宜用于自來(lái)水消毒。
4.B　解析：煮沸消毒可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和部分芽孢，而滅菌能殺滅環(huán)境中一切微生物，包括孢子和芽孢，A錯(cuò)誤；指示劑和染料可能混有微生物，因此加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料也需要滅菌，C錯(cuò)誤；家庭制作葡萄酒時(shí)，要將容器進(jìn)行滅菌或消毒，但是葡萄不能滅菌，因?yàn)榘l(fā)酵用的酵母菌來(lái)自葡萄，D錯(cuò)誤。
考點(diǎn)2　微生物的純培養(yǎng)
【概念落實(shí)】
1.單一個(gè)體
2.滅菌　分離
3.稀釋涂布平板
4.高壓蒸汽滅菌　干熱滅菌　倒平板　未接種平板倒置　（1）①50　②丙→乙→甲→丁　③灼燒滅菌　④雜菌污染培養(yǎng)基　⑤平板冷卻凝固　⑥酒精燈火焰　（2）③①⑥④②⑦⑤　（3）上一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種　上一次劃線的末端　菌種污染環(huán)境和感染操作者　（4）①冷卻　②末端　菌落　第一次
【診斷·加強(qiáng)】
1.（1）×　（2）√　（3）×　（4）×
2.提示：在進(jìn)行第二次及以后的劃線操作時(shí)，要從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。每次劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。
3.提示：設(shè)置一組未接種微生物的空白培養(yǎng)基，與接種了微生物的平板放在相同的條件下培養(yǎng)，若空白培養(yǎng)基上未長(zhǎng)出菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基未被污染。
【典題固法】
【高考典例】
例1　B　解析：倒平板后無(wú)需晃動(dòng)，A錯(cuò)誤；Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)沒(méi)有出現(xiàn)單菌落，說(shuō)明細(xì)菌數(shù)量太多，故應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；出現(xiàn)單菌落即達(dá)到了菌種純化的目的，C錯(cuò)誤；不同的微生物所需的pH不同，配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類(lèi)調(diào)整培養(yǎng)基的pH，D錯(cuò)誤。
例2　C　解析：采集植物園中土壤樣本的原則之一是要隨機(jī)采樣，A正確；牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等，可用于細(xì)菌的培養(yǎng)，B正確；土壤溶液稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，才能將聚集的菌體分散開(kāi)，有助于在培養(yǎng)基表面形成單菌落，C錯(cuò)誤；不同種類(lèi)細(xì)菌的理化特性一般不同，鑒定細(xì)菌種類(lèi)時(shí)，除根據(jù)菌落特征進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定外，還可以借助生物化學(xué)的方法進(jìn)行鑒定，D正確。
例3　（1）石油　DNA·錘A、蛋白質(zhì)　（2）N0·（3）在無(wú)菌條件下，將等量等濃度的A菌液和B菌液分別接種到平板Ⅰ的甲和乙兩孔處，平板Ⅱ也進(jìn)行同樣的操作，在相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，比較兩個(gè)平板的兩孔處的透明圈大小并作記錄，根據(jù)透明圈大小比較A、B降解石油的能力　（4）A　A菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在沒(méi)有添加氮源的培養(yǎng)基中也能生長(zhǎng)
解析：（1）培養(yǎng)基的成分有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和水等，從組成培養(yǎng)基的物質(zhì)所含化學(xué)元素可知，作為碳源的成分是石油。生物大分子DNA·錘A、蛋白質(zhì)都含有N，故氮源在菌體內(nèi)可以參與合成這些物質(zhì)。（2）由題意“資源和空間不受限制”可知，細(xì)菌的增殖呈“J”形曲線增長(zhǎng)，由于DNA的半保留復(fù)制，細(xì)菌每繁殖一代就是上一代的2倍，根據(jù)公式Nt＝N0·λt，λ＝2，繁殖n代后細(xì)菌的數(shù)量是N0·2n。（3）分析表格數(shù)據(jù)可知，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是：在平板Ⅰ上，A菌株降解石油的能力高于B菌株；在平板Ⅱ上，A菌株仍然能降解石油，而B(niǎo)菌株不能降解石油，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的單一變量和對(duì)照原則，推測(cè)該同學(xué)的思路是：在無(wú)菌條件下，將等量等濃度的A菌液和B菌液分別接種到平板Ⅰ的甲和乙兩孔處，平板Ⅱ也進(jìn)行同樣的操作，在相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，比較兩個(gè)平板的兩孔處的透明圈大小并作記錄，根據(jù)透明圈大小比較A、B降解石油的能力。（4）由表格數(shù)據(jù)可知，在平板Ⅱ（無(wú)氮源的培養(yǎng)基）上，A菌株仍然能降解石油，而B(niǎo)菌株不能降解石油，所以要治理貧氮且被石油污染的土壤，應(yīng)該選用A菌株。
【對(duì)點(diǎn)演練】
D　解析：土樣中含有要分離的酵母，如果對(duì)其滅菌會(huì)殺死酵母，無(wú)法得到該類(lèi)酵母，因此不能對(duì)其滅菌，A錯(cuò)誤；擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)也需要以甲醇作為唯一的碳源，不是只有過(guò)程③，B錯(cuò)誤；酵母是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖，酵母擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣等條件，C錯(cuò)誤；逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，能篩選出其中的耐受菌，獲得甲醇高耐受菌株，D正確。
課堂小結(jié)與延伸
【構(gòu)核心概念】
水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源　培養(yǎng)　積累代謝產(chǎn)物　較為溫和的物理、化學(xué)或生物　部分微生物　強(qiáng)烈的理化　所有的微生物　芽孢和孢子
【練教材長(zhǎng)句】
（1）既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基中，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)
（2）空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生
（3）最后一次劃線已經(jīng)將細(xì)菌稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連，則增加了細(xì)菌的數(shù)目，達(dá)不到純化的效果。
【拎教材“冷”點(diǎn)】
（1）蛋白質(zhì)、核酸、磷脂
（2）操作者自身被微生物感染
（3）一部分芽孢　氯氣　石炭酸或煤酚皂溶液

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