資源簡介

課后限時集訓(十三)
1．D　[在脫分化過程中，1號培養基中的愈傷組織是排列不規則的薄壁組織團塊，A錯誤；愈傷組織細胞分化時可能會發生基因突變，但基因重組發生在減數分裂過程中，而愈傷組織細胞的分化過程是有絲分裂，所以不會發生基因重組，B錯誤；3號培養基用于誘導生根，其細胞分裂素濃度與生長素濃度的比值應該小于1，C錯誤；百合分生區附近的病毒極少，甚至無病毒，因此可以作為該研究中的外植體，D正確。]
2．A　[透明顫菌屬于細菌，細胞壁的成分主要是肽聚糖，可用溶菌酶去除細胞壁，但青霉菌是真菌，細胞壁成分主要是幾丁質，不能用溶菌酶去除細胞壁，A錯誤；處理③可用物理法電融合法或化學法聚乙二醇等誘導融合，B正確；處理④在缺乏甲硫氨酸和精氨酸的培養基培養融合細胞，能夠生長的即為雜種菌株，C正確；青霉菌(屬真菌)發酵為高耗氧過程，透明顫菌(屬細菌)可通過在低氧條件下高表達血紅蛋白以促進氧氣供應和增強細胞呼吸，為驗證方案是否成功可在低氧條件下培養雜種菌株并檢測其密度，D正確。]
3．B　[根據表格信息可知，WOX5能維持未分化狀態，使植物細胞保持分裂能力強、較高的全能性，若WOX5失活后，中層細胞會喪失干細胞分裂能力強、分化程度低的特性，A錯誤；由題干信息“生長素的生理作用大于細胞分裂素時有利于根的再生”，再結合表格信息，WOX5＋PLT可能誘導出根，可推測WOX5＋PLT可能有利于愈傷組織中生長素的積累，B正確；由題意可知，生長素的生理作用小于細胞分裂素時有利于芽的再生，而抑制ARR5能誘導出芽，可知ARR5被抑制時細胞分裂素較多，故可推測ARR5抑制細胞分裂素積累或降低細胞對細胞分裂素的敏感性，C錯誤；出芽或出根都是生長素與細胞分裂素含量不均衡時才會發生，故可推測體細胞中生長素和細胞分裂素的作用可能相互抑制，D錯誤。]
4．B　[據題分析可知，灌流式培養的動物細胞可以避免出現貼壁生長的現象，A錯誤；灌流是在細胞密度達到一定濃度或者營養物質低于一定濃度時進行的，B正確；過高的灌流速率，會導致培養的細胞不能及時利用營養物質，而使營養物質不能得到充分利用，C錯誤；補充動物血清是為了提供動物細胞培養所需要的營養物質和某種生長因子，D錯誤。]
5．C　[乙肝康復者的血清中含有對抗乙肝病毒的抗體，因而可治療乙肝，但抗體不具有長久性，A錯誤；將E蛋白的相關基因重組到腺病毒基因組中可制成乙肝疫苗，B錯誤；利用單克隆抗體技術獲得的抗E蛋白抗體，可用于檢測乙肝病毒的存在，C正確；將E蛋白對應的mRNA制成疫苗，可進入細胞內編碼出相應的抗原蛋白，進而刺激機體產生特異性免疫反應，而E蛋白的合成過程不會發生在血漿中，D錯誤。]
6．B　[促性腺激素能作用于卵巢，藏羊甲需用促性腺激素處理使其卵巢卵泡發育和超數排卵，A正確；從卵巢中剛采集的卵母細胞需培養成熟(減數分裂Ⅱ中期)后才可與獲能的精子進行體外受精，B錯誤；在胚胎移植前要對接受胚胎的受體和供體進行同期發情處理，使受體的生理狀況相同，因此受體藏羊丙需和藏羊甲進行同期發情處理，C正確；后代丁是由藏羊甲的卵細胞和藏羊乙的精子結合形成的受精卵發育而來，因此后代丁的遺傳物質來源于藏羊甲和藏羊乙，D正確。]
7．B　[限制酶失活會使DNA完全不被酶切，此時應更換新的限制酶，A正確；酶切條件不合適通常會使切割效果下降，調整反應條件如溫度和pH等，調整酶的用量沒有作用，B錯誤；質粒DNA突變會導致限制酶識別位點缺失，進而造成限制酶無法進行切割，此時應更換為正常質粒，C正確；質粒DNA上酶切位點被甲基化修飾，會導致對DNA甲基化敏感的限制酶無法進行酶切，此時應換用對DNA甲基化不敏感的限制酶，D正確。]
8．D　[由題意可知，當水稻處于高Na＋環境時，細胞膜上的轉運蛋白SOS1可借助膜兩側的H＋濃度梯度以主動運輸的方式將Na＋排到細胞外，A正確；SOS1基因含有限制酶BamHⅠ、SmaⅠ和EcoRⅠ的酶切位點，所以將SOS1基因插入表達載體中不可選用限制酶SmaⅠ和EcoRⅠ，B正確；檢測GFP基因是否以正確方向連接到質粒可用引物F1和R2進行擴增，C正確；F2和R2為綠色熒光蛋白基因(GFP)的引物，無法檢測到是否含有SOS1基因，D錯誤。]
9．A　[題意顯示，研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L-谷氨酸脫羧酶基因(gadB)導入生產菌株E．coliA，說明可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB，A正確；題意顯示，用L-谷氨酸脫羧酶(gadB)催化L-谷氨酸脫羧是高效生產γ-氨基丁酸的重要途徑之一，E．coliB中能表達L-谷氨酸脫羧酶(gadB)，因此可用E．coliB發酵生產γ-氨基丁酸，該過程中L-谷氨酸鈉是反應原料，而非起供能作用，B錯誤；將目的基因(gadB)導入菌株E．coliA構建高效生產γ-氨基丁酸的菌株E．coliB，E．coliA和E．coliB均不能高效降解γ-氨基丁酸，C錯誤；據題中信息無法推斷出是否有其他酶能夠替代NcoⅠ和KpnⅠ構建重組質粒，D錯誤。]
10．B　[將綠色熒光蛋白(GFP)基因、Ga14蛋白基因等轉入斑馬魚，可用于監測水體 E 物質，推測斑馬魚的某些細胞存在 E 物質的受體，A正確；結合題圖，ERE誘導Ga14基因轉錄，其翻譯產物Ga14蛋白與USA結合驅動了GFP基因的表達，這是一個間接驅動而非直接驅動的過程，B錯誤；用于監測 E 物質污染的轉基因斑馬魚最好是不育的，避免因有性生殖帶來的基因污染，C正確；基因表達載體最好以顯微注射法導入斑馬魚受精卵，受精卵全能性高，基因成功表達的概率大，D正確。]
11．ABD　[由于引物接在了目的基因的兩側，因此經過兩輪PCR后，可獲得與HMA3基因等長的DNA單鏈，故若要獲取HMA3基因，可用引物1、引物2進行PCR循環至少3輪獲得，A錯誤；用凝膠電泳鑒定PCR產物，引物1、引物2擴增的產物可能會得到引物帶、引物二聚體帶、目的擴增產物帶和非目的擴增產物帶等多條不同的條帶，B錯誤；構建含HMA3和GFP基因的重組質粒時，需要有啟動子和終止子序列，又不破壞GFP基因，因此需要在引物上添加BglⅡ和HindⅢ的識別序列，C正確；質粒上含有潮霉素抗性基因，用含潮霉素的培養基篩選受體細胞，能生長的為含重組質粒或含普通質粒的受體細胞，D錯誤。]
12．ABD　[據圖分析，將野生型基因內部的部分堿基剪切，改變的是基因內部的堿基序列，屬于可遺傳變異中的基因突變，A錯誤；分析圖1可知，要將基因的2、3、4共3個片段切除，需要設計2個sgRNA，B錯誤；基因敲除后，其核苷酸數量減少，電泳時移動速度快，距離加樣孔的位置遠，4和12個體均為基因敲除純合子，因此4和12個體雜交的子代均為基因敲除純合子，C正確；3個體的基因未敲除，5個體為基因敲除雜合子，7個體為基因敲除純合子，因此3和5體內均能檢測到PD-1，7個體檢測不到PD-1，D錯誤。]
13．(1)免疫監視　(2)PD-1的單克隆抗體與PD-1結合，阻斷了PD-1和PD-L1的結合，避免PD-L1抑制T細胞的活化　(3)PSMA、CD28　兩種雜交瘤細胞　L鏈和H鏈隨機組合　(4)PSMA×CD28和PD-1單抗聯合使用能夠顯著激活T細胞，且在一定范圍內激活作用隨抗體濃度的增加而增強；單獨使用PSMA×CD28或PD-1單抗都不能顯著激活T細胞(合理即可)
14．(1)DNA聚合酶和DNA連接酶　F1(或P基因左側)3′端序列　(2)BclⅠ和SmaⅠ　①④　(3)先篩選出能在含四環素培養基上生長而不能在含氨芐青霉素培養基上生長的農桿菌，再用含草甘膦的培養基篩選出導入融合基因的擬南芥細胞　(4)根　促進植物對磷元素的吸收課后限時集訓(十三)　細胞工程和基因工程
(建議用時：30分鐘)
一、選擇題
1．(2024·甘肅卷)蘭州百合栽培過程中易受病毒侵染，造成品質退化。某研究小組嘗試通過組織培養技術獲得脫毒苗，操作流程如下圖。下列敘述正確的是(　　)
A．①為脫分化過程，1號培養基中的愈傷組織是排列規則的薄壁組織團塊
B．②為再分化過程，愈傷組織細胞分化時可能會發生基因突變或基因重組
C．3號培養基用于誘導生根，其細胞分裂素濃度與生長素濃度的比值大于1
D．百合分生區附近的病毒極少，甚至無病毒，可以作為該研究中的外植體
2．(2024·湖北武漢模擬預測)青霉菌(屬真菌)發酵為高耗氧過程，透明顫菌(屬細菌)可通過在低氧條件下高表達血紅蛋白以促進氧氣供應和增強細胞呼吸。下圖為將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌的方案。下列說法錯誤的是(　　)
A．處理①、②中都可以用溶菌酶去除細胞壁
B．處理③可用電融合法或者聚乙二醇融合法
C．處理④需將融合細胞接種在缺乏甲硫氨酸和精氨酸的培養基上
D．為驗證方案是否成功可在低氧條件下培養雜種菌株并檢測其密度
3．(2024·福建福州模擬)植物體細胞通常被誘導為愈傷組織后才能表現全能性。研究發現，愈傷組織的中層細胞是根或芽再生的源頭干細胞，其在不同條件下，通過基因的特異性表達調控生長素、細胞分裂素的作用，表現出不同的效應(見下表)。已知生長素的生理作用大于細胞分裂素時有利于根的再生；反之，有利于芽的再生。下列推論合理的是(　　)
條件 基因表達產物和相互作用 效應
① WOX5 維持未分化狀態
② WOX5＋PLT 誘導出根
③ WOX5＋ARR2，抑制ARR5 誘導出芽
A．WOX5失活后，中層細胞會維持干細胞特性
B．WOX5＋PLT可能有利于愈傷組織中生長素的積累
C．ARR5促進細胞分裂素積累或提高細胞對細胞分裂素的敏感性
D．體細胞中生長素和細胞分裂素具有協同作用
4．(2024·山東聊城二模)灌流式培養是在細胞培養管內，一邊不斷注入新鮮培養基，一邊將培養液的上清液不斷移出。區別傳統的懸浮培養，灌流式培養可避免因細胞密度過大、有害代謝物積累等因素而使細胞分裂受阻的現象出現。下列敘述正確的是(　　)
A．灌流式培養的細胞會貼壁生長，但不會出現接觸抑制的現象
B．灌流是在細胞密度達到一定濃度或者營養物質低于一定濃度時進行的
C．灌流速率越高，營養物質利用越充分
D．向培養管注入的新鮮培養基中補充動物血清是為了防止雜菌污染
5．(2024·湖北華中師大附中模擬)慢性乙型肝炎由乙肝病毒(HBV)感染引起，HBV在患者體內持續存在且含量較高。E肽是HBV的一種外殼蛋白，可作為抗原被宿主免疫系統識別并應答。為治療和預防慢性乙肝，科研人員設計了以下方案，合理的是(　　)
A．輸入乙肝康復者的血清可治療和長期預防乙肝
B．將E蛋白重組到腺病毒基因組中可制成乙肝疫苗
C．利用單克隆抗體技術獲得的抗E蛋白抗體，可用于檢測乙肝
D．將E蛋白對應的mRNA制成疫苗，可刺激機體在血漿中表達出E蛋白
6．(2024·甘肅卷)甘加藏羊是甘肅高寒牧區的優良品種，是季節性發情動物，每年產羔一次，每胎一羔，繁殖率較低。為促進畜牧業發展，研究人員通過體外受精、胚胎移植等胚胎工程技術提高藏羊的繁殖率，流程如下圖。下列敘述錯誤的是(　　)
A．藏羊甲需用促性腺激素處理使其卵巢卵泡發育和超數排卵
B．藏羊乙的獲能精子能與剛采集到的藏羊甲的卵母細胞受精
C．受體藏羊丙需和藏羊甲進行同期發情處理
D．后代丁的遺傳物質來源于藏羊甲和藏羊乙
7．(2024·湖南卷)某同學將質粒DNA進行限制酶酶切時，發現DNA完全沒有被酶切，分析可能的原因并提出解決方法。下列敘述錯誤的是(　　)
A．限制酶失活，更換新的限制酶
B．酶切條件不合適，調整反應條件如溫度和酶的用量等
C．質粒DNA突變導致酶識別位點缺失，更換正常質粒DNA
D．酶切位點被甲基化修飾，換用對DNA甲基化不敏感的限制酶
8．(2024·廣東汕頭二模)當水稻處于高Na＋環境時，細胞膜上的轉運蛋白SOS1可借助膜兩側的H＋濃度梯度將Na＋排到細胞外。某研究團隊擬構建SOS1基因和綠色熒光蛋白基因(GFP)的融合基因轉入水稻基因組，以期增強水稻的抗鹽能力。下列敘述錯誤的是(　　)
A．水稻通過轉運蛋白SOS1以主動運輸的方式將Na＋運輸到細胞外
B．將SOS1基因插入表達載體中不可選用限制酶SmaⅠ和EcoRⅠ
C．檢測GFP基因是否以正確方向連接到質粒可用引物F1和R2進行擴增
D．檢測F2和R2的擴增結果能確定水稻是否為SOS1-GFP基因的純合子
9．(2024·江西卷)γ-氨基丁酸在醫藥等領域有重要的應用價值。利用L-谷氨酸脫羧酶(GadB)催化L-谷氨酸脫羧是高效生產γ-氨基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L-谷氨酸脫羧酶基因(gadB)導入生產菌株E.coliA。構建了以L-谷氨酸鈉為底物高效生產γ-氨基丁酸的菌株E.coliB。下列敘述正確的是(　　)
A．上圖表明，可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB
B．E.coliB發酵生產γ-氨基丁酸時，L-谷氨酸鈉的作用是供能
C．E.coliA和E.coliB都能高效降解γ-氨基丁酸
D．可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構建重組質粒
10．(2024·湖北武漢二模)水中E物質污染會導致魚類雌性化異常。將綠色熒光蛋白(GFP)基因、Ga14蛋白基因等轉入斑馬魚，可用于監測水體E物質，下圖中ERE和UAS是兩種誘導型啟動子，分別被E物質—受體復合物和Ga14蛋白特異性激活，啟動下游基因表達。下列敘述錯誤的是(　　)
A．斑馬魚的某些細胞存在E物質的受體
B．ERE直接驅動了GFP基因的表達
C．用于監測E物質污染的轉基因斑馬魚最好是不育的
D．基因表達載體最好以顯微注射法導入斑馬魚受精卵
11．(不定項)(2024·湖南岳陽模擬)東南景天中的HMA3基因能編碼Cd(鎘)轉運蛋白，Cd轉運蛋白能將土壤中的Cd吸收進體內，現欲將東南景天中的HMA3基因轉入欒樹，以增強欒樹對Cd的富集能力，從而有效治理Cd污染，科研人員利用下圖結構構建重組DNA，圖1為HMA3基因所在DNA示意圖，圖2為質粒結構示意圖，下列敘述錯誤的是(　　)
A．欲獲取HMA3基因，可用引物1、引物2進行PCR循環至少2輪獲得
B．用凝膠電泳鑒定PCR產物，引物1、引物2擴增的產物可得3條條帶
C．構建含HMA3和GFP基因的重組質粒，需在引物上添加BglⅡ和HindⅢ的識別序列
D．用含潮霉素的培養基篩選受體細胞，能生長的為含重組質粒的受體細胞
12．(不定項)(2024·山東濰坊三模)CRISPR/Cas9基因編輯技術根據靶基因序列設計向導sgRNA，精確引導核酸酶Cas9切割與sgRNA配對的DNA，相關酶在修復斷裂DNA的過程中會改變連接部位的堿基序列。科研人員通過刪除編碼PD-1蛋白基因的2、3、4片段造成蛋白質的功能缺失，制作PD-1基因敲除鼠的流程如圖1所示。將體外轉錄獲得的Cas9mRNA和sgRNA導入小鼠的受精卵中，獲得了12只基因編輯小鼠。利用PCR鑒定小鼠的基因型，電泳結果如圖2所示。已知P1和P2是PCR的引物。下列相關分析錯誤的是(　　)
A．敲除2、3、4片段引起的變異屬于染色體變異
B．敲除前，根據敲除的位置需要設計3個sgRNA
C．圖2中，4和12個體雜交的子代均為敲除純合子
D．圖2中，3、5、7個體的體內均能檢測到PD-1
二、非選擇題
13．(2024·廣東廣州二模)癌癥的免疫療法通過重新激活抗腫瘤的免疫細胞，克服腫瘤的免疫逃逸，科研人員在不斷研究中發現多種免疫治療方法的結合是提高治療效果的途徑之一。請回答下列問題：
(1)免疫系統能夠識別和清除突變的細胞，這體現了免疫系統的________功能。
(2)由于基因突變，癌細胞表面物質發生改變，如某些種類癌細胞表面高表達膜蛋白PSMA和PD-L1。圖1中PD-L1能抑制T細胞的活化，使癌細胞發生免疫逃逸。臨床上可利用PD-1的單克隆抗體進行癌癥治療，據圖1推測，其原因是_____________________________________________________________________
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(3)CD28是T細胞表面受體，T細胞的有效激活依賴于CD28在癌細胞與T細胞結合部位的聚集。因此，科研人員嘗試構建既能結合PSMA，又能結合CD28的雙特異性抗體PSMA×CD28，誘導T細胞定向殺傷癌細胞，如圖2所示。
制備過程：先將________________分別注射到小鼠體內，分離出B淋巴細胞，誘導其與小鼠的骨髓瘤細胞融合，篩選得到______________________，再誘導兩種細胞融合。成功融合的細胞會表達兩種L鏈和兩種H鏈，由于________________會產生多種抗體，因此還需進行篩選，才能獲得所需的雙特異性抗體PSMA×CD28。
(4)科研人員將癌細胞和T細胞共同培養，加入不同抗體，比較不同抗體對T細胞活化的作用。實驗各組由活化T細胞產生的細胞因子IL-2含量如圖3所示，實驗結果說明_________________________________________________________
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14．(2024·山東濰坊二模)A蛋白是某種激素合成的關鍵酶。為鑒定該激素合成的部位及生理作用，科研團隊利用無縫克隆技術將A蛋白結合蛋白基因(P基因)與葡萄糖苷酸酶基因(GUS基因)融合，構建A蛋白檢測探針，通過農桿菌轉化法導入擬南芥進行實驗。相關原理、過程及質粒的結構如下圖所示。
注：①bar為抗草甘膦(一種除草劑)基因，Tetr為四環素抗性基因，Ampr為氨芐青霉素抗性基因；②F1、F2、R1、R2為引物；③BamHⅠ、SmaⅠ、BclⅠ為限制酶。
(1)無縫克隆時所需的酶除T5核酸外切酶外還有__________________。用無縫克隆技術構建GUS-P融合基因的關鍵是R2引物5′端序列與_________________互補。
(2)利用雙酶切法將融合基因插入Ti質粒，選用的限制酶為________________。擴增融合基因所需的引物R1和F2應選用下列引物組合為________。
①5′-…CTTGGATGAT-3′
②5′-…TAAGTTGTCT-3′
③5′-…ATTCAACAGA-3′
④5′-…TCTGTTGAAT-3′
(3)利用農桿菌轉化法將融合基因導入農桿菌、擬南芥細胞的過程中，需要篩選兩次，這兩次篩選分別是________________________________________________
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(4)葡萄糖苷酸酶可以水解X-Gluc呈藍色，將轉基因擬南芥置于不同培養液中培養一段時間，然后分離不同部位的組織分別加入X-Gluc進行鑒定，結果如下表所示：
部位 根 莖 葉
完全培養液 藍色 淺藍 淺藍
缺磷培養液 深藍 藍色 淺藍
分析表明，該激素最主要的合成部位是______，通過實驗結果分析該激素的生理作用是_______________________________________________________________
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