資源簡(jiǎn)介

（2）純凈的目標(biāo)微生物可通過分離和純化獲得
——高二生物學(xué)浙科版（2019）選擇性必修三課堂速測(cè)
基礎(chǔ)檢測(cè)
一、目標(biāo)微生物的分離和純化
1. 單菌落：在固體培養(yǎng)基上采用 或稀釋涂布的方法接種，通過培養(yǎng)獲得的由一個(gè)細(xì)胞分裂形成的、肉眼可見的、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)。
2. 分離微生物的方法——平板劃線法和稀釋涂布平板法
方法 平板劃線法 稀釋涂布平板法
工具 接種環(huán) 涂布器
方法 平板劃線法 稀釋涂布平板法
接種方法 蘸取菌液/挑取固體表面微生物→在平板上連續(xù)平行劃線、扇形劃線或多次連續(xù)平行劃線 菌液梯度稀釋→取不同稀釋度菌液0. 1 mL加在平板上→涂布器均勻涂布
分離結(jié)果 在劃線的尾部能得到單菌落 適當(dāng)稀釋度下得到單菌落
培養(yǎng)結(jié)果示例
用途 用于微生物的分離 用于微生物的分離、計(jì)數(shù)
(1)平板劃線操作的注意事項(xiàng)
①扇形劃線接種：每劃一條線都要將接種環(huán)在酒精燈的火焰上滅菌，然后再次從同一起點(diǎn)變換方向劃線。
②多次連續(xù)平行劃線接種
a. 劃線可分3~4次進(jìn)行，將培養(yǎng)皿旋轉(zhuǎn)一定角度后，不需再次蘸取菌種，在上一次劃線的末端區(qū)域直接開始劃線。
b. 劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的菌落。c. 最后一次劃線與第一次的劃線不能相連的原因：最后一次劃線已經(jīng)將細(xì)菌稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連，則增加了細(xì)菌的數(shù)目，得不到純化的效果。
③平板劃線法都只用 蘸取一次菌液，每次劃線前后都需要灼燒接種環(huán)。
(2)平板劃線操作中的灼燒及其目的
項(xiàng)目 目的
蘸取菌液前灼燒 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染菌種
每次劃線前灼燒 殺死上一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)接種環(huán)上的菌種直接來源于上一次劃線的末端
劃線操作結(jié)束后灼燒 及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免菌種污染環(huán)境、感染操作者
小試牛刀
1.若在固體培養(yǎng)基上用稀釋涂布平板法接種細(xì)菌,看到的培養(yǎng)結(jié)果不可能是( )
A. B.
C. D.
2.將土壤稀釋液涂布于選擇培養(yǎng)基上，若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，還需要設(shè)置的對(duì)照是( )
A.未接種的選擇培養(yǎng)基
B.未接種的牛肉膏蛋白脈培養(yǎng)基
C.相同條件下接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
D.相同條件下接種了的選擇培養(yǎng)基
3.采用平板法培養(yǎng)微生物的過程中，使微生物均勻分布在培養(yǎng)基上需要用到的工具是( )
A.接種環(huán) B.涂布器 C.接種針 D.移液管
4.下列不能測(cè)定樣品微生物數(shù)的方法是( )
A.稀釋涂布平板法 B.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
C.濾膜法 D.平板劃線法
5.“能分解尿素的微生物的分離與計(jì)數(shù)”的實(shí)驗(yàn)中，在尿素固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的尿素分解菌直接利用的氮源是( )
A.尿素 B.氨 C.瓊脂糖 D.蛋白胨
6.將適量的菌種接種到無菌全營(yíng)養(yǎng)的固體培養(yǎng)基表面上，一段時(shí)間后會(huì)形成菌落，下圖表示接種后的培養(yǎng)結(jié)果，其中接種方法不同于其他三個(gè)培養(yǎng)皿的是( )
A. B.
C. D.
7.學(xué)校一同學(xué)按照“土壤取樣→樣品稀釋→在鑒別苯酚分解菌的固體培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)→挑選目的菌株”的步驟想要獲得能分解苯酚的微生物，但總是無法獲得，指導(dǎo)老師建議添加選擇培養(yǎng)這一步驟，原因是( )
A.土壤中能分解苯酚的微生物數(shù)量較少
B.該同學(xué)制備的固體培養(yǎng)基無選擇作用
C.該同學(xué)的培養(yǎng)基被含碳物質(zhì)污染了
D.該同學(xué)實(shí)驗(yàn)操作過程中容易引入雜菌
8.某同學(xué)利用稀釋涂布平板法進(jìn)行菌落數(shù)目的統(tǒng)計(jì)，在101、102、103倍稀釋液的平均菌落數(shù)為2760個(gè)/mL、295個(gè)/mL和46個(gè)/mL，則菌落總數(shù)(個(gè)/mL)為( )
A.3.76×104 B.3.95×104 C.3.6×104 D.3.775×104
答案以及解析
1.答案：D
解析：A、B、C選項(xiàng)的固體培養(yǎng)基上所形成的是單個(gè)菌落，是用稀釋涂布平板法接種細(xì)菌培養(yǎng)后得到的結(jié)果，D選項(xiàng)的固體培養(yǎng)基上所形成的不是單菌落，是平板劃線法接種細(xì)菌后培養(yǎng)得到的結(jié)果。
2.答案：C
解析：對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除所控因素外其他條件對(duì)與被對(duì)照組實(shí)驗(yàn)完全對(duì)等的實(shí)驗(yàn)，判斷選擇培養(yǎng)基是否起到選擇作用，則接種了的選擇培養(yǎng)基為實(shí)驗(yàn)組，而接種了的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基為對(duì)照組，將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在相同培養(yǎng)條件下，在牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目。因此，應(yīng)設(shè)置相同條件下接種了的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基作為對(duì)照，C正確，故選C。
3.答案：B
解析：采用平板法培養(yǎng)微生物的過程中，采用稀釋涂布平板法培養(yǎng)微生物，使微生物均勻分布在培養(yǎng)基上需要用到的工具是玻璃涂布器，B符合題意。
4.答案：D
解析：A、稀釋涂布平板法能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌，A正確；
B、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法可測(cè)定樣品微生物數(shù)目，缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌與活菌，B正確；
C、濾膜法能測(cè)定樣品微生物數(shù)，例如用濾膜法測(cè)定自來水中大腸桿菌的數(shù)目，C正確；
D、平板劃線法可用于分離微生物，但不能測(cè)定樣品微生物數(shù)目，D錯(cuò)誤。
故選D。
5.答案：B
解析：尿素分解菌分泌脈酶，將尿素降解為氨，氨作為其生長(zhǎng)的氮源，ACD錯(cuò)誤，B正確。故選B。
6.答案：C
解析：ABD項(xiàng)培養(yǎng)皿的接種方法是稀釋涂布平板法，C項(xiàng)培養(yǎng)的接種方法是平板劃線法。故選C。
7.答案：A
解析：A、因?yàn)橥寥乐心芊纸獗椒拥奈⑸飻?shù)量較少，所以該同學(xué)總是無法獲得能分解苯酚的微生物，可添加選擇培養(yǎng)這一步驟，選擇培養(yǎng)能增加能分解苯酚的微生物的濃度，以確保能夠從樣品中分離得到能分解苯酚的微生物，再在鑒別苯酚分解菌的固體培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)，挑選目的菌株，BCD不符合題意，A符合題意；故選A。
8.答案：D
解析：在進(jìn)行稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),需要選擇菌落數(shù)在30~300的進(jìn)行計(jì)數(shù),否則會(huì)導(dǎo)致誤差過大,因此菌落總數(shù)應(yīng)該為46×103=4.6×104個(gè)/mL,295×102=2.95×104個(gè)/mL,二者的平均數(shù)為(4.6+2.95)÷2×104=3.775×104個(gè)/mL,即D正確。故選D。
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