資源簡介

第54講　微生物的培養技術及應用
一、選擇題
1.（2025·重慶聯考）防止雜菌污染，獲得純凈的培養物，是研究和應用微生物的前提。下列敘述錯誤的是（　　）
A.實驗室里可用紫外線或化學藥物對物體表面或空氣進行消毒
B.實驗室里不可吃東西，離開時一定要洗手以防被微生物感染
C.接種環、接種針等用具應在酒精燈火焰的內焰部位灼燒滅菌
D.使用后的培養基在丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環境
2.（2025·福建南平高三聯考）下列關于微生物純培養的敘述，錯誤的是（　　）
A.倒平板操作應等培養基冷卻至50 ℃左右時，在酒精燈火焰附近進行
B.微生物的純培養包括配制培養基、滅菌、接種、分離和培養等步驟
C.用平板劃線法和稀釋涂布平板法都能在固體培養基上得到單菌落
D.涂布平板時應先將培養皿蓋置于實驗操作臺上
3.（2025·福建寧德五校聯合檢測）為加速我國北方冬春季秸稈原位還田的腐化過程，研究人員以凍牛糞為材料篩選出耐低溫（10 ℃）的纖維素降解菌。下列相關敘述正確的是（　　）
A.選用凍牛糞為材料與其富含纖維素及含耐低溫微生物有關
B.初篩菌種前，要利用固體培養基在37 ℃條件下擴大培養目標菌種
C.用于篩選的培養基是加入剛果紅染料的牛肉膏蛋白胨培養基
D.應選擇菌落直徑與周圍透明圈直徑比值大的菌落進行純化
4.（2025·山東淄博模擬）從土壤中分離某種微生物的培養基配方如圖，該培養基中，果膠被剛果紅染成紅色。將土壤稀釋液接種在該培養基上，培養一段時間后，平板上出現多個周圍有透明圈的菌落。下列分析錯誤的是（　　）
A.該培養基可用于分離產果膠酶的微生物 B.培養基配方中的X應為瓊脂
C.KH2PO4和Na2HPO4能維持培養基的pH D.周圍出現透明圈的菌落全部為同一種微生物的克隆
5.（2025·山東濟寧模擬）耐高溫淀粉酶在大規模工業生產中有很大的實用性。嗜熱菌可以在高溫環境中生存，其產生的淀粉酶最適溫度較高。篩選能產生耐高溫淀粉酶的嗜熱菌過程如圖1所示，其中Ⅰ號培養基用碘液處理的結果如圖2所示。下列敘述正確的是（　　）
A.圖2中周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種
B.倒平板后對培養皿進行高壓蒸汽滅菌
C.淀粉是圖2所示固體培養基的唯一碳源
D.甲、乙試管中均為選擇培養基
6.（2025·廣東湛江模擬）自生固氮菌是土壤中能獨立進行固氮的細菌。科研人員進行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如下圖所示。已知步驟④獲得的3個平板的菌落數分別為90、95、100，對照組平板為0。下列相關敘述正確的是（　　）
A.步驟②振蕩20 min的目的是擴大菌種數量，屬于選擇培養
B.步驟④使用接種環劃線接種，使用前需要灼燒滅菌
C.1 g土壤中平均自生固氮菌數約為9.5×106個
D.所用培養基應加入碳源、氮源、無機鹽、水和瓊脂
7.（2025·江蘇南京、鹽城模擬）為了解病原微生物對四種抗生素的敏感程度，某研究小組進行了相關藥敏實驗，圖1為部分實驗器材。將含有相同濃度的抗生素Ⅰ～Ⅳ四個大小相同的紙片分別貼在長滿測試菌的平板上，實驗結果如圖2。下列相關敘述正確的是（　　）
A.為獲得長滿測試菌的平板，需要使用圖1中器材①②③
B.圖2中Ⅱ形成的抑菌圈較小，可能是病原微生物對藥物較敏感
C.圖2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素Ⅳ作用下產生了突變株
D.不同抗生素在平板上的擴散速度不同會影響實驗結果
8.（2025·山東日照模擬）三糖鐵培養基（TSI）含有牛肉膏、蛋白胨、糖類（乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10∶10∶1）、酚紅（在酸性條件下呈黃色、堿性條件下呈紅色）等成分。TSI瓊脂試驗法通過觀察腸桿菌科細菌對三種糖的分解產生酸（少量的酸能被空氣緩慢氧化）量的多少來鑒別其種類。操作過程是：用接種針挑取待測菌落后，刺入斜面TSI內，后緩慢抽出接種針，在斜面上進行“之”字劃線。下列分析錯誤的是（　　）
A.牛肉膏可為細菌提供氮源和維生素等
B.穿刺和劃線的過程需嚴格控制雜菌污染
C.若培養基中底層與斜面均呈黃色，推測細菌只能分解乳糖
D.若底層呈黃色、斜面先呈黃色后變紅，推測細菌可能只分解葡萄糖
二、非選擇題
9.（2025·江蘇鎮江聯考）我國衛生部門規定飲用水標準是1 mL自來水中細菌總數不超過100個（37 ℃培養24 h），1 000 mL自來水中大腸桿菌菌落數不能超過3個（37 ℃培養48 h）。水中大腸桿菌的含量常采用伊紅—亞甲藍瓊脂培養基進行檢測，生長在此培養基上的大腸桿菌菌落呈深紫色且帶有金屬光澤。某校生物興趣小組開展校園桶裝純凈水微生物含量檢測活動，請回答問題：
（1）檢測飲用水中的細菌，需要配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，牛肉膏和蛋白胨可以為細菌生長提供　　　　　　　　　　　　　　（至少寫出兩點）等營養物質。從物理狀態角度分析，此培養基屬于　　　　培養基。
（2）某同學分別向3個培養基中各加入1 mL，未經稀釋的待測水樣，涂布均勻后置于37 ℃的恒溫培養箱中培養24 h，結果如圖1所示。檢測時使用的接種量為1 mL而不是0.1 mL，其理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（3）下圖2為用濾膜法測定飲用水中大腸桿菌數目的流程示意圖，請完成下表。
實驗步驟的目的 簡要操作過程
①　　 　　　 將濾膜放入裝有蒸餾水的燒杯中，加熱煮沸15 min，共煮沸三次
過濾細菌 裝置安裝好后，向漏斗內加入1 000 mL水樣，加蓋抽濾
沖洗漏斗壁 再向漏斗內加等量②　　　　繼續抽濾
③　　　　 　 用無菌鑷子取濾膜，將其緊貼在伊紅—亞甲藍瓊脂平板上，然后將平板④　　　　，37 ℃培養48小時
統計大腸桿菌菌落數 選取⑤　　　　　　　　　　　　　　的菌落進行計數，統計結果為2個
（4）綜合（2）（3）測定結果，你認為所測桶裝純凈水的微生物含量　　　　（填“能”或“不能”）達到飲用水衛生標準，理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 （寫出兩點）。
第54講　微生物的培養技術及應用
1.C　接種環、接種針等用具應在酒精燈火焰的外焰部位灼燒滅菌，C錯誤。
2.D　平板劃線法通過連續劃線操作可得到單菌落，稀釋涂布平板法在稀釋倍數足夠高的情況下，可通過將稀釋液涂布在培養基上獲得單菌落，即平板劃線法和稀釋涂布平板法都能在固體培養基上得到單菌落，C正確；涂布平板時不能完全打開培養皿，將皿蓋置于實驗操作臺上，應在火焰附近將培養皿打開一條縫隙，D錯誤。
3.A　凍牛糞中富含纖維素，有很多微生物，凍牛糞因溫度低，其內的微生物是耐低溫微生物，故選用凍牛糞為材料篩選耐低溫的纖維素降解菌，A正確；初篩菌種前，要利用液體培養基在37 ℃條件下擴大培養目標菌種，B錯誤；用于篩選的培養基是以纖維素為唯一碳源的固體培養基，加入的剛果紅染料起鑒別作用，C錯誤；由于剛果紅染料與纖維素形成紅色復合物，因此會出現以纖維素降解菌為中心的透明圈，菌落直徑與周圍透明圈直徑比值越小，菌株分解纖維素的能力越強，故應選擇菌落直徑與周圍透明圈直徑比值小的菌落進行純化，D錯誤。
4.D　該培養基的唯一碳源為果膠，能夠生長的細菌是能分解果膠的細菌，因此該培養基可用于分離產果膠酶的微生物，A正確；該平板培養基為固體培養基，瓊脂為凝固劑，因此培養基配方中的X應為瓊脂，B正確；KH2PO4、Na2HPO4在提供無機鹽的同時還能維持培養基pH穩定，C正確；能產生果膠酶的微生物不止一種，通常情況下，用此培養基篩選出來的微生物種類不一定相同，D錯誤。
5.A　淀粉與碘液反應呈現藍色，能分解淀粉的嗜熱菌在培養基上生長時可釋放淀粉酶，分解培養基中的淀粉，故周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種，A正確；倒平板時培養皿和培養基都已滅菌處理，因此倒平板后不需要對培養皿再進行高壓蒸汽滅菌，B錯誤；據題圖2可知，培養基上出現周圍顯藍色的菌落和周圍不顯藍色的菌落，因此淀粉可能不是題圖2所示固體培養基的唯一碳源，C錯誤；題圖1中①過程是梯度稀釋，②過程是接種，因此甲、乙試管主要是對嗜熱菌樣品進行稀釋，不具備選擇作用，不屬于選擇培養基，D錯誤。
6.C　步驟②需充分振蕩的主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中，A錯誤；由題圖觀察可知，步驟④平板中的菌落分布均勻，故步驟④所用的接種工具是涂布器，接種方法是稀釋涂布平板法，B錯誤；1 g土壤中平均自生固氮菌數約為（90＋95＋100）/3÷0.1×104＝9.5×106（個），C正確；本實驗需要分離的自生固氮菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源，故所用培養基中不能加入氮源，D錯誤。
7.D　為獲得長滿測試菌的瓊脂平板，需要采用稀釋涂布平板法，該方法需要使用圖1中①酒精燈（操作需要在酒精燈火焰旁進行，酒精燈對涂布器進行灼燒滅菌）、③培養基和④涂布器，②為接種環（接種工具），是平板劃線法接種時需要使用的接種工具，用平板劃線法不能獲得長滿測試菌的平板，A錯誤；圖2中Ⅱ處透明圈最小，說明此處微生物對該藥物敏感度最低，B錯誤；突變株的出現不是在抗生素的作用下產生的，抗生素只能起選擇作用，C錯誤。
8.C　牛肉膏可為細菌提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等，A正確；本實驗通過TSI瓊脂試驗法，觀察腸桿菌科細菌對三種糖的分解產生酸（少量的酸能被空氣緩慢氧化）量的多少來鑒別其種類，故穿刺和劃線的過程需嚴格控制雜菌污染，B正確；由于酚紅在酸性條件下呈黃色、堿性條件下呈紅色，若培養基的中底層與斜面均呈黃色，說明細菌產酸的量多，推測細菌也可能分解乳糖、蔗糖和葡萄糖，或分解含量較多的乳糖和蔗糖（或其中之一），C錯誤；若細菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，因培養基中葡萄糖的含量較少，其產酸的量也較少，斜面上所生成的少量酸被空氣緩慢氧化，使斜面由黃色變成紅色；底層由于處于缺氧狀態，細菌分解葡萄糖所產生的酸一時不能被空氣氧化而仍保持黃色。故若底層呈黃色、斜面先呈黃色后變紅，推測細菌可能只分解葡萄糖，D正確。
9.（1）碳源、氮源、磷酸鹽、維生素　固體　（2）0.1 mL水樣中細菌數目較少，經培養后平板菌落數可能達不到30個　（3）①濾膜消毒　②無菌水　③培養大腸桿菌　④倒置　⑤呈深紫色且帶有金屬光澤　　（4）能　1 mL水樣中細菌總數約為98個，沒有超過100個；1 000 mL水樣中大腸桿菌為2個，沒有超過3個
解析：（1）該實驗中用到的培養基中加入了牛肉膏、蛋白胨，其中蛋白胨來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等營養物質，故蛋白胨可以為微生物的生長提供碳源、氮源和維生素等營養物質；該培養基含有瓊脂，故屬于固體培養基。（2）微生物計數時，應統計30～300之間的菌落，由于0.1 mL水樣中細菌數目較少，經培養后平板菌落數可能達不到30個，故檢測時使用的接種量為1 mL而不是0.1 mL。（3）①“濾膜法”測定飲用水中大腸桿菌的數量時首先應進行濾膜消毒，以保持實驗過程中的無菌環境，主要是通過加熱煮沸的方法進行；②沖洗漏斗壁時向漏斗內加等量無菌水繼續抽濾；③培養大腸桿菌時可加入伊紅—亞甲藍作為指示劑，兩者反應呈深紫色且帶有金屬光澤；④培養基培養時應將其倒置；⑤選取呈深紫色且帶有金屬光澤的菌落進行計數。（4）分析題意可知，我國衛生部門規定飲用水標準是1 mL自來水中細菌總數不超過100個（37 ℃培養24 h），1 000 mL自來水中大腸桿菌菌落數不能超過3個（37 ℃培養48 h），故該同學認為所測桶裝純凈水的微生物含量已達到了飲用水衛生標準，是因為：1 mL 水樣中細菌總數約為（96＋106＋92）÷3＝98個，沒有超過100個；1 000 mL水樣中大腸桿菌菌落數為2個，沒有超過3個。
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課程標準
1.闡明在發酵工程中防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養物的前提。
2.闡明無菌技術是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區域不被微生物污染的技術。
3.舉例說明通過調整培養基的配方可有目的地培養某種微生物。
4.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實驗室中進行微生物分離和純化的常用方法。
5.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數法是測定微生物數量的常用方法。
考點一　微生物的基本培養技術
1.培養基的配制
（1）培養基的概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養基質。
（2）種類及用途
（3）營養組成
①一般都含有　　　、　　　　、　　　　和無機鹽等營養物質。
②需要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及O2的需求。
微生物 對培養基的需求
乳酸菌 添加　　　
霉菌 將培養基調至　　　性
細菌 將培養基調至　　　　　　　性
厭氧微生物 提供　　　　的條件
提醒 ①牛肉膏、蛋白胨提供的主要營養物質有氮源、碳源、維生素等，牛肉膏還可以提供磷酸鹽。
②可通過培養基中碳源、氮源類型判斷培養對象類型。如培養基中無有機碳源，則培養物為自養生物；若培養基中無有機氮源，則培養物一般為固氮微生物。
2.無菌技術
（1）目的：獲得純凈的微生物培養物。
（2）關鍵：防止　　　　　　。
（3）常用方法
【教材拾遺】 （選擇性必修3 P10相關信息）生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環境中部分微生物的方法。
3.微生物的純培養
（1）概念辨析
（2）酵母菌的純培養操作步驟
提醒 ①平板倒置后，既可避免培養基表面的水分過快地揮發，又可防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。
②倒平板整個操作過程要在酒精燈火焰旁進行，避免雜菌污染。
（3）平板劃線法操作步驟
提醒 培養基中微生物數量過多或成片可能的原因
①菌液濃度過高。
②培養過程中被雜菌污染。
③利用接種環劃線時，每次劃線前未灼燒接種環滅菌。
1.（選擇性必修3 P9正文）微生物在瓊脂固體培養基表面或內部生長，可以形成肉眼可見的菌落。（　　）
2.（選擇性必修3 P10正文）在培養霉菌時，一般需要將培養基調至中性或弱堿性。（　　）
3.（選擇性必修3 P10正文）為了防止污染，接種環經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落。（　　）
4.（選擇性必修3 P10正文）對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和滅菌。（　　）
5.（選擇性必修3 P12～13探究·實踐）倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養基濺到皿蓋上。（　　）
6.（選擇性必修3 P12～13探究·實踐）培養酵母菌時，可將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入適宜溫度的恒溫培養箱中培養24～48 h。（　　）
1.（2025·河北高三聯考）下表為某培養基的配方，下列敘述正確的是（　　）
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4
含量 10 g 10 g 2 g
成分 伊紅 亞甲基藍 蒸餾水
含量 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A.從物理性質看該培養基屬于固體培養基，從用途看該培養基屬于鑒別培養基
B.該培養基中屬于碳源的物質主要是葡萄糖，屬于氮源的物質是蛋白胨
C.該培養基缺少提供無機鹽的物質
D.該培養基調節合適的pH后就可以接種使用
2.（2025·遼寧沈陽高三期末）在做微生物實驗時，為了防止雜菌污染，需要做好消毒和滅菌工作。下表中有關消毒和滅菌方法的使用，錯誤的是（　　）
選項 材料或器具 方法
A 水源 氯氣消毒
B 培養皿 干熱滅菌
C 牛奶 高壓蒸汽滅菌
D 涂布器 灼燒滅菌
3.（2025·河北邢臺高三月考）如圖表示培養和純化X細菌的部分操作步驟，下列相關敘述錯誤的是（　　）
A.對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒處理
B.步驟①倒平板操作過程中，用拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，防止周圍環境中雜菌的污染
C.步驟③應多個方向劃線，使接種物逐漸稀釋，培養后出現單個菌落
D.步驟③劃線結束后在培養皿皿蓋上做好標注，培養皿需要倒置培養
題后歸納
平板劃線操作的注意事項
（1）灼燒接種環，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。
（2）第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使微生物的數目隨著劃線次數的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。
（3）劃線時最后一次劃線不要與第一次劃線相連。
（4）劃線時力度大小要適當，避免用力過大將培養基劃破。
（5）操作第一步即取菌種之前以及每次劃線之前都需要將接種環進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結束時，仍需灼燒接種環，每次灼燒的目的不同：
4.（2025·安徽安慶高三聯考）在生產、生活和科研實踐中，經常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。下列相關敘述，錯誤的是（　　）
A.玻璃和金屬材質等實驗器具可放入干熱滅菌箱中干熱滅菌
B.接種環在接種前后，均需在酒精燈的火焰上進行灼燒消毒
C.沒有將高壓蒸汽滅菌鍋內的冷空氣排盡將影響培養基的滅菌效果
D.適量噴灑苯酚同時配合紫外線照射可提高對接種室的消毒效果
考點二　微生物的選擇培養和計數
1.微生物的選擇培養
（1）選擇培養基
（2）稀釋涂布平板法
（3）培養觀察
待涂布的菌液被培養基　　　　后，將平板倒置，放入30～37 ℃的恒溫培養箱中培養1～2 d。在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的　　　　。
2.微生物的數量測定
提醒 ①每隔一定的時間（如24 h）統計一次菌落數目，選取菌落數目穩定時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養時間不足而導致遺漏菌落數目。
②當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。稀釋涂布平板法統計的菌落數目比活菌實際數目少。
3.活動：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數
（1）實驗原理
（2）操作步驟
（3）實驗結果分析與評價
1.（選擇性必修3 P16正文）選擇培養基可以鑒定某種微生物的種類。（　　）
2.（選擇性必修3 P18正文）菌液的稀釋度足夠高時，培養基表面會獲得單菌落。（　　）
3.（選擇性必修3 P20概念檢測2）稀釋涂布平板法計數時，平板上的一個菌落就是一個細菌。（　　）
4.（選擇性必修3 P18正文）利用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，統計的菌落數就是活菌的實際數。（　　）
5.（選擇性必修3 P18相關信息）利用顯微鏡直接計數法統計的細菌數量就是活菌的數量。（　　）
6.（選擇性必修3 P20拓展應用2）纖維素分解菌在剛果紅培養基上形成的透明圈越大，說明該類纖維素分解菌分解纖維素的能力越強。（　　）
1.（2023·廣東高考10題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標菌的條件組合是（　　）
A.a點時取樣、尿素氮源培養基 B.b點時取樣、角蛋白氮源培養基
C.b點時取樣、蛋白胨氮源培養基 D.c點時取樣、角蛋白氮源培養基
2.（2025·福建福州高三質檢）某研究小組用馬鈴薯瓊脂培養基對新釀米酒中的酵母菌進行初步分離，結果如圖所示，下列敘述正確的是（　　）
A.圖a中下一次劃線總是從上一次劃線的首端開始
B.配制馬鈴薯瓊脂培養基時，其pH需要調節到中性
C.浸泡在酒精中消毒的涂布器使用前需要在火焰上灼燒
D.圖a、圖b的方法都可以實現對酵母菌的分離和計數
題后歸納
兩種純化方法的比較
項目 平板劃線法 稀釋涂布平板法
分離結果
關鍵操作 接種環在固體培養基表面連續劃線 ①一系列的梯度稀釋；②涂布平板操作
接種用具 接種環 涂布器
優點 可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離 可以計數，可以觀察菌落特征
缺點 不能計數 操作復雜，需要涂布多個平板
共同點 都要用到固體培養基；都需進行無菌操作；都會在培養基表面形成單個的菌落；都可用于觀察菌落特征
3.（2025·河北唐山高三一模）為了從土壤中篩選對抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，研究人員利用土壤浸出液進行了下圖所示操作。下列說法錯誤的是（　　）
A.用稀釋涂布平板法或平板劃線法將土壤浸出液接種在X培養基上
B.菌落①可能是硝化細菌，因不能產生淀粉酶所以無透明圈
C.X培養基是含有淀粉和抗生素的固體培養基，Y培養基是不含瓊脂的液體培養基
D.圖中降解淀粉最高效的是菌落⑤，可根據菌落特征初步判斷微生物類型
1.（2024·海南高考12題）某小組為檢測1株粗糙脈孢霉突變株的氨基酸缺陷類型，在相同培養溫度和時間的條件下進行實驗，結果見表。下列有關敘述錯誤的是（　　）
組別 培養條件 實驗結果
① 基礎培養基 無法生長
② 基礎培養基＋甲、乙、丙3種氨基酸 正常生長
③ 基礎培養基＋甲、乙2種氨基酸 無法生長
④ 基礎培養基＋甲、丙2種氨基酸 正常生長
⑤ 基礎培養基＋乙、丙2種氨基酸 正常生長
A.組別①是②③④⑤的對照組
B.培養溫度和時間屬于無關變量
C.①②結果表明，甲、乙、丙3種氨基酸中有該突變株正常生長所必需的氨基酸
D.①～⑤結果表明，該突變株為氨基酸甲缺陷型
2.（2024·黑吉遼高考19題改編）某些香蕉植株組織中存在的內生菌可防治香蕉枯萎病，其篩選流程及抗性檢測如圖。下列操作錯誤的是（　　）
A.在大量感染香蕉枯萎病的香蕉種植園內，從未感染植株上采集樣品
B.將采集的樣品充分消毒后，用蒸餾水沖洗，收集沖洗液進行無菌檢測
C.將無菌檢測合格的樣品研磨，經稀釋涂布平板法分離得到內生菌的單菌落
D.判斷內生菌的抗性效果需比較有無接種內生菌的平板上的病原菌菌斑大小
3.（2024·湖南高考6題）微生物平板劃線和培養的具體操作如圖所示，下列操作正確的是（　　）
A.①②⑤⑥　　　　　　　 B.③④⑥⑦
C.①②⑦⑧ D.①③④⑤
4.（2023·山東高考15題）平板接種常用在微生物培養中。下列說法正確的是（　　）
A.不含氮源的平板不能用于微生物培養
B.平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒
C.接種后未長出菌落的培養基可以直接丟棄
D.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物
溯源教材
（1）培養基的配方不同，一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽等營養物質。（見選擇性必修3 P10正文）
（2）將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布。（見選擇性必修3 P17圖1－7）
（3）使用后的培養基在丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環境。（見選擇性必修3 P13正文）
（4）只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作為唯一氮源的選擇培養基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌。（見選擇性必修3 P18探究·實踐）
5.（2023·遼寧高考9題）細菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細菌形成的。利用空氣微生物采樣器對某市人員密集型公共場所采樣并檢測細菌氣溶膠的濃度（菌落數/m3）。下列敘述錯誤的是（　　）
A.采樣前需對空氣微生物采樣器進行無菌處理
B.細菌氣溶膠樣品恒溫培養時需將平板倒置
C.同一稀釋度下至少對3個平板計數并取平均值
D.稀釋涂布平板法檢測的細菌氣溶膠濃度比實際值高
6.（2024·全國甲卷37題，節選）合理使用消毒液有助于減少傳染病的傳播。某同學比較了3款消毒液A、B、C殺滅細菌的效果，結果如圖所示。回答下列問題。
（1）該同學采用顯微鏡直接計數法和菌落計數法分別測定同一樣品的細菌數量，發現測得的細菌數量前者大于后者，其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（2）該同學從100 mL細菌原液中取1 mL加入無菌水中得到10 mL稀釋菌液，再從稀釋菌液中取200 μL涂布平板，菌落計數的結果為100，據此推算細菌原液中細菌濃度為　　　　個/mL。
（3）菌落計數過程中，涂布器應先在酒精燈上灼燒，冷卻后再涂布。灼燒的目的是　　　　　　　　　　　　　　，冷卻的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　。
（4）據圖可知殺菌效果最好的消毒液是　　　　，判斷依據是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（答出2點即可）。
　（1）從試管取菌種前，先在火焰旁拔棉塞，再將試管口迅速通過火焰以滅菌。 （2024·江蘇高考）（　　）
（2）血細胞計數板既可用于酵母菌的數量測定，也可用于細菌的數量測定。 （2023·江蘇高考）（　　）
（3）某同學欲分離產脲酶菌，可在選擇培養基中添加尿素作為唯一氮源。 （2022·江蘇高考）（　　）
（4）為防止蛋白質變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養基進行滅菌。 （2022·湖北高考）（　　）
（5）稀釋涂布平板法既可分離菌株，又可用于計數。 （2024·貴州高考）（　　）
第54講　微生物的培養技術及應用
【破考點·抓必備】
考點一
知識梳理夯基
1.（2） 液體　 天然　 合成　 選擇　 鑒別　 抑制或阻止　（3）①水　碳源　氮源　②維生素　酸　中性或弱堿　無氧
2.（2）雜菌污染　（3）巴氏消毒　灼燒滅菌　濕熱滅菌
3.（1）單一個體　固體培養基　（2） 濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）法　 干熱滅菌法　 酒精燈火焰　 灼燒滅菌　 平板劃線法　 恒溫培養箱
概念檢測
1.√　2.×
3.×　提示：接種環灼燒滅菌后，應冷卻后再挑取菌落，以免高溫殺死菌種。
4.×　提示：對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。
5.×　提示：倒平板時，用拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將錐形瓶中的培養基（10～20 mL）倒入培養皿，立即蓋上培養皿的皿蓋，不能完全打開皿蓋。
6.√
典題演練應用
1.B　該培養基成分中不含瓊脂，不是固體培養基，A錯誤；培養基成分中的K2HPO4為其提供無機鹽，C錯誤；培養基調節合適的pH后需要滅菌后才能接種使用，D錯誤。
2.C　可用氯氣對水源進行消毒，A正確；培養皿可在干熱滅菌箱中160～170 ℃滅菌1～2 h，B正確；培養基的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，牛奶一般用巴氏消毒法進行消毒，C錯誤；涂布器需采用灼燒滅菌的方法，冷卻后才能進行涂布操作，D正確。
3.D　步驟①倒平板操作過程中，用左手的拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養基倒入培養皿，左手立即蓋上培養皿的皿蓋，防止周圍環境中雜菌的污染，B正確；步驟③應多個方向劃線，劃三至五條平行線，注意不要將最后一區的劃線與第一區相連，使接種物逐漸稀釋，培養后出現單個菌落，C正確；步驟③劃線結束后應在皿底上做好標注，D錯誤。
4.B　在實驗室中，玻璃和金屬材質的實驗器具可以放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌，一些金屬材質的實驗器具也可以灼燒滅菌，A正確；為了防止雜菌污染和感染操作者，每次接種前后，接種環都要進行灼燒滅菌（不是消毒），B錯誤；若未將高壓蒸汽滅菌鍋內的冷空氣排盡，會因達不到規定溫度而影響滅菌的效果，C正確；紫外線能破壞DNA結構，密閉空間常采用紫外線照射消毒，適量噴灑苯酚同時配合紫外線照射可提高對接種室的消毒效果，D正確。
考點二
知識梳理夯基
1.（1） 尿素　 氮源　 細菌　 高溫　（2）②酒精　冷卻　（3）吸收　單菌落
2.（1） 30～300　 平均值　 少　 菌落　（2） 血細胞計數板　 血細胞計數板　 顯微鏡　 活菌　 死菌
3.（1）脲酶　尿素　（2）稀釋涂布平板　菌落數目穩定
概念檢測
1.×　2.√　3.×
4.×　提示：當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落，故稀釋涂布平板法統計的菌落數往往比活菌的實際數目少。
5.×　提示：顯微鏡直接計數法不能區分細菌的死活，因此統計的結果一般是活菌數和死菌數的總和。
6.√
典題演練應用
1.D　由圖可知，隨著堆肥時間的延長，堆肥溫度先升高后保持穩定，a點時堆肥溫度最低，c點時堆肥溫度最高。該實驗的目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，應該用以角蛋白為唯一氮源的培養基進行篩選培養，且應該在高溫條件下取樣，即c點時取樣，D符合題意。
2.C　圖a的接種方法為平板劃線法，下一次劃線總是從上一次劃線的末端開始，起到逐級稀釋菌種的目的，A錯誤；配制馬鈴薯瓊脂培養基用于培養酵母菌時，其pH需要調節到酸性，B錯誤；涂布器需要酒精浸泡再放在酒精燈火焰上灼燒滅菌，以防止雜菌污染，C正確；圖a（平板劃線法）、圖b（稀釋涂布平板法）的方法都可以實現對酵母菌的分離，但圖a平板劃線法不能用于計數，D錯誤。
3.A　根據X培養基上形成的菌落分布特征可知，將含目的菌的土壤浸出液接種在X培養基上采用的是稀釋涂布平板法，A錯誤；菌落①周圍無透明圈，說明其不能降解淀粉，可能是硝化細菌，因不能產生淀粉酶所以無透明圈，B正確；實驗目的是篩選對抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，可知X培養基上含有淀粉和抗生素，Y培養基用于將篩選到的目的菌擴大培養，為不含瓊脂的液體培養基，C正確；碘液遇淀粉會變藍，淀粉被分解，形成透明圈，題圖中菌落⑤的透明圈最大，說明菌落⑤降解淀粉的能力最強，不同菌落的特征不同，因此可根據菌落特征初步判斷微生物類型，D正確。
【研真題·扣教材】
1.D　由表可知，除了組別①之外，其他組別的基礎培養基中都添加了氨基酸，因此組別①是②③④⑤的對照組，A正確；由題意表中信息可知，實驗的自變量為培養條件，各組別的培養溫度和時間均相同，說明培養溫度和時間均屬于無關變量，B正確；由①②結果可知：粗糙脈孢霉突變株在基礎培養基中無法生長，但在添加了甲、乙、丙3種氨基酸的基礎培養基中能正常生長，這表明甲、乙、丙3種氨基酸中有該突變株正常生長所必需的氨基酸，C正確；與組別①相比，在基礎培養基中，若添加的氨基酸中含有丙種氨基酸，則粗糙脈孢霉突變株都能正常生長，但在只添加甲、乙2種氨基酸的基礎培養基中無法生長，說明該突變株為氨基酸丙缺陷型，D錯誤。
2.B　根據題干信息“某些香蕉植株組織中存在的內生菌可防治香蕉枯萎病”可知，若要篩選出該內生菌，應該從未感染香蕉枯萎病的植株上采樣，A正確。要篩選內生菌，同時防止樣品表面雜菌對實驗結果的影響，需要對樣品進行消毒，用無菌水沖洗樣品表面，收集沖洗液，對沖洗液進行無菌檢測，B錯誤。稀釋涂布平板法可用于分離微生物，將無菌檢測合格的樣品研磨，經稀釋涂布平板法分離能獲得內生菌的單菌落，C正確。要想判斷內生菌對病原菌的抗性效果，需要比較有無接種內生菌的平板上的病原菌菌斑大小，D正確。
3.D　由圖可知，②中拔出棉塞后應握住棉塞上部；⑥中劃線時不能將培養皿的皿蓋完全拿開，應只打開一條縫隙；⑦中劃線時第5次的劃線不能與第1次的劃線相連；⑧中平板應倒置培養。①③④⑤正確，故選D。
4.D　不含氮源的平板可用于固氮菌的培養，A錯誤；平板涂布時涂布器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，不屬于消毒，B錯誤；使用后的培養基即使未長出菌落也要在丟棄前進行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環境，C錯誤；脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進行生長繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無法生長，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。
5.D　為防止雜菌感染，接種前需要對培養基、培養皿、微生物采樣器進行滅菌處理，對實驗操作者的雙手進行消毒處理，A正確；純化培養時，為防止污染培養基和水分蒸發，培養皿應倒置放在恒溫培養箱內培養，B正確；微生物計數時在同一稀釋度下，應至少需要對3個菌落數目在30～300的平板進行計數，以確保實驗的準確性，C正確；使用稀釋涂布平板法對微生物計數，數值往往偏小，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上只能觀察到一個菌落，D錯誤。
6.（1）用菌落計數法計數時，只有活菌被統計，且兩個或多個細胞可能連在一起形成一個菌落；用顯微鏡直接計數法計數時，不能區分死菌和活菌，統計的結果一般是活菌數和死菌數的總和　（2）5×103　（3）滅菌，以防止雜菌污染　避免殺死菌種　（4）A　活細菌減少量最大且減少得最快
解析：（1）用菌落計數法計數時，當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故活菌統計值比實際值小；用顯微鏡直接計數法計數時，不能區分死菌和活菌，故測定的細菌數量往往大于實際的活菌數，因此使用顯微鏡直接計數法計數的結果比菌落計數法計數的結果大。（2）100個菌落代表100個活菌，其來自200 μL（0.2 mL）稀釋液，推出1 mL稀釋液中大約有500個活菌，稀釋液由細菌原液稀釋10倍獲得，進而推出細菌原液中細菌濃度為5×103個/mL。（3）將涂布器放在火焰上灼燒的目的是滅菌，以防止雜菌污染；涂布器冷卻后再進行涂布的目的是避免高溫殺死菌種。（4）由曲線圖可以直接看出，用消毒液A處理后活細菌減少量最大且活細菌減少得最快，說明消毒液A殺菌效果最好。
真題重組練
　（1）√
（2）×　提示：血細胞計數板不適用于微小的細菌計數。
（3）√
（4）×　提示：高溫變性的蛋白質仍可作為微生物的氮源，可以用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養基進行滅菌。
（5）√
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第54講　
微生物的培養技術及應用
高中總復習·生物
課程標準
1. 闡明在發酵工程中防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養物的前提。
2. 闡明無菌技術是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區域不被微生物污
染的技術。
3. 舉例說明通過調整培養基的配方可有目的地培養某種微生物。
4. 概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實驗室中進行微生物分離和純化的
常用方法。
5. 概述稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數法是測定微生物數量的常用
方法。
1. 破考點·抓必備
2. 研真題·扣教材
3. 驗收效·提能力
目錄
Contents
01
破考點·抓必備
梳理歸納， 鞏固基本知識
考點一　微生物的基本培養技術
1. 培養基的配制
（1）培養基的概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出的
供其生長繁殖的營養基質。
（2）種類及用途
（3）營養組成
①一般都含有 、 、 和無機鹽等營養物質。
②需要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及O2的需求。
水　
碳源　
氮源　
微生物 對培養基的需求
乳酸菌 添加
霉菌 將培養基調至 性
　細菌 將培養基調至 性
厭氧微生物 提供 的條件
維生素　
酸　
中性或弱堿　
無氧　
提醒 ①牛肉膏、蛋白胨提供的主要營養物質有氮源、碳源、維生素等，牛
肉膏還可以提供磷酸鹽。
②可通過培養基中碳源、氮源類型判斷培養對象類型。如培養基中無有機
碳源，則培養物為自養生物；若培養基中無有機氮源，則培養物一般為固
氮微生物。
2. 無菌技術
（1）目的：獲得純凈的微生物培養物。
（2）關鍵：防止 。
雜菌污染　
（3）常用方法
【教材拾遺】 （選擇性必修3 P10相關信息）生物消毒法是指利用生物或
其代謝物除去環境中部分微生物的方法。
3. 微生物的純培養
（1）概念辨析
（2）酵母菌的純培養操作步驟
提醒 ①平板倒置后，既可避免培養基表面的水分過快地揮發，又可防止皿
蓋上的水珠落入培養基，造成污染。
②倒平板整個操作過程要在酒精燈火焰旁進行，避免雜菌污染。
（3）平板劃線法操作步驟
提醒 培養基中微生物數量過多或成片可能的原因
①菌液濃度過高。
②培養過程中被雜菌污染。
③利用接種環劃線時，每次劃線前未灼燒接種環滅菌。
1. （選擇性必修3 P9正文）微生物在瓊脂固體培養基表面或內部生長，可
以形成肉眼可見的菌落。 （　√　）
2. （選擇性必修3 P10正文）在培養霉菌時，一般需要將培養基調至中性
或弱堿性。 （　×　）
3. （選擇性必修3 P10正文）為了防止污染，接種環經火焰滅菌后應趁熱
快速挑取菌落。 （　×　）
提示：接種環灼燒滅菌后，應冷卻后再挑取菌落，以免高溫殺死菌種。
√
×
×
4. （選擇性必修3 P10正文）對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進
行清潔和滅菌。 （　×　）
提示：對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。
5. （選擇性必修3 P12～13探究·實踐）倒平板時，應將打開的皿蓋放到一
邊，以免培養基濺到皿蓋上。 （　×　）
提示：倒平板時，用拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將
錐形瓶中的培養基（10～20 mL）倒入培養皿，立即蓋上培養皿的皿蓋，
不能完全打開皿蓋。
6. （選擇性必修3 P12～13探究·實踐）培養酵母菌時，可將接種后的平板
和一個未接種的平板倒置，放入適宜溫度的恒溫培養箱中培養24～48 h。
（　√　）
×
×
√
1. （2025·河北高三聯考）下表為某培養基的配方，下列敘述正確的是（　　）
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4
含量 10 g 10 g 2 g
成分 伊紅 亞甲基藍 蒸餾水
含量 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A. 從物理性質看該培養基屬于固體培養基，從用途看該培養基屬于鑒別培養基
B. 該培養基中屬于碳源的物質主要是葡萄糖，屬于氮源的物質是蛋白胨
C. 該培養基缺少提供無機鹽的物質
D. 該培養基調節合適的pH后就可以接種使用
√
解析：　該培養基成分中不含瓊脂，不是固體培養基，A錯誤；培養基成
分中的K2HPO4為其提供無機鹽，C錯誤；培養基調節合適的pH后需要滅菌
后才能接種使用，D錯誤。
2. （2025·遼寧沈陽高三期末）在做微生物實驗時，為了防止雜菌污染，需要做好消毒和滅菌工作。下表中有關消毒和滅菌方法的使用，錯誤的是（　　）
選項 材料或器具 方法
A 水源 氯氣消毒
B 培養皿 干熱滅菌
C 牛奶 高壓蒸汽滅菌
D 涂布器 灼燒滅菌
√
解析：　可用氯氣對水源進行消毒，A正確；培養皿可在干熱滅菌箱中160～170 ℃滅菌1～2 h，B正確；培養基的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，牛奶一般用巴氏消毒法進行消毒，C錯誤；涂布器需采用灼燒滅菌的方法，冷卻后才能進行涂布操作，D正確。
3. （2025·河北邢臺高三月考）如圖表示培養和純化X細菌的部分操作步
驟，下列相關敘述錯誤的是（　　）
A. 對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒處理
B. 步驟①倒平板操作過程中，用拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口
的縫隙，防止周圍環境中雜菌的污染
C. 步驟③應多個方向劃線，使接種物逐漸稀釋，培養后出現單個菌落
D. 步驟③劃線結束后在培養皿皿蓋上做好標注，培養皿需要倒置培養
√
解析：　步驟①倒平板操作過程中，用左手的拇指和食指將培養皿打開
一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養基倒入培養皿，左手立即
蓋上培養皿的皿蓋，防止周圍環境中雜菌的污染，B正確；步驟③應多個
方向劃線，劃三至五條平行線，注意不要將最后一區的劃線與第一區相
連，使接種物逐漸稀釋，培養后出現單個菌落，C正確；步驟③劃線結束
后應在皿底上做好標注，D錯誤。
題后歸納
平板劃線操作的注意事項
（1）灼燒接種環，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。
（2）第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使微生
物的數目隨著劃線次數的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來
的菌落。
（3）劃線時最后一次劃線不要與第一次劃線相連。
（4）劃線時力度大小要適當，避免用力過大將培養基劃破。
（5）操作第一步即取菌種之前以及每次劃線之前都需要將接種環進行火
焰灼燒滅菌，劃線操作結束時，仍需灼燒接種環，每次灼燒的目的不同：
4. （2025·安徽安慶高三聯考）在生產、生活和科研實踐中，經常通過消
毒和滅菌來避免雜菌的污染。下列相關敘述，錯誤的是（　　）
A. 玻璃和金屬材質等實驗器具可放入干熱滅菌箱中干熱滅菌
B. 接種環在接種前后，均需在酒精燈的火焰上進行灼燒消毒
C. 沒有將高壓蒸汽滅菌鍋內的冷空氣排盡將影響培養基的滅菌效果
D. 適量噴灑苯酚同時配合紫外線照射可提高對接種室的消毒效果
√
解析：　在實驗室中，玻璃和金屬材質的實驗器具可以放入干熱滅菌箱
中進行干熱滅菌，一些金屬材質的實驗器具也可以灼燒滅菌，A正確；為
了防止雜菌污染和感染操作者，每次接種前后，接種環都要進行灼燒滅菌
（不是消毒），B錯誤；若未將高壓蒸汽滅菌鍋內的冷空氣排盡，會因達
不到規定溫度而影響滅菌的效果，C正確；紫外線能破壞DNA結構，密閉
空間常采用紫外線照射消毒，適量噴灑苯酚同時配合紫外線照射可提高對
接種室的消毒效果，D正確。
考點二　微生物的選擇培養和計數
1. 微生物的選擇培養
（1）選擇培養基
（2）稀釋涂布平板法
（3）培養觀察
待涂布的菌液被培養基 后，將平板倒置，放入30～37 ℃的恒溫培
養箱中培養1～2 d。在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離
的 。
吸收　
單菌落　
2. 微生物的數量測定
提醒 ①每隔一定的時間（如24 h）統計一次菌落數目，選取菌落數目穩定
時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養時間不足而導致遺漏菌落數目。
②當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。稀釋涂
布平板法統計的菌落數目比活菌實際數目少。
3. 活動：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數
（1）實驗原理
（2）操作步驟
（3）實驗結果分析與評價
1. （選擇性必修3 P16正文）選擇培養基可以鑒定某種微生物的種類。
（　×　）
2. （選擇性必修3 P18正文）菌液的稀釋度足夠高時，培養基表面會獲得
單菌落。 （　√　）
3. （選擇性必修3 P20概念檢測2）稀釋涂布平板法計數時，平板上的一個
菌落就是一個細菌。 （　×　）
4. （選擇性必修3 P18正文）利用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，統計
的菌落數就是活菌的實際數。 （　×　）
提示：當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落，故稀
釋涂布平板法統計的菌落數往往比活菌的實際數目少。
×
√
×
×
5. （選擇性必修3 P18相關信息）利用顯微鏡直接計數法統計的細菌數量
就是活菌的數量。 （　×　）
提示：顯微鏡直接計數法不能區分細菌的死活，因此統計的結果一般是活
菌數和死菌數的總和。
6. （選擇性必修3 P20拓展應用2）纖維素分解菌在剛果紅培養基上形成的
透明圈越大，說明該類纖維素分解菌分解纖維素的能力越強。
（　√　）
×
√
1. （2023·廣東高考10題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽
毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據堆肥溫度變化曲線（如圖）和
選擇培養基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標菌的條件組合是
（　　）
A. a點時取樣、尿素氮源培養基
B. b點時取樣、角蛋白氮源培養基
C. b點時取樣、蛋白胨氮源培養基
D. c點時取樣、角蛋白氮源培養基
√
解析：　由圖可知，隨著堆肥時間的延長，堆肥溫度先升高后保持穩
定，a點時堆肥溫度最低，c點時堆肥溫度最高。該實驗的目的是篩選能高
效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，應該用以角蛋白為唯一氮
源的培養基進行篩選培養，且應該在高溫條件下取樣，即c點時取樣，D符
合題意。
2. （2025·福建福州高三質檢）某研究小組用馬鈴薯瓊脂培養基對新釀米
酒中的酵母菌進行初步分離，結果如圖所示，下列敘述正確的是（　　）
A. 圖a中下一次劃線總是從上一次劃線的首端開始
B. 配制馬鈴薯瓊脂培養基時，其pH需要調節到中性
C. 浸泡在酒精中消毒的涂布器使用前需要在火焰上灼燒
D. 圖a、圖b的方法都可以實現對酵母菌的分離和計數
√
解析：　圖a的接種方法為平板劃線法，下一次劃線總是從上一次劃線的
末端開始，起到逐級稀釋菌種的目的，A錯誤；配制馬鈴薯瓊脂培養基用
于培養酵母菌時，其pH需要調節到酸性，B錯誤；涂布器需要酒精浸泡再
放在酒精燈火焰上灼燒滅菌，以防止雜菌污染，C正確；圖a（平板劃線
法）、圖b（稀釋涂布平板法）的方法都可以實現對酵母菌的分離，但圖a
平板劃線法不能用于計數，D錯誤。
題后歸納
兩種純化方法的比較
項目 平板劃線法 稀釋涂布平板法
分離結果
關鍵操作 接種環在固體培養基表面連續
劃線 ①一系列的梯度稀釋；②
涂布平板操作
項目 平板劃線法 稀釋涂布平板法
接種用具 接種環 涂布器
優點 可以觀察菌落特征，對混合菌
進行分離 可以計數，可以觀察菌落
特征
缺點 不能計數 操作復雜，需要涂布多個
平板
共同點 都要用到固體培養基；都需進行無菌操作；都會在培養基
表面形成單個的菌落；都可用于觀察菌落特征
3. （2025·河北唐山高三一模）為了從土壤中篩選對抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，研究人員利用土壤浸出液進行了如圖所示操作。下列說法錯誤的是（　　）
A. 用稀釋涂布平板法或平板劃線法將土壤浸出液接種在X培養基上
B. 菌落①可能是硝化細菌，因不能產生淀粉酶所以無透明圈
C. X培養基是含有淀粉和抗生素的固體培養基，Y培養基是不含瓊脂的液體培養基
D. 圖中降解淀粉最高效的是菌落⑤，可根據菌落特征初步判斷微生物類型
√
解析：　根據X培養基上形成的菌落分布特征可知，將含目的菌的土壤浸出液接種在X培養基上采用的是稀釋涂布平板法，A錯誤；菌落①周圍無透明圈，說明其不能降解淀粉，可能是硝化細菌，因不能產生淀粉酶所以無透明圈，B正確；實驗目的是篩選對抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，可知X培養基上含有淀粉和抗生素，Y培養基用于將篩選到的目的菌擴大培養，為不含瓊脂的液體培養基，C正確；碘液遇淀粉會變藍，淀粉被分解，形成透明圈，題圖中菌落⑤的透明圈最大，說明菌落⑤降解淀粉的能力最強，不同菌落的特征不同，因此可根據菌落特征初步判斷微生物類型，D正確。
02
研真題·扣教材
探究分析， 培養核心技能
1. （2024·海南高考12題）某小組為檢測1株粗糙脈孢霉突變株的氨基酸缺陷類型，在相同培養溫度和時間的條件下進行實驗，結果見表。下列有關敘述錯誤的是（）
組別 培養條件 實驗結果
① 基礎培養基 無法生長
② 基礎培養基＋甲、乙、丙3種氨基酸 正常生長
③ 基礎培養基＋甲、乙2種氨基酸 無法生長
④ 基礎培養基＋甲、丙2種氨基酸 正常生長
⑤ 基礎培養基＋乙、丙2種氨基酸 正常生長
A. 組別①是②③④⑤的對照組
B. 培養溫度和時間屬于無關變量
C. ①②結果表明，甲、乙、丙3種氨基酸中有該突變株正常生長所必需的氨基酸
D. ①～⑤結果表明，該突變株為氨基酸甲缺陷型
√
解析：　由表可知，除了組別①之外，其他組別的基礎培養基中都添加
了氨基酸，因此組別①是②③④⑤的對照組，A正確；由題意表中信息可
知，實驗的自變量為培養條件，各組別的培養溫度和時間均相同，說明培
養溫度和時間均屬于無關變量，B正確；由①②結果可知：粗糙脈孢霉突
變株在基礎培養基中無法生長，但在添加了甲、乙、丙3種氨基酸的基礎
培養基中能正常生長，這表明甲、乙、丙3種氨基酸中有該突變株正常生
長所必需的氨基酸，C正確；與組別①相比，在基礎培養基中，若添加的
氨基酸中含有丙種氨基酸，則粗糙脈孢霉突變株都能正常生長，但在只添
加甲、乙2種氨基酸的基礎培養基中無法生長，說明該突變株為氨基酸丙
缺陷型，D錯誤。
2. （2024·黑吉遼高考19題改編）某些香蕉植株組織中存在的內生菌可防治香蕉枯萎病，其篩選流程及抗性檢測如圖。下列操作錯誤的是（　　）
A. 在大量感染香蕉枯萎病的香蕉種植園內，從未感染植株上采集樣品
B. 將采集的樣品充分消毒后，用蒸餾水沖洗，收集沖洗液進行無菌檢測
C. 將無菌檢測合格的樣品研磨，經稀釋涂布平板法分離得到內生菌的單菌落
D. 判斷內生菌的抗性效果需比較有無接種內生菌的平板上的病原菌菌斑大小
√
解析：　根據題干信息“某些香蕉植株組織中存在的內生菌可防治香蕉枯萎病”可知，若要篩選出該內生菌，應該從未感染香蕉枯萎病的植株上采樣，A正確。要篩選內生菌，同時防止樣品表面雜菌對實驗結果的影響，需要對樣品進行消毒，用無菌水沖洗樣品表面，收集沖洗液，對沖洗液進行無菌檢測，B錯誤。稀釋涂布平板法可用于分離微生物，將無菌檢測合格的樣品研磨，經稀釋涂布平板法分離能獲得內生菌的單菌落，C正確。要想判斷內生菌對病原菌的抗性效果，需要比較有無接種內生菌的平板上的病原菌菌斑大小，D正確。
3. （2024·湖南高考6題）微生物平板劃線和培養的具體操作如圖所示，下
列操作正確的是（　　）
A. ①②⑤⑥ B. ③④⑥⑦
C. ①②⑦⑧ D. ①③④⑤
√
解析：　由圖可知，②中拔出棉塞后應握住棉塞上部；⑥中劃線時不能
將培養皿的皿蓋完全拿開，應只打開一條縫隙；⑦中劃線時第5次的劃線
不能與第1次的劃線相連；⑧中平板應倒置培養。①③④⑤正確，故選D。
4. （2023·山東高考15題）平板接種常用在微生物培養中。下列說法正確
的是（　　）
A. 不含氮源的平板不能用于微生物培養
B. 平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒
C. 接種后未長出菌落的培養基可以直接丟棄
D. 利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物
√
解析：　不含氮源的平板可用于固氮菌的培養，A錯誤；平板涂布時涂布
器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，
不屬于消毒，B錯誤；使用后的培養基即使未長出菌落也要在丟棄前進行
滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環境，C錯誤；脲酶可以催化尿素分
解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲
得氮源而進行生長繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無法生
長，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。
溯源教材
（1）培養基的配方不同，一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽等營養物
質。　（見選擇性必修3 P10正文）
（2）將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂
布。　（見選擇性必修3 P17圖1－7）
（3）使用后的培養基在丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環境。　
（見選擇性必修3 P13正文）
（4）只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作為唯一氮源
的選擇培養基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌。　（見選擇性必修
3 P18探究·實踐）
5. （2023·遼寧高考9題）細菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面
的細菌形成的。利用空氣微生物采樣器對某市人員密集型公共場所采樣并
檢測細菌氣溶膠的濃度（菌落數/m3）。下列敘述錯誤的是（　　）
A. 采樣前需對空氣微生物采樣器進行無菌處理
B. 細菌氣溶膠樣品恒溫培養時需將平板倒置
C. 同一稀釋度下至少對3個平板計數并取平均值
D. 稀釋涂布平板法檢測的細菌氣溶膠濃度比實際值高
√
解析：　為防止雜菌感染，接種前需要對培養基、培養皿、微生物采樣
器進行滅菌處理，對實驗操作者的雙手進行消毒處理，A正確；純化培養
時，為防止污染培養基和水分蒸發，培養皿應倒置放在恒溫培養箱內培
養，B正確；微生物計數時在同一稀釋度下，應至少需要對3個菌落數目在
30～300的平板進行計數，以確保實驗的準確性，C正確；使用稀釋涂布平
板法對微生物計數，數值往往偏小，原因是當兩個或多個細胞連在一起
時，在平板上只能觀察到一個菌落，D錯誤。
6. （2024·全國甲卷37題，節選）合理使用消毒液有
助于減少傳染病的傳播。某同學比較了3款消毒液A、
B、C殺滅細菌的效果，結果如圖所示。
回答下列問題。
（1）該同學采用顯微鏡直接計數法和菌落計數法分別測定同一樣品的細
菌數量，發現測得的細菌數量前者大于后者，其原因是


。
用菌落計數法計
數時，只有活菌被統計，且兩個或多個細胞可能連在一起形成一個菌落；
用顯微鏡直接計數法計數時，不能區分死菌和活菌，統計的結果一般是活
菌數和死菌數的總和
解析：用菌落計數法計數時，當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故活菌統計值比實際值小；用顯微鏡直接計數法計數時，不能區分死菌和活菌，故測定的細菌數量往往大于實際的活菌數，因此使用顯微鏡直接計數法計數的結果比菌落計數法計數的結果大。
（2）該同學從100 mL細菌原液中取1 mL加入無菌水中得到10 mL稀釋菌
液，再從稀釋菌液中取200 μL涂布平板，菌落計數的結果為100，據此推算
細菌原液中細菌濃度為 個/mL。
解析：100個菌落代表100個活菌，其來自200 μL（0.2 mL）稀釋液，推出1 mL稀釋液中大約有500個活菌，稀釋液由細菌原液稀釋10倍獲得，進而推出細菌原液中細菌濃度為5×103個/mL。
5×103
（3）菌落計數過程中，涂布器應先在酒精燈上灼燒，冷卻后再涂布。灼
燒的目的是 ，冷卻的目的是 。
解析：將涂布器放在火焰上灼燒的目的是滅菌，以防止雜菌污染；涂布器冷卻后再進行涂布的目的是避免高溫殺死菌種。
滅菌，以防止雜菌污染
避免殺死菌種
（4）據圖可知殺菌效果最好的消毒液是 ，判斷依據是
（答出2點即可）。
解析： 由曲線圖可以直接看出，用消毒
液A處理后活細菌減少量最大且活細菌減少得
最快，說明消毒液A殺菌效果最好。
A
活細菌減少
量最大且減少得最快
（1）從試管取菌種前，先在火焰旁拔棉塞，再將試管口迅速通過火焰以
滅菌。　（2024·江蘇高考） （　√　）
（2）血細胞計數板既可用于酵母菌的數量測定，也可用于細菌的數量測
定。　（2023·江蘇高考） （　×　）
提示：血細胞計數板不適用于微小的細菌計數。
（3）某同學欲分離產脲酶菌，可在選擇培養基中添加尿素作為唯一氮
源。　（2022·江蘇高考） （　√　）
√
×
√
（4）為防止蛋白質變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養基進行
滅菌。　（2022·湖北高考） （　×　）
提示：高溫變性的蛋白質仍可作為微生物的氮源，可以用濕熱滅菌法對牛
肉膏蛋白胨培養基進行滅菌。
（5）稀釋涂布平板法既可分離菌株，又可用于計數。　（2024·貴州高
考） （　√　）
×
√
03
驗收效·提能力
跟蹤訓練，檢驗學習效果
一、選擇題
1. （2025·重慶聯考）防止雜菌污染，獲得純凈的培養物，是研究和應用
微生物的前提。下列敘述錯誤的是（　　）
A. 實驗室里可用紫外線或化學藥物對物體表面或空氣進行消毒
B. 實驗室里不可吃東西，離開時一定要洗手以防被微生物感染
C. 接種環、接種針等用具應在酒精燈火焰的內焰部位灼燒滅菌
D. 使用后的培養基在丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環境
解析：　接種環、接種針等用具應在酒精燈火焰的外焰部位灼燒滅菌，C
錯誤。
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√
2. （2025·福建南平高三聯考）下列關于微生物純培養的敘述，錯誤的是
（　　）
A. 倒平板操作應等培養基冷卻至50 ℃左右時，在酒精燈火焰附近進行
B. 微生物的純培養包括配制培養基、滅菌、接種、分離和培養等步驟
C. 用平板劃線法和稀釋涂布平板法都能在固體培養基上得到單菌落
D. 涂布平板時應先將培養皿蓋置于實驗操作臺上
√
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解析：　平板劃線法通過連續劃線操作可得到單菌落，稀釋涂布平板法
在稀釋倍數足夠高的情況下，可通過將稀釋液涂布在培養基上獲得單菌
落，即平板劃線法和稀釋涂布平板法都能在固體培養基上得到單菌落，C
正確；涂布平板時不能完全打開培養皿，將皿蓋置于實驗操作臺上，應在
火焰附近將培養皿打開一條縫隙，D錯誤。
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3. （2025·福建寧德五校聯合檢測）為加速我國北方冬春季秸稈原位還田
的腐化過程，研究人員以凍牛糞為材料篩選出耐低溫（10 ℃）的纖維素降
解菌。下列相關敘述正確的是（　　）
A. 選用凍牛糞為材料與其富含纖維素及含耐低溫微生物有關
B. 初篩菌種前，要利用固體培養基在37 ℃條件下擴大培養目標菌種
C. 用于篩選的培養基是加入剛果紅染料的牛肉膏蛋白胨培養基
D. 應選擇菌落直徑與周圍透明圈直徑比值大的菌落進行純化
√
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解析：　凍牛糞中富含纖維素，有很多微生物，凍牛糞因溫度低，其內
的微生物是耐低溫微生物，故選用凍牛糞為材料篩選耐低溫的纖維素降解
菌，A正確；初篩菌種前，要利用液體培養基在37 ℃ 條件下擴大培養目標
菌種，B錯誤；用于篩選的培養基是以纖維素為唯一碳源的固體培養基，
加入的剛果紅染料起鑒別作用，C錯誤；由于剛果紅染料與纖維素形成紅
色復合物，因此會出現以纖維素降解菌為中心的透明圈，菌落直徑與周圍
透明圈直徑比值越小，菌株分解纖維素的能力越強，故應選擇菌落直徑與
周圍透明圈直徑比值小的菌落進行純化，D錯誤。
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4. （2025·山東淄博模擬）從土壤中分離某種微生物的培養基配方如圖，
該培養基中，果膠被剛果紅染成紅色。將土壤稀釋液接種在該培養基上，
培養一段時間后，平板上出現多個周圍有透明圈的菌落。下列分析錯誤的
是（　　）
A. 該培養基可用于分離產果膠酶的微生物
B. 培養基配方中的X應為瓊脂
C. KH2PO4和Na2HPO4能維持培養基的pH
D. 周圍出現透明圈的菌落全部為同一種微生物的克隆
√
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解析：　該培養基的唯一碳源為果膠，能夠生長的細菌是能分解果膠的
細菌，因此該培養基可用于分離產果膠酶的微生物，A正確；該平板培養
基為固體培養基，瓊脂為凝固劑，因此培養基配方中的X應為瓊脂，B正
確；KH2PO4、Na2HPO4在提供無機鹽的同時還能維持培養基pH穩定，C正
確；能產生果膠酶的微生物不止一種，通常情況下，用此培養基篩選出來
的微生物種類不一定相同，D錯誤。
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5. （2025·山東濟寧模擬）耐高溫淀粉酶在大規模工業生產中有很大的實
用性。嗜熱菌可以在高溫環境中生存，其產生的淀粉酶最適溫度較高。篩
選能產生耐高溫淀粉酶的嗜熱菌過程如圖1所示，其中Ⅰ號培養基用碘液處
理的結果如圖2所示。下列敘述正確的是（　　）
A. 圖2中周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種
B. 倒平板后對培養皿進行高壓蒸汽滅菌
C. 淀粉是圖2所示固體培養基的唯一碳源
D. 甲、乙試管中均為選擇培養基
√
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解析：　淀粉與碘液反應呈現藍色，能分解淀粉的嗜熱菌在培養基上生
長時可釋放淀粉酶，分解培養基中的淀粉，故周圍不顯藍色的菌落含有所
需菌種，A正確；倒平板時培養皿和培養基都已滅菌處理，因此倒平板后
不需要對培養皿再進行高壓蒸汽滅菌，B錯誤；據題圖2可知，培養基上出
現周圍顯藍色的菌落和周圍不顯藍色的菌落，因此淀粉可能不是題圖2所
示固體培養基的唯一碳源，C錯誤；題圖1中①過程是梯度稀釋，②過程是
接種，因此甲、乙試管主要是對嗜熱菌樣品進行稀釋，不具備選擇作用，
不屬于選擇培養基，D錯誤。
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6. （2025·廣東湛江模擬）自生固氮菌
是土壤中能獨立進行固氮的細菌。科研
人員進行了土壤中自生固氮菌的分離和
固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖所示。已知步驟④獲得的3個平板的菌落數分別為90、95、100，對照組平板為0。下列相關敘述正確的是（　）
A. 步驟②振蕩20 min的目的是擴大菌種數量，屬于選擇培養
B. 步驟④使用接種環劃線接種，使用前需要灼燒滅菌
C. 1 g土壤中平均自生固氮菌數約為9.5×106個
D. 所用培養基應加入碳源、氮源、無機鹽、水和瓊脂
√
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解析：　步驟②需充分振蕩的主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到
無菌水中，A錯誤；由題圖觀察可知，步驟④平板中的菌落分布均勻，故
步驟④所用的接種工具是涂布器，接種方法是稀釋涂布平板法，B錯誤；1
g土壤中平均自生固氮菌數約為（90＋95＋100）/3÷0.1×104＝9.5×106
（個），C正確；本實驗需要分離的自生固氮菌可以利用空氣中的氮氣作
為氮源，故所用培養基中不能加入氮源，D錯誤。
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7. （2025·江蘇南京、鹽城模擬）為了
解病原微生物對四種抗生素的敏感程
度，某研究小組進行了相關藥敏實驗，
圖1為部分實驗器材。將含有相同濃度
的抗生素Ⅰ～Ⅳ四個大小相同的紙片分別貼在長滿測試菌的平板上，實驗結果如圖2。下列相關敘述正確的是（　　）
A. 為獲得長滿測試菌的平板，需要使用圖1中器材①②③
B. 圖2中Ⅱ形成的抑菌圈較小，可能是病原微生物對藥物較敏感
C. 圖2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素Ⅳ作用下產生了突變株
D. 不同抗生素在平板上的擴散速度不同會影響實驗結果
√
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解析：　為獲得長滿測試菌的瓊脂平板，需要采用稀釋涂布平板法，該方法需要使用圖1中①酒精燈（操作需要在酒精燈火焰旁進行，酒精燈對涂布器進行灼燒滅菌）、③培養基和④涂布器，②為接種環（接種工具），是平板劃線法接種時需要使用的接種工具，用平板劃線法不能獲得長滿測試菌的平板，A錯誤；圖2中Ⅱ處透明圈最小，說明此處微生物對該藥物敏感度最低，B錯誤；突變株的出現不是在抗生素的作用下產生的，抗生素只能起選擇作用，C錯誤。
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8. （2025·山東日照模擬）三糖鐵培養基（TSI）含有牛肉膏、蛋白胨、糖
類（乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10∶10∶1）、酚紅（在酸性條件下呈
黃色、堿性條件下呈紅色）等成分。TSI瓊脂試驗法通過觀察腸桿菌科細
菌對三種糖的分解產生酸（少量的酸能被空氣緩慢氧化）量的多少來鑒別
其種類。操作過程是：用接種針挑取待測菌落后，刺入斜面TSI內，后緩
慢抽出接種針，在斜面上進行“之”字劃線。下列分析錯誤的是（　　）
A. 牛肉膏可為細菌提供氮源和維生素等
B. 穿刺和劃線的過程需嚴格控制雜菌污染
C. 若培養基中底層與斜面均呈黃色，推測細菌只能分解乳糖
D. 若底層呈黃色、斜面先呈黃色后變紅，推測細菌可能只分解葡萄糖
√
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解析：　牛肉膏可為細菌提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等，A正確；本實驗通過TSI瓊脂試驗法，觀察腸桿菌科細菌對三種糖的分解產生酸（少量的酸能被空氣緩慢氧化）量的多少來鑒別其種類，故穿刺和劃線的過程需嚴格控制雜菌污染，B正確；由于酚紅在酸性條件下呈黃色、堿性條件下呈紅色，若培養基的中底層與斜面均呈黃色，說明細菌產酸的量多，推測細菌也可能分解乳糖、蔗糖和葡萄糖，或分解含量較多的乳糖和蔗糖（或其中之一），C錯誤；若細菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，因培養基中葡萄糖的含量較少，其產酸的量也較少，斜面上所生成的少量酸被空氣緩慢氧化，使斜面由黃色變成紅色；底層由于處于缺氧狀態，細菌分解葡萄糖所產生的酸一時不能被空氣氧化而仍保持黃色。故若底層呈黃色、斜面先呈黃色后變紅，推測細菌可能只分解葡萄糖，D正確。
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二、非選擇題
9. （2025·江蘇鎮江聯考）我國衛生部門規定飲用水標準是1 mL自來水中
細菌總數不超過100個（37 ℃培養24 h），1 000 mL自來水中大腸桿菌菌落
數不能超過3個（37 ℃培養48 h）。水中大腸桿菌的含量常采用伊紅—亞
甲藍瓊脂培養基進行檢測，生長在此培養基上的大腸桿菌菌落呈深紫色且
帶有金屬光澤。某校生物興趣小組開展校園桶裝純凈水微生物含量檢測活
動，請回答問題：
（1）檢測飲用水中的細菌，需要配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，牛肉
膏和蛋白胨可以為細菌生長提供
（至少寫出兩點）等營養物質。從物理狀態角度分析，此培養基屬
于 培養基。
碳源、氮源、磷酸鹽、維生素
固體
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解析： 該實驗中用到的培養基中加入了牛肉膏、蛋白胨，其中蛋白胨來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等營養物質，故蛋白胨可以為微生物的生長提供碳源、氮源和維生素等營養物質；該培養基含有瓊脂，故屬于固體培養基。
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（2）某同學分別向3個培養基中各加入1 mL，未經稀釋的待測水樣，涂布
均勻后置于37 ℃的恒溫培養箱中培養24 h，結果如圖1所示。檢測時使用
的接種量為1 mL而不是0.1 mL，其理由是
。
解析：微生物計數時，應統計30～300之間的菌落，由于0.1 mL水樣
中細菌數目較少，經培養后平板菌落數可能達不到30個，故檢測時使用的
接種量為1 mL而不是0.1 mL。
0.1 mL水樣中細菌數目較少，
經培養后平板菌落數可能達不到30個
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（3）如圖2為用濾膜法測定飲用水中大腸桿菌數目的流程示意圖，請完成
下表。
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實驗步驟
的目的 簡要操作過程
①
將濾膜放入裝有蒸餾水的燒杯中，加熱煮沸15 min，共煮沸
三次
過濾細菌 裝置安裝好后，向漏斗內加入1 000 mL水樣，加蓋抽濾
沖洗漏斗壁 再向漏斗內加等量② 繼續抽濾
③
用無菌鑷子取濾膜，將其緊貼在伊紅—亞甲藍瓊脂平板上，然后將平板④ ，37 ℃培養48小時
統計大腸桿菌菌落數 選取⑤ 的菌落進行計數，統計結果為2個
濾膜
消毒
無菌水
培養大腸
桿菌
倒置
呈深紫色且帶有金屬光澤
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解析： ①“濾膜法”測定飲用水中大腸桿菌的數量時首先應進行
濾膜消毒，以保持實驗過程中的無菌環境，主要是通過加熱煮沸的方
法進行；②沖洗漏斗壁時向漏斗內加等量無菌水繼續抽濾；③培養大
腸桿菌時可加入伊紅—亞甲藍作為指示劑，兩者反應呈深紫色且帶有
金屬光澤；④培養基培養時應將其倒置；⑤選取呈深紫色且帶有金屬
光澤的菌落進行計數。
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（4）綜合（2）（3）測定結果，你認為所測桶裝純凈水的微生物含
量 （填“能”或“不能”）達到飲用水衛生標準，理由是

（寫出兩點）。
解析： 分析題意可知，我國衛生部門規定飲用水標準是1 mL自來水
中細菌總數不超過100個（37 ℃培養24 h），1 000 mL自來水中大腸桿菌菌
落數不能超過3個（37 ℃培養48 h），故該同學認為所測桶裝純凈水的微
生物含量已達到了飲用水衛生標準，是因為：1 mL 水樣中細菌總數約為
（96＋106＋92）÷3＝98個，沒有超過100個；1 000 mL水樣中大腸桿菌菌
落數為2個，沒有超過3個。
能
1 mL水
樣中細菌總數約為98個，沒有超過100個；1 000 mL水樣中大腸桿菌為2
個，沒有超過3個
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謝謝觀看！

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