資源簡介

第56講　動物細胞工程
一、選擇題
1.（2025·山東泰安質(zhì)檢）如圖為實驗小鼠皮膚組織進行細胞培養(yǎng)的過程，下列敘述正確的是（　　）
A.動物細胞培養(yǎng)體現(xiàn)了動物細胞的全能性
B.乙過程對皮膚組織可用胃蛋白酶處理
C.丙過程為原代培養(yǎng)，遺傳物質(zhì)一定不變
D.丁過程中某些細胞可能會無限增殖
2.（2025·湖北師大附中高三測評）將小鼠細胞與人細胞融合后獲得“人—鼠融合細胞”，發(fā)現(xiàn)人的染色體會隨機丟失，最終只保留一條或幾條染色體。下列敘述正確的是（　　）
A.小鼠細胞與人細胞融合表明細胞膜具有信息識別的功能
B.可利用PCR檢測人的基因表達產(chǎn)物
C.可通過檢測“人—鼠融合細胞”的基因表達產(chǎn)物，初步定位人基因位于幾號染色體上
D.“人—鼠融合細胞”的獲得突破了人和小鼠之間的生殖隔離
3.（2025·山東濟南高三開學考）動物體細胞核移植技術(shù)的原理是動物細胞核具有全能性。下列說法正確的是（　　）
A.為提高成功率，將卵母細胞培養(yǎng)到MⅡ期，在盡可能短的時間內(nèi)去除紡錘體—染色體復合物并注入體細胞
B.需用電刺激、Ca2＋載體和聚乙二醇等激活重構(gòu)胚，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程
C.胚胎發(fā)育到桑葚胚階段，胚胎內(nèi)部開始出現(xiàn)含有液體的腔
D.早期胚胎培養(yǎng)需要無菌的O2和CO2，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH
4.（2025·廣東廣州高三一模）誘導多能干細胞（iPS細胞）是通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將某些誘導基因?qū)雱游锘蛉说捏w細胞，使體細胞直接重構(gòu)成為胚胎干細胞（ES細胞）細胞樣的多潛能細胞。下圖表示科學家利用小鼠皮膚細胞培養(yǎng)出多種細胞的過程，下列敘述錯誤的是（　　）
A.iPS細胞在細胞形態(tài)、生長特性等方面與ES細胞相似
B.過程①中細胞內(nèi)發(fā)生了基因重組
C.過程②中細胞內(nèi)某些基因處于關(guān)閉狀態(tài)
D.獲得iPS細胞需要使用卵細胞或者胚胎細胞
5.（2025·北京西城區(qū)一模）將細胞毒素類藥物與單克隆抗體結(jié)合形成抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC），可實現(xiàn)對腫瘤細胞的選擇性殺傷，過程如圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A.體外培養(yǎng)單個漿細胞可持續(xù)大量獲得抗體
B.ADC通過胞吞作用進入腫瘤細胞
C.ADC在溶酶體中被裂解后釋放出藥物
D.選擇性殺傷腫瘤細胞利用了單克隆抗體特異性強的特點
6.（2025·廣西南寧武鳴高級中學高三開學考）“中中”和“華華”是我國科學家培育出的世界首例體細胞克隆猴，培育過程如圖所示。下列有關(guān)分析正確的是（　　）
A.“中中”和“華華”的特征與B猴幾乎相同
B.體細胞克隆形成新個體說明細胞具有全能性
C.重組細胞中核的融合依賴于生物膜的流動性
D.克隆猴形成過程中存在細胞分裂、分化與衰老
7.（2025·江西上進高中聯(lián)盟高三聯(lián)考）“豬繁殖與呼吸綜合征”是一種由病毒 PRRSV 引發(fā)的傳染病。科學家制備出 PRRSV－GP3 蛋白的單克隆抗體，可對該病進行診斷和治療，制備過程如下圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A.給小鼠注射GP3蛋白的目的是獲得抗GP3蛋白抗體
B.細胞乙、丙、丁的培養(yǎng)過程中均需要適宜的溫度和氣體環(huán)境等條件
C.第2次篩選的目的是篩選出能產(chǎn)生抗GP3蛋白抗體的雜交瘤細胞
D.擴大培養(yǎng)通常采用的方法是將細胞丁注射到小鼠腹腔內(nèi)或在體外大規(guī)模培養(yǎng)
8.在體細胞克隆猴培育過程中，為調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達，提高胚胎的發(fā)育率和妊娠率，研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重構(gòu)胚，同時用組蛋白脫乙酰酶抑制劑（TSA）處理，具體流程如圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A.常用顯微操作法去除由核膜包被的卵母細胞的細胞核
B.去核時使用的梯度離心、紫外光照射和化學物質(zhì)處理等方法都沒有穿透卵母細胞透明帶
C.滅活的仙臺病毒可使細胞膜上的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)分子重新排布，利于融合
D.組蛋白去甲基化和乙酰化的表觀遺傳修飾有利于重構(gòu)胚的分裂和發(fā)育
二、非選擇題
9.（2025·廣東廣州模擬）腸道病毒71型（EV71）為單股正鏈RNA病毒，是引起手足口病的主要病原體之一，在EV71中，病毒結(jié)構(gòu)蛋白1（VP1）為主要的中和抗原（中和抗原與中和抗體結(jié)合后能阻止病原體入侵與增殖）。圖1為利用重組大腸桿菌表達VP1蛋白，并以VP1蛋白為抗原制備單克隆抗體的過程。回答以下問題：
（1）重組大腸桿菌中，由EV71病毒的RNA構(gòu)建 cDNA需經(jīng)過　　　　過程，隨后cDNA通過PCR技術(shù)擴增。將目的基因?qū)氪竽c桿菌需要構(gòu)建表達載體，常用的表達載體是　　　　　。
（2）在小鼠腹腔內(nèi)注射VP1蛋白進行免疫，在35天獲取B淋巴細胞懸液進行融合。在獲取B淋巴細胞前3天需在腹腔再次注射VP1蛋白，這樣做的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（3）缺失HPRT基因的細胞無法在HAT培養(yǎng)基中生存，HAT培養(yǎng)基可以篩選出骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合的雜交瘤細胞，其他細胞都會死亡。據(jù)此推測，在單克隆抗體制備過程中缺失HPRT基因的細胞是　　　　　　　　（填“大腸桿菌”“B淋巴細胞”或“骨髓瘤細胞”）。
（4）在雜交瘤細胞篩選培養(yǎng)過程中需在培養(yǎng)基中添加胎牛血清，并置于37 ℃、50 mL/L CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱中CO2的作用是　　　　　　　　　　。
（5）下圖是研究人員對不同單克隆抗體（A/B）的檢測結(jié)果。哪一種單克隆抗體適合進入下一步研制？　　　，理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。
（6）該單克隆抗體成功制備后，對于防治手足口病有什么作用？
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
第56講　動物細胞工程
1.D　動物細胞培養(yǎng)沒有獲得動物個體，不能體現(xiàn)動物細胞的全能性，A錯誤；乙過程對皮膚組織可用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理，B錯誤；丙過程屬于原代培養(yǎng)，此過程的細胞大部分能保持正常的二倍體核型，有些細胞的遺傳物質(zhì)也可能發(fā)生改變，C錯誤；丁過程屬于傳代培養(yǎng)，此過程少數(shù)細胞會發(fā)生突變，朝著癌細胞方向發(fā)展，可能會無限增殖，D正確。
2.C　小鼠細胞與人細胞融合，表明細胞膜具有流動性，A錯誤；基因表達的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，不能用PCR檢測，B錯誤；融合實驗中，人染色體會隨機丟失，最終只保留一條或幾條染色體，可通過檢測“人—鼠融合細胞”的基因表達產(chǎn)物，初步定位人基因位于幾號染色體上，C正確；人—鼠融合細胞是通過細胞融合技術(shù)實現(xiàn)的，但并不能獲得可育后代，說明人和小鼠之間依然存在生殖隔離，D錯誤。
3.A　卵母細胞培養(yǎng)到MⅡ期，此時細胞內(nèi)具有促進全能性表達的物質(zhì)，在盡可能短的時間內(nèi)去除紡錘體—染色體復合物，即除去受體細胞的遺傳物質(zhì)，再注入體細胞，形成融合細胞，A正確；用物理或化學方法（如電刺激、Ca2＋載體、乙醇、蛋白酶合成抑制劑等）激活重構(gòu)胚，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程，B錯誤；胚胎發(fā)育到囊胚階段，胚胎內(nèi)部開始出現(xiàn)含有液體的腔，C錯誤；早期胚胎培養(yǎng)需要注入95％的無菌空氣和5％的CO2，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH，D錯誤。
4.D　iPS細胞為誘導多能干細胞，在細胞形態(tài)、生長特性等方面與ES細胞相似，A正確；由題圖可知，過程①是將誘導基因?qū)胄∈笃つw細胞中，該過程中細胞內(nèi)發(fā)生了基因重組，B正確；過程②表示細胞分化，其實質(zhì)是基因的選擇性表達，所以細胞內(nèi)某些基因處于關(guān)閉狀態(tài)，C正確；由題意可知，誘導多能干細胞（iPS細胞）是通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將某些誘導基因?qū)雱游锘蛉说捏w細胞，使體細胞直接重構(gòu)成為胚胎干細胞（ES細胞）細胞樣的多潛能細胞，D錯誤。
5.A　漿細胞為高度分化的細胞，無分裂能力，故體外培養(yǎng)單個漿細胞不能持續(xù)大量獲得抗體，A錯誤；由題圖可知，ADC與腫瘤細胞細胞膜表面的受體識別結(jié)合后，腫瘤細胞細胞膜內(nèi)陷形成的囊泡包裹著ADC進入細胞內(nèi)，故ADC（大分子）是通過胞吞作用進入腫瘤細胞的，B正確；由題圖可知，包裹著ADC的囊泡會與溶酶體結(jié)合，ADC在溶酶體中被分解后釋放出藥物，殺傷腫瘤細胞，使其死亡，C正確；單克隆抗體能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，選擇性殺傷腫瘤細胞就是利用了單克隆抗體特異性強的特點，D正確。
6.D　“中中”“華華”的細胞核遺傳物質(zhì)來自A猴，因此它們和A猴的遺傳特征幾乎相同，A錯誤；體細胞克隆猴的培育證明了動物細胞的細胞核具有全能性，但不能說明細胞具有全能性，B錯誤；重組細胞中細胞核來自A猴，不存在核的融合，C錯誤；重組細胞發(fā)育形成克隆猴的過程中，存在細胞分裂、分化與衰老，D正確。
7.A　給小鼠注射GP3蛋白的目的是獲得產(chǎn)生抗GP3蛋白抗體的B細胞，A錯誤。
8.A　常用顯微操作法去除卵母細胞的細胞核，而此處的細胞核是紡錘體—染色體復合物，不具有核膜，A錯誤；目前動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法，也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質(zhì)處理等方法，這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性，B正確；滅活的仙臺病毒可使細胞膜上的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，C正確；研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重構(gòu)胚，同時用組蛋白脫乙酰酶抑制劑TSA處理，有利于重構(gòu)胚的分裂和發(fā)育，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程，D正確。
9.（1）逆轉(zhuǎn)錄　質(zhì)粒　（2）二次免疫后，產(chǎn)生的B淋巴細胞更多（合理即可）　（3）骨髓瘤細胞　（4）維持pH穩(wěn)定　（5）單克隆抗體A　單克隆抗體A能特異性地識別病毒且中和效果好　（6）快速檢測是否感染，有效治療患者
解析：（1）以RNA為模板構(gòu)建cDNA需要經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄過程。將目的基因?qū)氪竽c桿菌時需要構(gòu)建表達載體，常用的表達載體是質(zhì)粒。（2）在獲取B淋巴細胞前3天再次注射VP1蛋白，可以通過二次免疫使機體產(chǎn)生更多的B淋巴細胞。（3）由于缺失HPRT基因的細胞無法在HAT培養(yǎng)基中生存，HAT培養(yǎng)基可以篩選出骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合的雜交瘤細胞，其他細胞都會死亡，B淋巴細胞的存活時間較短，不需要特別篩選，但正常情況下骨髓瘤細胞能無限增殖，推知缺失HPRT基因的細胞是骨髓瘤細胞。（4）培養(yǎng)箱中CO2的作用是維持培養(yǎng)液pH穩(wěn)定。（5）由題圖2可知，使用單克隆抗體A和單克隆抗體B均能特異性識別EV71；由題圖3可知，單克隆抗體A的中和效果更好。（6）該單克隆抗體因其具有很高的特異性，能夠快速檢測是否感染，有效治療患者。
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課程標準
1.闡明動物細胞培養(yǎng)是從動物體獲得相關(guān)組織，分散成單個細胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細胞生長和增殖的過程。動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的基礎(chǔ)。
2.闡明動物細胞核移植一般是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，并使重組細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的過程。
3.闡明動物細胞融合是指通過物理、化學或生物學等手段，使兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程。
4.概述細胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。
5.簡述干細胞在生物醫(yī)學工程中有廣泛的應(yīng)用價值。
考點一　動物細胞培養(yǎng)
1.動物細胞培養(yǎng)的概念：從動物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術(shù)。
2.地位：動物細胞工程常用的技術(shù)有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞核移植、動物細胞融合等。其中　　　　　　　　是動物細胞工程的基礎(chǔ)。
3.動物細胞培養(yǎng)的條件
4.動物細胞培養(yǎng)的過程
（1）體外培養(yǎng)的動物細胞的類型
①能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖；
②需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長繁殖，而且還會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，從而使細胞停止分裂增殖。
（2）過程
提醒 ①區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)
a.分瓶前，第一次用胰蛋白酶對動物組織進行處理后的培養(yǎng)是原代培養(yǎng)。
b.第二次用胰蛋白酶處理，使細胞從瓶壁上脫離下來，分瓶后的細胞培養(yǎng)為傳代培養(yǎng)。
②細胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細胞很快就貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，稱為細胞貼壁。細胞數(shù)目不斷增多，當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞通常會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。
5.干細胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用
1.（選擇性必修3 P44正文）將動物細胞置于含有95％O2和5％CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。（　　）
2.（選擇性必修3 P44正文）動物細胞在培養(yǎng)過程中都具有細胞貼壁的現(xiàn)象。（　　）
3.（選擇性必修3 P44正文）體外培養(yǎng)的動物細胞一類能懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖，另一類需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖。（　　）
4.（選擇性必修3 P45正文）人們通常將動物組織經(jīng)蛋白酶處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)，分瓶后的細胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。（　　）
5.（選擇性必修3 P46正文）干細胞存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中。（　　）
1.（2022·湖北高考6題）某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能的是（　　）
A.實驗材料取自小鼠胚胎的腦組織
B.為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封
C.血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基
D.所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性
2.如圖為動物細胞培養(yǎng)過程中細胞的增殖曲線。下列敘述錯誤的是（　　）
A.圖中A點進行的是細胞的原代培養(yǎng)
B.B點無需使用胰蛋白酶處理細胞
C.B點到C點過程中進行了多次傳代培養(yǎng)
D.D點以后的細胞具有無限增殖的特點
歸納拓展
動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的比較
3.（2025·八省聯(lián)考晉陜青寧卷）我國科學家使用小分子化合物處理小鼠體細胞，成功獲得誘導多能干細胞（iPS細胞），降低了通過導入原癌基因c-Myc等基因制備iPS細胞的潛在成瘤風險。下列敘述正確的是（　　）
A.iPS細胞的潛在成瘤風險來自c-Myc基因抑制了細胞的分裂分化
B.單基因遺傳病患者使用iPS細胞治療后，體內(nèi)不再攜帶致病基因
C.人工制備的iPS細胞同時具備多向分化潛能和自我更新能力
D.使用非親緣iPS細胞能解決干細胞移植中HLA造成的免疫排斥
考點二　動物細胞融合技術(shù)與單克隆抗體
1.動物細胞融合技術(shù)
【教材拾遺】 （選擇性必修3 P48相關(guān)信息）滅活病毒誘導細胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。
2.單克隆抗體及其應(yīng)用
（1）制備原理
①B淋巴細胞特點：一種B淋巴細胞只分泌　　　　　　　　　。
②骨髓瘤細胞特點：能在體外　　　　　　。
③雜交瘤細胞的特點：既能　　　　　　　，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的　　　　　　。
（2）制備過程
（3）單克隆抗體的特點和應(yīng)用
提醒 抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）的抗體主要發(fā)揮靶向運輸作用，通過特異性結(jié)合靶細胞表面的抗原，將藥物輸送到靶細胞；藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細胞。
1.（選擇性必修3 P48正文）動物細胞融合的結(jié)果是形成單核的雜交細胞，植物體細胞雜交的結(jié)果是得到雜種植株。（　　）
2.（選擇性必修3 P37、P48正文）滅活的病毒能促進動物細胞融合，但不能促進植物細胞融合。（　　）
3.（選擇性必修3 P48～49圖2－16）將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行誘導融合，培養(yǎng)液中融合后的細胞即雜交瘤細胞。（　　）
4.（選擇性必修3 P48～49圖2－16）多種B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合篩選后，還需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，才能獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。（　　）
5.（選擇性必修3 P50正文）單克隆抗體能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備。（　　）
6.（選擇性必修3 P50思考·討論）抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。（　　）
1.（2025·山東壽光模擬）細胞合成DNA通常有2種途徑：第1種途徑是利用糖和氨基酸合成核苷酸，進而合成DNA；第2種途徑是通過HGPRT利用核苷酸的前體合成核苷酸，進而合成DNA。HAT培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基添加了次黃嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T），A可以阻斷DNA合成的第1種途徑，H和T則是第2條途徑中合成核苷酸的原料。HAT培養(yǎng)基可以用于單克隆抗體制備雜交瘤細胞的選擇，小鼠骨髓瘤細胞是一類HGPRT代謝缺陷型細胞。下列說法正確的是（　　）
A.小鼠免疫B細胞和骨髓瘤細胞融合后，培養(yǎng)基上會有3種類型的細胞
B.HAT培養(yǎng)基中未融合的骨髓瘤細胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡
C.HAT培養(yǎng)基中未融合的免疫B細胞仍具有增殖能力而持續(xù)進行細胞分裂
D.HAT培養(yǎng)基中選擇出的雜交瘤細胞都能無限增殖且產(chǎn)生單克隆抗體
2.（2024·江蘇南京高三聯(lián)考）細胞a和細胞b經(jīng)過細胞融合形成細胞d，如圖所示，下列說法正確的是（　　）
A.若d為雜交瘤細胞，則經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選后，可用于生產(chǎn)單克隆抗體
B.若d為動物細胞受精卵，則形成d的過程涉及細胞膜的選擇透過性
C.若d形成無性雜種植株，則直接用PEG誘導a、b細胞融合為c
D.若d形成無性雜種植株，則其涉及的變異類型屬于染色體變異
題后歸納
植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較
3.（2025·江西臨川一中）抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）是采用特定技術(shù)將具有生物活性的小分子藥物連接到單克隆抗體上，實現(xiàn)對腫瘤細胞精準的選擇性殺傷。ADC的結(jié)構(gòu)及其發(fā)揮作用的機理如圖，有關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A.ADC實現(xiàn)精準殺傷腫瘤細胞的基礎(chǔ)是抗體與抗原特異性結(jié)合
B.該腫瘤細胞死亡是在ADC誘導下細胞自動死亡的過程
C.將特定抗原注射到小鼠體內(nèi)，可以從小鼠血清中獲得單克隆抗體
D.對特定抗原篩選出的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)可獲得單克隆抗體
考點三　動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物
1.概念、原理及類型
【教材拾遺】 （選懌性必修3 P52正文）動物胚胎細胞分化程度低，表現(xiàn)全能性相對容易；而動物體細胞分化程度高，表現(xiàn)全能性十分困難。因此動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植。
2.體細胞核移植的過程
【教材拾遺】 （1）（選擇性必修3 P52相關(guān)信息）減數(shù)分裂Ⅱ中期卵母細胞中的“核”其實是紡錘體—染色體復合物。
（2）（選擇性必修3 P54相關(guān)信息）目前動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質(zhì)處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。
提醒 細胞核移植技術(shù)中的三個注意點
①動物細胞核移植技術(shù)，體現(xiàn)了動物細胞核的全能性而非細胞的全能性。
②克隆屬于無性繁殖，產(chǎn)生新個體的性別、絕大多數(shù)性狀與供核親本一致。
③核移植技術(shù)獲得的動物與供核動物性狀不完全相同的原因：a.克隆動物細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)來自去核卵母細胞；b.性狀受環(huán)境的影響；c.在個體發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變。
3.體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景及存在的問題
1.（選擇性必修3 P52正文）通過克隆技術(shù)形成重組細胞并發(fā)育成一個新個體，體現(xiàn)了動物細胞的全能性。（　　）
2.（選擇性必修3 P52相關(guān)信息）減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）卵母細胞中的“核”其實是紡錘體—染色體復合物。（　　）
3.（選擇性必修3 P53圖2－18）重構(gòu)胚的激活可用Ca2＋載體、蛋白酶合成抑制劑等方法。（　　）
4.（選擇性必修3 P53相關(guān)信息）重構(gòu)胚是天然形成的胚胎，具有發(fā)育成完整個體的能力。（　　）
5.（選擇性必修3 P54相關(guān)信息）動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。（　　）
6.（選擇性必修3 P52正文）克隆動物的性狀與供核動物完全相同。（　　）
1.（2025·貴州高考適應(yīng)性考試）利用動物體細胞核移植技術(shù)可培育高產(chǎn)奶牛，流程如圖所示。下列敘述錯誤的是（　　）
A.犢牛W有母牛X細胞中的線粒體DNA B.犢牛W的遺傳性狀與母牛X相似度更高
C.重構(gòu)胚的形成可采用電融合的方法 D.細胞培養(yǎng)時需添加氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)
2.（2025·山東聊城一模）下圖是利用體細胞核移植來克隆高產(chǎn)奶牛的大致流程示意圖，下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A.圖中過程①常用顯微操作法去除紡錘體和染色體的復合物
B.進行過程②前可用機械方法將動物組織分散成單個細胞
C.圖中的重構(gòu)胚中含有卵母細胞和供體細胞的細胞質(zhì)
D.進行過程④時需取樣滋養(yǎng)層細胞進行DNA分析以鑒定性別
1.（2024·浙江1月選考13題）某動物細胞培養(yǎng)過程中，細胞貼壁生長至接觸抑制時，需分裝培養(yǎng)，實驗操作過程如圖。
下列敘述錯誤的是（　　）
A.①加消化液的目的是使細胞與瓶壁分離
B.②加培養(yǎng)液的目的是促進細胞增殖
C.③分裝時需調(diào)整到合適的細胞密度
D.整個過程需要在無菌、無毒條件下進行
溯源教材
（1）動物體內(nèi)的細胞維持正常生命活動、不斷增殖，是因為機體給這些細胞提供了適宜的條件，包括充足的營養(yǎng)、穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境等。在體外培養(yǎng)的動物細胞，也需要滿足類似條件。 （見選擇性必修3 P43正文）
（2）用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理一段時間，使組織分散成單個細胞。（見選擇性必修3 P44正文）
（3）在體外培養(yǎng)細胞時，必須保證環(huán)境是無菌、無毒的。（見選擇性必修3 P44正文）
（4）懸浮培養(yǎng)的細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻。貼壁生長時會發(fā)生接觸抑制。（見選擇性必修3 P44正文）
2.（2024·黑吉遼高考14題）從小鼠胚胎中分離獲取胚胎成纖維細胞進行貼壁培養(yǎng)，在傳代后的不同時間點檢測細胞數(shù)目，結(jié)果如圖。下列敘述正確的是（　　）
A.傳代培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿需密封防止污染
B.選取①的細胞進行傳代培養(yǎng)比②更合理
C.直接用離心法收集細胞進行傳代培養(yǎng)
D.細胞增長進入平臺期可能與細胞密度過大有關(guān)
3.（2024·江西高考16題改編）某病毒顆粒表面有一特征性的大分子結(jié)構(gòu)蛋白S（含有多個不同的抗原決定基，每一個抗原決定基能夠刺激機體產(chǎn)生一種抗體）。為了建立一種靈敏、高效檢測S蛋白的方法，研究人員采用雜交
瘤技術(shù)制備了抗-S單克隆抗體（如圖）。下列說法正確的是（　　）
A.利用胃蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細胞
B.制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B是相同的單克隆抗體
C.用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞可傳代培養(yǎng)，但不能凍存
D.單克隆抗體A和單克隆抗體B都能夠特異性識別S蛋白
4.（2024·江蘇高考11題）我國科學家利用人的體細胞制備多能干細胞，再用小分子TH34成功誘導衍生成胰島B細胞。下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A.基因選擇性表達被誘導改變后，可使體細胞去分化成多能干細胞
B.在小分子TH34誘導下，多能干細胞發(fā)生基因突變，獲得胰島素基因
C.衍生的胰島B細胞在葡萄糖的誘導下能表達胰島素，才可用于移植治療糖尿病
D.若衍生的胰島B細胞中凋亡基因能正常表達，細胞會發(fā)生程序性死亡
5.（2023·湖北高考22題，節(jié)選）某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴重。我國學者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病毒，其主要技術(shù)路線如圖所示。
回答下列問題：
（1）與小鼠骨髓瘤細胞融合前，已免疫的脾細胞（含漿細胞）　　　　（填“需要”或“不需要”）通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量；添加脂溶性物質(zhì)PEG可促進細胞融合，該過程中PEG對細胞膜的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。
（2）在雜交瘤細胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基對　　　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　生長具有抑制作用。
（3）單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，其目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　。
　（1）體外培養(yǎng)卵母細胞時通常加入濕熱滅菌后的血清。 （2024·江蘇高考）（　　）
（2）營養(yǎng)供應(yīng)充足時，傳代培養(yǎng)的胚胎干細胞不會發(fā)生接觸抑制。（2023·海南高考）（　　）
（3）培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳。 （2022·江蘇高考）（　　）
（4）將骨髓瘤細胞和B淋巴細胞混合后融合的細胞即為雜交瘤細胞。 （2021·江蘇高考）（　　）
（5）去核時常使用顯微操作去核法對受精卵進行處理。 （2021·遼寧高考）（　　）
第56講　動物細胞工程
【破考點·抓必備】
考點一
知識梳理夯基
2.動物細胞培養(yǎng)
3. 血清　 滅菌　 無菌　 更換培養(yǎng)液　 維持培養(yǎng)液的pH
4.（2） 胰蛋白　 單個細胞　 細胞懸液　 原代　 懸浮　 貼壁　 分裂受阻或停止　 傳代培養(yǎng)
5.骨髓　成體　胚胎干細胞
概念檢測
1.×　提示：將動物細胞置于含有95％空氣和5％CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
2.×　提示：體外培養(yǎng)的動物細胞可以分為兩大類：一類細胞能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖，不具有細胞貼壁的現(xiàn)象；另一類則需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖，大多數(shù)細胞屬于這種類型。
3.√　4.√　5.√
典題演練應(yīng)用
1.A　小鼠胚胎腦組織中含有豐富的原代神經(jīng)元，細胞增殖能力強，不會造成生長緩慢，A符合題意；培養(yǎng)瓶瓶口密封會使培養(yǎng)液中缺氧，影響細胞有氧呼吸，造成供能不足，可能使細胞生長緩慢，B不符合題意；高溫會使血清含有的促進細胞生長和增殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)失活，細胞生存環(huán)境嚴重惡化，可能使細胞生長緩慢，C不符合題意；小鼠細胞內(nèi)環(huán)境為弱堿性，所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性，使細胞生存環(huán)境惡劣，可能造成細胞生長緩慢，D不符合題意。
2.B　由圖分析可知，在B點時更換了培養(yǎng)基，因此A點時為原代培養(yǎng)，A正確；B點時更換培養(yǎng)基，需要讓細胞從培養(yǎng)瓶上剝離，因此需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，B錯誤；BC段增殖代數(shù)較多，顯然進行了多次傳代培養(yǎng)，C正確；由圖可知，隨增殖代數(shù)的增加，少數(shù)細胞突變，朝著癌細胞方向發(fā)展，D點后可能具有無限增殖的特點，D正確。
3.C　原癌基因c-Myc等基因會促進細胞的分裂，A錯誤；單基因遺傳病患者使用iPS細胞治療后，只是利用了iPS細胞分化出正常細胞來替代病變細胞，但體內(nèi)依舊攜帶致病基因，B錯誤；iPS細胞為誘導多能干細胞，同時具備多向分化潛能和自我更新能力，C正確；非親緣iPS細胞HLA不同，使用非親緣iPS細胞不能解決干細胞移植中HLA造成的免疫排斥，D錯誤。
考點二
知識梳理夯基
1. 滅活病毒誘導法　 細胞膜的流動性　 遠緣雜交　 單克隆抗體
2.（1）①一種特異性抗體　②大量增殖　③大量增殖　特定抗體（2） 特定的抗原　 B淋巴　 選擇培養(yǎng)基　 雜交瘤　 大量增殖　 抗體檢測　 所需抗體　 特定抗原　 陽性　（3） 特異性　 大量制備　 診斷試劑　 藥物
概念檢測
1.√　2.√
3.×　提示：將骨髓瘤細胞和B淋巴細胞混合，經(jīng)誘導后融合的細胞不都是雜交瘤細胞，還有B細胞自身融合的細胞、骨髓瘤細胞自身融合的細胞等，需要進行篩選。
4.√　5.√　6.√
典題演練應(yīng)用
1.B　小鼠免疫B細胞和骨髓瘤細胞融合后，培養(yǎng)基上會有5種類型的細胞，但最終生存下來的只有雜交瘤細胞，A錯誤；由于小鼠骨髓瘤細胞是一類HGPRT代謝缺陷型細胞，因此骨髓瘤細胞合成DNA只有第1種途徑，但是A可以阻斷DNA合成的第1種途徑，所以HAT培養(yǎng)基中未融合的骨髓瘤細胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡，B正確；免疫B細胞屬于高度分化的細胞，不再增殖，C錯誤；HAT培養(yǎng)基中選擇出的雜交瘤細胞都能無限增殖，但不是都能產(chǎn)生單克隆抗體，D錯誤。
2.D　經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選得到的雜交瘤細胞經(jīng)多次單一抗體篩選才可用于生產(chǎn)單克隆抗體，A錯誤；若d為動物細胞受精卵，形成受精卵過程，涉及細胞膜的流動性，B錯誤；若d形成無性雜種植株，則采用了細胞工程中的植物體細胞雜交技術(shù)，則將a、b兩植物細胞先經(jīng)纖維素酶和果膠酶處理獲取原生質(zhì)體，再經(jīng)PEG處理后可得到d細胞，C錯誤；若d形成無性雜種植株，則其涉及的變異類型屬于染色體變異中的染色體數(shù)目變異，D正確。
3.C　由于單克隆抗體的特異性強，能特異性識別抗原，因此可以把抗腫瘤細胞的單克隆抗體與藥物等相結(jié)合，借助單克隆抗體的定位導向作用將藥物定向帶到腫瘤細胞，故ADC實現(xiàn)精準殺傷腫瘤細胞的基礎(chǔ)是抗體與抗原特異性結(jié)合，A正確；ADC進入細胞后，溶酶體使其裂解，釋放藥物，導致細胞凋亡，腫瘤細胞凋亡是細胞自動死亡的過程，B正確；將特定抗原注射到小鼠體內(nèi)，可以從小鼠血清中獲得抗體，獲得的抗體可能有多種，此時不是單克隆抗體，單克隆抗體是對特定抗原篩選出的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)而獲得的，該種細胞的特點是既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生所需抗體，C錯誤，D正確。
考點三
知識梳理夯基
1.去核的卵母細胞　新胚胎　動物細胞核
2. MⅡ　 電融合　 Ca2＋載體　 蛋白酶合成抑制劑
概念檢測
1.×　提示：動物體細胞核移植的原理是動物體細胞核的全能性，而不是動物細胞的全能性。
2.√　3.√　4.×　5.√
6.×　提示：克隆動物細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)來自卵母細胞，與供核細胞不完全相同，且克隆動物與供核動物的生活環(huán)境可能有差異，因此二者的性狀不完全相同。
典題演練應(yīng)用
1.B　母牛X提供細胞質(zhì)，因此犢牛W有母牛X細胞中的線粒體DNA，A正確；母牛Y的體細胞提供細胞核，細胞核是遺傳信息庫，因此犢牛W的遺傳性狀與母牛Y相似度更高，B錯誤；可以采用電融合法促使兩個細胞融合形成重構(gòu)胚，C正確；細胞培養(yǎng)時需添加氨基酸、糖類等營養(yǎng)物質(zhì)，以滿足細胞正常生命活動的需要，D正確。
2.D　在體細胞核移植過程中，去核實質(zhì)上是去除紡錘體—染色體復合物，圖中過程①常用顯微操作法去除紡錘體和染色體的復合物，A正確；將供體細胞注入去核卵母細胞中，構(gòu)成重構(gòu)胚，圖中的重構(gòu)胚中含有卵母細胞和供體細胞的細胞質(zhì)，C正確；圖中的供體細胞核來自高產(chǎn)奶牛，則胚胎移植后生出的犢牛性別為雌性，因此進行過程④時不需要取樣滋養(yǎng)層細胞進行DNA分析以鑒定性別，D錯誤。
【研真題·扣教材】
1.B　①加消化液的目的是使細胞與瓶壁分離，A正確；②加培養(yǎng)液，多次加培養(yǎng)液先洗去殘留的消化酶，然后終止消化液的消化作用，并對細胞加以稀釋，B錯誤；③分裝時需調(diào)整到合適的細胞密度，因為若密度過大細胞之間仍存在接觸抑制，C正確；動物細胞培養(yǎng)需要無菌、無毒環(huán)境，因此整個過程需要在無菌、無毒條件下進行，D正確。
2.D　動物細胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細胞代謝所必需的。傳代培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿不能密封，A錯誤。處于指數(shù)增長期的細胞形態(tài)和生理特性相對穩(wěn)定，適合進行傳代培養(yǎng)，離體培養(yǎng)的細胞生命力比較脆弱，需要適應(yīng)培養(yǎng)基的環(huán)境，傳代最好在細胞生長覆蓋瓶底80％～90％時進行，故選取②的細胞進行傳代培養(yǎng)比①更合理，B錯誤。題干顯示從小鼠胚胎中分離獲取胚胎成纖維細胞進行貼壁培養(yǎng)，貼壁細胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細胞，然后再用離心法收集，C錯誤。懸浮培養(yǎng)的細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，因此，細胞增長進入平臺期可能與細胞密度過大有關(guān)，D正確。
3.D　膠原蛋白酶可以催化分解細胞外的膠原蛋白，因此利用膠原蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細胞，A錯誤；由于蛋白S含有多個不同的抗原決定基，每一個抗原決定基能夠刺激機體產(chǎn)生一種抗體，單克隆抗體A和單克隆抗體B來自不同的雜交瘤細胞，因此制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B不是相同的單克隆抗體，B錯誤；用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞可傳代培養(yǎng)，也可以冷凍保存，C錯誤；單克隆抗體A和單克隆抗體B都來自篩選出的雜交瘤細胞，因此都能夠特異性識別S蛋白上的抗原決定簇，D正確。
4.B　體細胞可以通過特定的因子導入和培養(yǎng)條件，基因的調(diào)控和表達模式的改變，使得原本專一功能的體細胞去分化成為多能干細胞，即基因選擇性表達被誘導改變后，可使體細胞去分化成多能干細胞，A正確；小分子藥物通常是通過調(diào)節(jié)現(xiàn)有的生物通路和基因表達來實現(xiàn)其功能，而胰島素基因在人體所有細胞中都存在，但只有在胰島細胞中才會表達，所以多能干細胞在誘導分化的過程中不會突然發(fā)生基因突變獲得胰島素基因，B錯誤；胰島B細胞受到較高的血糖濃度的刺激分泌胰島素，胰島素降低血糖濃度，所以衍生的胰島B細胞需在葡萄糖的誘導下成功表達胰島素，以確保衍生的胰島B細胞能夠正常發(fā)揮功能，才可用于移植治療糖尿病，C正確；細胞凋亡的實質(zhì)就是一種由遺傳機制決定的細胞的程序性死亡，衍生的胰島B細胞中凋亡基因的正常表達會導致衍生的胰島B細胞發(fā)生程序性死亡，D正確。
5.（1）不需要　使細胞接觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合　（2）未融合的（親本）細胞　融合的具有同種核的細胞　（3）通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞
解析：（1）一般認為，已免疫的脾細胞（含漿細胞）中已含足夠數(shù)量的能產(chǎn)生特異性抗體的效應(yīng)B細胞。聚乙二醇（PEG）分子能改變膜結(jié)構(gòu)，使兩細胞接觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。（2）淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合后，有的細胞未融合，有的細胞已融合；融合細胞中有的是具有同種核的細胞，有的是具有不同種核的細胞（雜交瘤細胞）。使用選擇培養(yǎng)基的目的是篩選出能分泌特定抗體的雜交瘤細胞；在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞的生長受到抑制，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。（3）將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交的目的是通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞。
真題重組練
　（1）×　提示：濕熱滅菌會使血清中的有效成分失活。
（2）×　提示：會發(fā)生接觸抑制。
（3）√
（4）×　提示：骨髓瘤細胞和B淋巴細胞混合后，誘導融合后產(chǎn)生的細胞有雜交瘤細胞，也有同種核的融合細胞，需進一步篩選獲得。
（5）×　提示：去核時常使用顯微操作去核法對卵母細胞進行處理。
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第56講　動物細胞工程
高中總復習·生物
課程標準
1. 闡明動物細胞培養(yǎng)是從動物體獲得相關(guān)組織，分散成單個細胞后，在適
宜的培養(yǎng)條件下讓細胞生長和增殖的過程。動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程
的基礎(chǔ)。
2. 闡明動物細胞核移植一般是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細
胞中，并使重組細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的過程。
3. 闡明動物細胞融合是指通過物理、化學或生物學等手段，使兩個或多個
動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程。
4. 概述細胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。
5. 簡述干細胞在生物醫(yī)學工程中有廣泛的應(yīng)用價值。
1. 破考點·抓必備
2. 研真題·扣教材
3. 驗收效·提能力
目錄
Contents
01
破考點·抓必備
梳理歸納， 鞏固基本知識
考點一　動物細胞培養(yǎng)
1. 動物細胞培養(yǎng)的概念：從動物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細
胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術(shù)。
2. 地位：動物細胞工程常用的技術(shù)有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞核移植、動
物細胞融合等。其中 是動物細胞工程的基礎(chǔ)。
動物細胞培養(yǎng)　
3. 動物細胞培養(yǎng)的條件
c
c
c
c
c
4. 動物細胞培養(yǎng)的過程
（1）體外培養(yǎng)的動物細胞的類型
①能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖；
②需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長繁殖，而且還會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，
從而使細胞停止分裂增殖。
（2）過程
c
c
c
c
c
c
c
c
提醒 ①區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)
a.分瓶前，第一次用胰蛋白酶對動物組織進行處理后的培養(yǎng)是原代培養(yǎng)。
b.第二次用胰蛋白酶處理，使細胞從瓶壁上脫離下來，分瓶后的細胞培養(yǎng)
為傳代培養(yǎng)。
②細胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細胞很快就貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁
上，稱為細胞貼壁。細胞數(shù)目不斷增多，當貼壁細胞分裂生長到表面相互
接觸時，細胞通常會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。
5. 干細胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用
c
c
c
1. （選擇性必修3 P44正文）將動物細胞置于含有95％O2和5％CO2的混合
氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。 （　×　）
提示：將動物細胞置于含有95％空氣和5％CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中
進行培養(yǎng)。
2. （選擇性必修3 P44正文）動物細胞在培養(yǎng)過程中都具有細胞貼壁的現(xiàn)
象。 （　×　）
提示：體外培養(yǎng)的動物細胞可以分為兩大類：一類細胞能夠懸浮在培養(yǎng)液
中生長增殖，不具有細胞貼壁的現(xiàn)象；另一類則需要貼附于某些基質(zhì)表面
才能生長增殖，大多數(shù)細胞屬于這種類型。
×
×
3. （選擇性必修3 P44正文）體外培養(yǎng)的動物細胞一類能懸浮在培養(yǎng)液中
生長增殖，另一類需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖。 （　√　）
4. （選擇性必修3 P45正文）人們通常將動物組織經(jīng)蛋白酶處理后的初次
培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)，分瓶后的細胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。 （　√　）
5. （選擇性必修3 P46正文）干細胞存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血等多
種組織和器官中。 （　√　）
√
√
√
1. （2022·湖北高考6題）某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)
果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能的是（　　）
A. 實驗材料取自小鼠胚胎的腦組織
B. 為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封
C. 血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基
D. 所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性
√
解析：　小鼠胚胎腦組織中含有豐富的原代神經(jīng)元，細胞增殖能力強，
不會造成生長緩慢，A符合題意；培養(yǎng)瓶瓶口密封會使培養(yǎng)液中缺氧，影
響細胞有氧呼吸，造成供能不足，可能使細胞生長緩慢，B不符合題意；
高溫會使血清含有的促進細胞生長和增殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)失活，細胞生
存環(huán)境嚴重惡化，可能使細胞生長緩慢，C不符合題意；小鼠細胞內(nèi)環(huán)境
為弱堿性，所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性，使細胞生存環(huán)境惡劣，可能造成細
胞生長緩慢，D不符合題意。
2. 如圖為動物細胞培養(yǎng)過程中細胞的增殖曲線。下列敘述錯誤的是（　　）
A. 圖中A點進行的是細胞的原代培養(yǎng)
B. B點無需使用胰蛋白酶處理細胞
C. B點到C點過程中進行了多次傳代培養(yǎng)
D. D點以后的細胞具有無限增殖的特點
√
解析：　由圖分析可知，在B點時更換了培養(yǎng)基，因此A點時為原代培
養(yǎng)，A正確；B點時更換培養(yǎng)基，需要讓細胞從培養(yǎng)瓶上剝離，因此需要用
胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，B錯誤；BC段增殖代數(shù)較多，顯然進行了多
次傳代培養(yǎng)，C正確；由圖可知，隨增殖代數(shù)的增加，少數(shù)細胞突變，朝
著癌細胞方向發(fā)展，D點后可能具有無限增殖的特點，D正確。
歸納拓展
動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的比較
3. （2025·八省聯(lián)考晉陜青寧卷）我國科學家使用小分子化合物處理小鼠
體細胞，成功獲得誘導多能干細胞（iPS細胞），降低了通過導入原癌基
因c-Myc等基因制備iPS細胞的潛在成瘤風險。下列敘述正確的是（　　）
A. iPS細胞的潛在成瘤風險來自c-Myc基因抑制了細胞的分裂分化
B. 單基因遺傳病患者使用iPS細胞治療后，體內(nèi)不再攜帶致病基因
C. 人工制備的iPS細胞同時具備多向分化潛能和自我更新能力
D. 使用非親緣iPS細胞能解決干細胞移植中HLA造成的免疫排斥
√
解析：　原癌基因c-Myc等基因會促進細胞的分裂，A錯誤；單基因
遺傳病患者使用iPS細胞治療后，只是利用了iPS細胞分化出正常細胞
來替代病變細胞，但體內(nèi)依舊攜帶致病基因，B錯誤；iPS細胞為誘導
多能干細胞，同時具備多向分化潛能和自我更新能力，C正確；非親緣
iPS細胞HLA不同，使用非親緣iPS細胞不能解決干細胞移植中HLA造
成的免疫排斥，D錯誤。
考點二　動物細胞融合技術(shù)與單克隆抗體
1. 動物細胞融合技術(shù)
【教材拾遺】 （選擇性必修3 P48相關(guān)信息）滅活病毒誘導細胞融合的原
理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，
使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打
開，細胞發(fā)生融合。
2. 單克隆抗體及其應(yīng)用
（1）制備原理
①B淋巴細胞特點：一種B淋巴細胞只分泌 。
②骨髓瘤細胞特點：能在體外 。
③雜交瘤細胞的特點：既能 ，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的 。
一種特異性抗體　
大量增殖　
大量增殖　
特定抗體
（2）制備過程
提醒 ①與骨髓瘤細胞融合的是混雜細胞（脾臟細胞經(jīng)離心分離所得，成分
復雜，含活化的B細胞及少量漿細胞），單獨分離純化漿細胞技術(shù)復雜、
成本過高。
②兩次篩選的目的：
第一次是在誘導融合之后，利用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞。
第二次是對上述雜交瘤細胞進行篩選，利用96孔板培養(yǎng)，采用專一抗體檢
測的方法篩選出能產(chǎn)生所需特定抗體的雜交瘤細胞。
（3）單克隆抗體的特點和應(yīng)用
提醒 抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）的抗體主要發(fā)揮靶向運輸作用，通過特異
性結(jié)合靶細胞表面的抗原，將藥物輸送到靶細胞；藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如
殺傷靶細胞。
1. （選擇性必修3 P48正文）動物細胞融合的結(jié)果是形成單核的雜交細
胞，植物體細胞雜交的結(jié)果是得到雜種植株。 （　√　）
2. （選擇性必修3 P37、P48正文）滅活的病毒能促進動物細胞融合，但不
能促進植物細胞融合。 （　√　）
3. （選擇性必修3 P48～49圖2－16）將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行誘導
融合，培養(yǎng)液中融合后的細胞即雜交瘤細胞。 （　×　）
提示：將骨髓瘤細胞和B淋巴細胞混合，經(jīng)誘導后融合的細胞不都是雜交
瘤細胞，還有B細胞自身融合的細胞、骨髓瘤細胞自身融合的細胞等，需
要進行篩選。
√
√
×
4. （選擇性必修3 P48～49圖2－16）多種B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合篩
選后，還需經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，才能獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗
體的雜交瘤細胞。 （　√　）
5. （選擇性必修3 P50正文）單克隆抗體能準確地識別抗原的細微差異，
與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量制備。 （　√　）
6. （選擇性必修3 P50思考·討論）抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細胞
毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細胞的選
擇性殺傷。 （　√　）
√
√
√
1. （2025·山東壽光模擬）細胞合成DNA通常有2種途徑：第1種途徑是利用糖和氨基酸合成核苷酸，進而合成DNA；第2種途徑是通過HGPRT利用核苷酸的前體合成核苷酸，進而合成DNA。HAT培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基添加了次黃嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T），A可以阻斷DNA合成的第1種途徑，H和T則是第2條途徑中合成核苷酸的原料。HAT培養(yǎng)基可以用于單克隆抗體制備雜交瘤細胞的選擇，小鼠骨髓瘤細胞是一類HGPRT代謝缺陷型細胞。下列說法正確的是（　　）
A. 小鼠免疫B細胞和骨髓瘤細胞融合后，培養(yǎng)基上會有3種類型的細胞
B. HAT培養(yǎng)基中未融合的骨髓瘤細胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡
C. HAT培養(yǎng)基中未融合的免疫B細胞仍具有增殖能力而持續(xù)進行細胞分裂
D. HAT培養(yǎng)基中選擇出的雜交瘤細胞都能無限增殖且產(chǎn)生單克隆抗體
√
解析：　小鼠免疫B細胞和骨髓瘤細胞融合后，培養(yǎng)基上會有5種類型的細胞，但最終生存下來的只有雜交瘤細胞，A錯誤；由于小鼠骨髓瘤細胞是一類HGPRT代謝缺陷型細胞，因此骨髓瘤細胞合成DNA只有第1種途徑，但是A可以阻斷DNA合成的第1種途徑，所以HAT培養(yǎng)基中未融合的骨髓瘤細胞在A的阻遏下因不能合成DNA而死亡，B正確；免疫B細胞屬于高度分化的細胞，不再增殖，C錯誤；HAT培養(yǎng)基中選擇出的雜交瘤細胞都能無限增殖，但不是都能產(chǎn)生單克隆抗體，D錯誤。
2. （2024·江蘇南京高三聯(lián)考）細胞a和細胞b經(jīng)過細胞融合形成細胞d，如
圖所示，下列說法正確的是（　　）
A. 若d為雜交瘤細胞，則經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選后，可用于生
產(chǎn)單克隆抗體
B. 若d為動物細胞受精卵，則形成d的過程涉及細胞膜的選擇透過性
C. 若d形成無性雜種植株，則直接用PEG誘導a、b細胞融合為c
D. 若d形成無性雜種植株，則其涉及的變異類型屬于染色體變異
√
解析：　經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選得到的雜交瘤細胞經(jīng)多次單一抗體篩選才
可用于生產(chǎn)單克隆抗體，A錯誤；若d為動物細胞受精卵，形成受精卵
過程，涉及細胞膜的流動性，B錯誤；若d形成無性雜種植株，則采用
了細胞工程中的植物體細胞雜交技術(shù)，則將a、b兩植物細胞先經(jīng)纖維
素酶和果膠酶處理獲取原生質(zhì)體，再經(jīng)PEG處理后可得到d細胞，C錯
誤；若d形成無性雜種植株，則其涉及的變異類型屬于染色體變異中的
染色體數(shù)目變異，D正確。
題后歸納
植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較
3. （2025·江西臨川一中）抗體—藥物偶
聯(lián)物（ADC）是采用特定技術(shù)將具有生物
活性的小分子藥物連接到單克隆抗體上，
實現(xiàn)對腫瘤細胞精準的選擇性殺傷。ADC的結(jié)構(gòu)及其發(fā)揮作用的機理如圖，有關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A. ADC實現(xiàn)精準殺傷腫瘤細胞的基礎(chǔ)是抗體與抗原特異性結(jié)合
B. 該腫瘤細胞死亡是在ADC誘導下細胞自動死亡的過程
C. 將特定抗原注射到小鼠體內(nèi)，可以從小鼠血清中獲得單克隆抗體
D. 對特定抗原篩選出的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)可獲得單克隆抗體
√
解析：　由于單克隆抗體的特異性強，能特異性識別抗原，因此可以把
抗腫瘤細胞的單克隆抗體與藥物等相結(jié)合，借助單克隆抗體的定位導向作
用將藥物定向帶到腫瘤細胞，故ADC實現(xiàn)精準殺傷腫瘤細胞的基礎(chǔ)是抗體
與抗原特異性結(jié)合，A正確；ADC進入細胞后，溶酶體使其裂解，釋放藥
物，導致細胞凋亡，腫瘤細胞凋亡是細胞自動死亡的過程，B正確；將特
定抗原注射到小鼠體內(nèi)，可以從小鼠血清中獲得抗體，獲得的抗體可能有
多種，此時不是單克隆抗體，單克隆抗體是對特定抗原篩選出的雜交瘤細
胞進行克隆化培養(yǎng)而獲得的，該種細胞的特點是既能迅速大量增殖，又能
產(chǎn)生所需抗體，C錯誤，D正確。
考點三　動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物
1. 概念、原理及類型
c
c
c
c
【教材拾遺】 （選懌性必修3 P52正文）動物胚胎細胞分化程度低，表現(xiàn)
全能性相對容易；而動物體細胞分化程度高，表現(xiàn)全能性十分困難。因此
動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植。
2. 體細胞核移植的過程
c
c
c
c
c
【教材拾遺】 （1）（選擇性必修3 P52相關(guān)信息）減數(shù)分裂Ⅱ中期卵母細
胞中的“核”其實是紡錘體—染色體復合物。
（2）（選擇性必修3 P54相關(guān)信息）目前動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用
的去核方法是顯微操作法。也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化
學物質(zhì)處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核
或使其中的DNA變性。
提醒 細胞核移植技術(shù)中的三個注意點
①動物細胞核移植技術(shù)，體現(xiàn)了動物細胞核的全能性而非細胞的全能性。
②克隆屬于無性繁殖，產(chǎn)生新個體的性別、絕大多數(shù)性狀與供核親本
一致。
③核移植技術(shù)獲得的動物與供核動物性狀不完全相同的原因：a.克隆動物
細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)來自去核卵母細胞；b.性狀受環(huán)境的影響；c.在個體
發(fā)育過程中有可能發(fā)生基因突變。
3. 體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景及存在的問題
1. （選擇性必修3 P52正文）通過克隆技術(shù)形成重組細胞并發(fā)育成一個新
個體，體現(xiàn)了動物細胞的全能性。 （　×　）
提示：動物體細胞核移植的原理是動物體細胞核的全能性，而不是動物細
胞的全能性。
×
2. （選擇性必修3 P52相關(guān)信息）減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）卵母細胞中的
“核”其實是紡錘體—染色體復合物。 （　√　）
3. （選擇性必修3 P53圖2－18）重構(gòu)胚的激活可用Ca2＋載體、蛋白酶合成
抑制劑等方法。 （　√　）
4. （選擇性必修3 P53相關(guān)信息）重構(gòu)胚是天然形成的胚胎，具有發(fā)育成
完整個體的能力。 （　×　）
5. （選擇性必修3 P54相關(guān)信息）動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核
方法是顯微操作法。 （　√　）
√
√
×
√
6. （選擇性必修3 P52正文）克隆動物的性狀與供核動物完全相同。
（　×　）
提示：克隆動物細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)來自卵母細胞，與供核細胞不完全相
同，且克隆動物與供核動物的生活環(huán)境可能有差異，因此二者的性狀不完
全相同。
×
1. （2025·貴州高考適應(yīng)性考試）利用動物體細胞核移植技術(shù)可培育高產(chǎn)
奶牛，流程如圖所示。下列敘述錯誤的是（　　）
A. 犢牛W有母牛X細胞中的線粒體DNA
B. 犢牛W的遺傳性狀與母牛X相似度更高
C. 重構(gòu)胚的形成可采用電融合的方法
D. 細胞培養(yǎng)時需添加氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)
√
解析：　母牛X提供細胞質(zhì)，因此犢牛W有母牛X細胞中的線粒體DNA，
A正確；母牛Y的體細胞提供細胞核，細胞核是遺傳信息庫，因此犢牛W的
遺傳性狀與母牛Y相似度更高，B錯誤；可以采用電融合法促使兩個細胞融
合形成重構(gòu)胚，C正確；細胞培養(yǎng)時需添加氨基酸、糖類等營養(yǎng)物質(zhì)，以
滿足細胞正常生命活動的需要，D正確。
2. （2025·山東聊城一模）如圖是利用體細胞核移植來克隆高產(chǎn)奶牛的大
致流程示意圖，下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A. 圖中過程①常用顯微操作法去除紡錘體和染色體的復合物
B. 進行過程②前可用機械方法將動物組織分散成單個細胞
C. 圖中的重構(gòu)胚中含有卵母細胞和供體細胞的細胞質(zhì)
D. 進行過程④時需取樣滋養(yǎng)層細胞進行DNA分析以鑒定性別
√
解析：　在體細胞核移植過程中，去核實質(zhì)上是去除紡錘體—染色體復
合物，圖中過程①常用顯微操作法去除紡錘體和染色體的復合物，A正
確；將供體細胞注入去核卵母細胞中，構(gòu)成重構(gòu)胚，圖中的重構(gòu)胚中含有
卵母細胞和供體細胞的細胞質(zhì)，C正確；圖中的供體細胞核來自高產(chǎn)奶
牛，則胚胎移植后生出的犢牛性別為雌性，因此進行過程④時不需要取樣
滋養(yǎng)層細胞進行DNA分析以鑒定性別，D錯誤。
02
研真題·扣教材
探究分析， 培養(yǎng)核心技能
1. （2024·浙江1月選考13題）某動物細胞培養(yǎng)過程中，細胞貼壁生長至接
觸抑制時，需分裝培養(yǎng)，實驗操作過程如圖。
下列敘述錯誤的是（　　）
A. ①加消化液的目的是使細胞與瓶壁分離
B. ②加培養(yǎng)液的目的是促進細胞增殖
C. ③分裝時需調(diào)整到合適的細胞密度
D. 整個過程需要在無菌、無毒條件下進行
√
解析：　①加消化液的目的是使細胞與瓶壁分離，A正確；②加培養(yǎng)液，
多次加培養(yǎng)液先洗去殘留的消化酶，然后終止消化液的消化作用，并對細
胞加以稀釋，B錯誤；③分裝時需調(diào)整到合適的細胞密度，因為若密度過
大細胞之間仍存在接觸抑制，C正確；動物細胞培養(yǎng)需要無菌、無毒環(huán)
境，因此整個過程需要在無菌、無毒條件下進行，D正確。
溯源教材
（1）動物體內(nèi)的細胞維持正常生命活動、不斷增殖，是因為機體給這些
細胞提供了適宜的條件，包括充足的營養(yǎng)、穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境等。在體外培養(yǎng)
的動物細胞，也需要滿足類似條件。　（見選擇性必修3 P43正文）
（2）用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理一段時間，使組織分散成單個細胞。　
（見選擇性必修3 P44正文）
（3）在體外培養(yǎng)細胞時，必須保證環(huán)境是無菌、無毒的。　（見選擇性
必修3 P44正文）
（4）懸浮培養(yǎng)的細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營
養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻。貼壁生長時會發(fā)生接觸抑制。　（見選擇
性必修3 P44正文）
2. （2024·黑吉遼高考14題）從小鼠胚胎中分離獲取胚胎成纖維細胞進行
貼壁培養(yǎng)，在傳代后的不同時間點檢測細胞數(shù)目，結(jié)果如圖。下列敘述正
確的是（　　）
A. 傳代培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿需密封防止污染
B. 選取①的細胞進行傳代培養(yǎng)比②更合理
C. 直接用離心法收集細胞進行傳代培養(yǎng)
D. 細胞增長進入平臺期可能與細胞密度過大有關(guān)
√
解析： 　動物細胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細胞代謝所必需
的。傳代培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿不能密封，A錯誤。處于指數(shù)增長期的細胞形態(tài)
和生理特性相對穩(wěn)定，適合進行傳代培養(yǎng)，離體培養(yǎng)的細胞生命力比較脆
弱，需要適應(yīng)培養(yǎng)基的環(huán)境，傳代最好在細胞生長覆蓋瓶底80％～90％時
進行，故選取②的細胞進行傳代培養(yǎng)比①更合理，B錯誤。題干顯示從小
鼠胚胎中分離獲取胚胎成纖維細胞進行貼壁培養(yǎng)，貼壁細胞需要重新用胰
蛋白酶等處理，使之分散成單個細胞，然后再用離心法收集，C錯誤。懸
浮培養(yǎng)的細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺
乏等因素而分裂受阻，因此，細胞增長進入平臺期可能與細胞密度過大有
關(guān)，D正確。
3. （2024·江西高考16題）某病毒
顆粒表面有一特征性的大分子結(jié)構(gòu)蛋白S
（含有多個不同的抗原決定基，每一個抗
原決定基能夠刺激機體產(chǎn)生一種抗體）。
為了建立一種靈敏、高效檢測S蛋白的方
法，研究人員采用雜交瘤技術(shù)制備了抗-S單克隆抗體（如圖）。下列說法正確的是
（　　）
A. 利用胃蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細胞
B. 制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B是相同的單克隆抗體
C. 用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞可傳代培養(yǎng)，但不能凍存
D. 單克隆抗體A和單克隆抗體B都能夠特異性識別S蛋白
√
解析：　膠原蛋白酶可以催化分解細胞外的膠原蛋白，因此利用膠原蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細胞，A錯誤；由于蛋白S含有多個不同的抗原決定基，每一個抗原決定基能夠刺激機體產(chǎn)生一種抗體，單克隆抗體A和單克隆抗體B來自不同的雜交瘤細胞，因此制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B不是相同的單克隆抗體，B錯誤；用于生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞可傳代培養(yǎng)，也可以冷凍保存，C錯誤；單克隆抗體A和單克隆抗體B都來自篩選出的雜交瘤細胞，因此都能夠特異性識別S蛋白上的抗原決定簇，D正確。
4. （2024·江蘇高考11題）我國科學家利用人的體細胞制備多能干細胞，再用小分子TH34成功誘導衍生成胰島B細胞。下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A. 基因選擇性表達被誘導改變后，可使體細胞去分化成多能干細胞
B. 在小分子TH34誘導下，多能干細胞發(fā)生基因突變，獲得胰島素基因
C. 衍生的胰島B細胞在葡萄糖的誘導下能表達胰島素，才可用于移植治療
糖尿病
D. 若衍生的胰島B細胞中凋亡基因能正常表達，細胞會發(fā)生程序性死亡
√
解析：　體細胞可以通過特定的因子導入和培養(yǎng)條件，基因的調(diào)控和表
達模式的改變，使得原本專一功能的體細胞去分化成為多能干細胞，即基
因選擇性表達被誘導改變后，可使體細胞去分化成多能干細胞，A正確；
小分子藥物通常是通過調(diào)節(jié)現(xiàn)有的生物通路和基因表達來實現(xiàn)其功能，而
胰島素基因在人體所有細胞中都存在，但只有在胰島細胞中才會表達，所
以多能干細胞在誘導分化的過程中不會突然發(fā)生基因突變獲得胰島素基
因，B錯誤；胰島B細胞受到較高的血糖濃度的刺激分泌胰島素，胰島素降
低血糖濃度，所以衍生的胰島B細胞需在葡萄糖的誘導下成功表達胰島
素，以確保衍生的胰島B細胞能夠正常發(fā)揮功能，才可用于移植治療糖尿
病，C正確；細胞凋亡的實質(zhì)就是一種由遺傳機制決定的細胞的程序性死亡，衍生的胰島B細胞中凋亡基因的正常表達會導致衍生的胰島B細胞發(fā)生程序性死亡，D正確。
5. （2023·湖北高考22題，節(jié)選）某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴重。我
國學者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該
病毒，其主要技術(shù)路線如圖所示。
（1）與小鼠骨髓瘤細胞融合前，已免疫的脾細胞（含漿細胞）
（填“需要”或“不需要”）通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量；添加脂溶
性物質(zhì)PEG可促進細胞融合，該過程中PEG對細胞膜的作用是
。
解析： 一般認為，已免疫的脾細胞（含漿細胞）中已含足夠數(shù)量的能產(chǎn)生特異性抗體的效應(yīng)B細胞。聚乙二醇（PEG）分子能改變膜結(jié)構(gòu)，使兩細胞接觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。
不需
要
使細胞接
觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合
回答下列問題：
（2）在雜交瘤細胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)
基），該培養(yǎng)基對 和
生長具有抑制作用。
解析： 淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合后，有的細胞未融合，有的細胞已融合；融合細胞中有的是具有同種核的細胞，有的是具有不同種核的細胞（雜交瘤細胞）。使用選擇培養(yǎng)基的目的是篩選出能分泌特定抗體的雜交瘤細胞；在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞的生長受到抑制，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。
未融合的（親本）細胞
融合的具有同種核的
細胞
（3）單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，其目的
是 。
解析： 將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交的目的是通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞。
通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞
（1）體外培養(yǎng)卵母細胞時通常加入濕熱滅菌后的血清。　（2024·江蘇高
考） （　×　）
提示：濕熱滅菌會使血清中的有效成分失活。
（2）營養(yǎng)供應(yīng)充足時，傳代培養(yǎng)的胚胎干細胞不會發(fā)生接觸抑制。　
（2023·海南高考） （　×　）
提示：會發(fā)生接觸抑制。
（3）培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳。　（2022·江蘇高
考） （　√　）
×
×
√
（4）將骨髓瘤細胞和B淋巴細胞混合后融合的細胞即為雜交瘤細胞。　
（2021·江蘇高考） （　×　）
提示：骨髓瘤細胞和B淋巴細胞混合后，誘導融合后產(chǎn)生的細胞有雜交瘤
細胞，也有同種核的融合細胞，需進一步篩選獲得。
（5）去核時常使用顯微操作去核法對受精卵進行處理。　（2021·遼寧高
考） （　×　）
提示：去核時常使用顯微操作去核法對卵母細胞進行處理。
×
×
03
驗收效·提能力
跟蹤訓練，檢驗學習效果
一、選擇題
1. （2025·山東泰安質(zhì)檢）如圖為實驗小鼠皮膚組織進行細胞培養(yǎng)的過
程，下列敘述正確的是（　　）
A. 動物細胞培養(yǎng)體現(xiàn)了動物細胞的全能性
B. 乙過程對皮膚組織可用胃蛋白酶處理
C. 丙過程為原代培養(yǎng)，遺傳物質(zhì)一定不變
D. 丁過程中某些細胞可能會無限增殖
1
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7
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9
√
解析：　動物細胞培養(yǎng)沒有獲得動物個體，不能體現(xiàn)動物細胞的全能
性，A錯誤；乙過程對皮膚組織可用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理，B錯
誤；丙過程屬于原代培養(yǎng)，此過程的細胞大部分能保持正常的二倍體核
型，有些細胞的遺傳物質(zhì)也可能發(fā)生改變，C錯誤；丁過程屬于傳代培
養(yǎng)，此過程少數(shù)細胞會發(fā)生突變，朝著癌細胞方向發(fā)展，可能會無限增
殖，D正確。
1
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9
2. （2025·湖北師大附中高三測評）將小鼠細胞與人細胞融合后獲得
“人—鼠融合細胞”，發(fā)現(xiàn)人的染色體會隨機丟失，最終只保留一條或幾
條染色體。下列敘述正確的是（　　）
A. 小鼠細胞與人細胞融合表明細胞膜具有信息識別的功能
B. 可利用PCR檢測人的基因表達產(chǎn)物
C. 可通過檢測“人—鼠融合細胞”的基因表達產(chǎn)物，初步定位人基因位于
幾號染色體上
D. “人—鼠融合細胞”的獲得突破了人和小鼠之間的生殖隔離
√
1
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3
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9
解析：　小鼠細胞與人細胞融合，表明細胞膜具有流動性，A錯誤；基因
表達的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，不能用PCR檢測，B錯誤；融合實驗中，人染色體
會隨機丟失，最終只保留一條或幾條染色體，可通過檢測“人—鼠融合細
胞”的基因表達產(chǎn)物，初步定位人基因位于幾號染色體上，C正確；人—
鼠融合細胞是通過細胞融合技術(shù)實現(xiàn)的，但并不能獲得可育后代，說明人
和小鼠之間依然存在生殖隔離，D錯誤。
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9
3. （2025·山東濟南高三開學考）動物體細胞核移植技術(shù)的原理是動物細
胞核具有全能性。下列說法正確的是（　　）
A. 為提高成功率，將卵母細胞培養(yǎng)到MⅡ期，在盡可能短的時間內(nèi)去除紡
錘體—染色體復合物并注入體細胞
B. 需用電刺激、Ca2＋載體和聚乙二醇等激活重構(gòu)胚，使其完成細胞分裂
和發(fā)育進程
C. 胚胎發(fā)育到桑葚胚階段，胚胎內(nèi)部開始出現(xiàn)含有液體的腔
D. 早期胚胎培養(yǎng)需要無菌的O2和CO2，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主
要作用是調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH
√
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解析：　卵母細胞培養(yǎng)到MⅡ期，此時細胞內(nèi)具有促進全能性表達的
物質(zhì)，在盡可能短的時間內(nèi)去除紡錘體—染色體復合物，即除去受體
細胞的遺傳物質(zhì)，再注入體細胞，形成融合細胞，A正確；用物理或化
學方法（如電刺激、Ca2＋載體、乙醇、蛋白酶合成抑制劑等）激活重
構(gòu)胚，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程，B錯誤；胚胎發(fā)育到囊胚階段，
胚胎內(nèi)部開始出現(xiàn)含有液體的腔，C錯誤；早期胚胎培養(yǎng)需要注入95％
的無菌空氣和5％的CO2，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是
調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH，D錯誤。
1
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9
4. （2025·廣東廣州高三一模）誘導多能干細胞（iPS細胞）是通過基因轉(zhuǎn)
染技術(shù)將某些誘導基因?qū)雱游锘蛉说捏w細胞，使體細胞直接重構(gòu)成為胚
胎干細胞（ES細胞）細胞樣的多潛能細胞。如圖表示科學家利用小鼠皮膚
細胞培養(yǎng)出多種細胞的過程，下列敘述錯誤的是（　　）
A. iPS細胞在細胞形態(tài)、生長特性等方面與ES細胞相似
B. 過程①中細胞內(nèi)發(fā)生了基因重組
C. 過程②中細胞內(nèi)某些基因處于關(guān)閉狀態(tài)
D. 獲得iPS細胞需要使用卵細胞或者胚胎細胞
√
1
2
3
4
5
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7
8
9
解析：　iPS細胞為誘導多能干細胞，在細胞形態(tài)、生長特性等方面與ES
細胞相似，A正確；由題圖可知，過程①是將誘導基因?qū)胄∈笃つw細胞
中，該過程中細胞內(nèi)發(fā)生了基因重組，B正確；過程②表示細胞分化，其
實質(zhì)是基因的選擇性表達，所以細胞內(nèi)某些基因處于關(guān)閉狀態(tài)，C正確；
由題意可知，誘導多能干細胞（iPS細胞）是通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將某些誘導
基因?qū)雱游锘蛉说捏w細胞，使體細胞直接重構(gòu)成為胚胎干細胞（ES細
胞）細胞樣的多潛能細胞，D錯誤。
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5. （2025·北京西城區(qū)一模）將細胞毒素類藥物與單克隆抗體結(jié)合形成抗
體—藥物偶聯(lián)物（ADC），可實現(xiàn)對腫瘤細胞的選擇性殺傷，過程如圖所
示。下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A. 體外培養(yǎng)單個漿細胞可持續(xù)大量獲得抗體
B. ADC通過胞吞作用進入腫瘤細胞
C. ADC在溶酶體中被裂解后釋放出藥物
D. 選擇性殺傷腫瘤細胞利用了單克隆抗體特異性強的特點
√
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解析： 　漿細胞為高度分化的細胞，無分裂能力，故體外培養(yǎng)單個漿細
胞不能持續(xù)大量獲得抗體，A錯誤；由題圖可知，ADC與腫瘤細胞細胞膜
表面的受體識別結(jié)合后，腫瘤細胞細胞膜內(nèi)陷形成的囊泡包裹著ADC進入
細胞內(nèi)，故ADC（大分子）是通過胞吞作用進入腫瘤細胞的，B正確；由
題圖可知，包裹著ADC的囊泡會與溶酶體結(jié)合，ADC在溶酶體中被分解后
釋放出藥物，殺傷腫瘤細胞，使其死亡，C正確；單克隆抗體能準確地識
別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，選擇性殺傷腫瘤細胞就
是利用了單克隆抗體特異性強的特點，D正確。
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6. （2025·廣西南寧武鳴高級中學高三開學考）“中中”和“華華”是我
國科學家培育出的世界首例體細胞克隆猴，培育過程如圖所示。下列有關(guān)
分析正確的是（　　）
A. “中中”和“華華”的特征與B猴幾乎相同
B. 體細胞克隆形成新個體說明細胞具有全能性
C. 重組細胞中核的融合依賴于生物膜的流動性
D. 克隆猴形成過程中存在細胞分裂、分化與衰老
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解析：　“中中”“華華”的細胞核遺傳物質(zhì)來自A猴，因此它們和A猴
的遺傳特征幾乎相同，A錯誤；體細胞克隆猴的培育證明了動物細胞的細
胞核具有全能性，但不能說明細胞具有全能性，B錯誤；重組細胞中細胞
核來自A猴，不存在核的融合，C錯誤；重組細胞發(fā)育形成克隆猴的過程
中，存在細胞分裂、分化與衰老，D正確。
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7. （2025·江西上進高中聯(lián)盟高三
聯(lián)考）“豬繁殖與呼吸綜合征”是
一種由病毒 PRRSV 引發(fā)的傳染病。
科學家制備出 PRRSV－GP3 蛋白的單克隆抗體，可對該病進行診斷和治療，制備過程如圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A. 給小鼠注射GP3蛋白的目的是獲得抗GP3蛋白抗體
B. 細胞乙、丙、丁的培養(yǎng)過程中均需要適宜的溫度和氣體環(huán)境等條件
C. 第2次篩選的目的是篩選出能產(chǎn)生抗GP3蛋白抗體的雜交瘤細胞
D. 擴大培養(yǎng)通常采用的方法是將細胞丁注射到小鼠腹腔內(nèi)或在體外大規(guī)模培養(yǎng)
√
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解析：給小鼠注射GP3蛋白的目的是獲得產(chǎn)生抗GP3蛋白抗體的B細胞，A錯誤。
8. 在體細胞克隆猴培育過程中，為調(diào)節(jié)相
關(guān)基因的表達，提高胚胎的發(fā)育率和妊娠
率，研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的
mRNA注入了重構(gòu)胚，同時用組蛋白脫乙酰
酶抑制劑（TSA）處理，具體流程如圖所
示。下列相關(guān)敘述錯誤的是（　　）
A. 常用顯微操作法去除由核膜包被的卵母細胞的細胞核
B. 去核時使用的梯度離心、紫外光照射和化學物質(zhì)處理等方法都沒有穿透
卵母細胞透明帶
C. 滅活的仙臺病毒可使細胞膜上的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)分子重新排布，利于融合
D. 組蛋白去甲基化和乙酰化的表觀遺傳修飾有利于重構(gòu)胚的分裂和發(fā)育
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解析：　常用顯微操作法去除卵母細胞的細胞核，而此處的細胞核是紡錘體—染色體復合物，不具有核膜，A錯誤；目前動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法，也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質(zhì)處理等方法，這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性，B正確；滅活的仙臺病毒可使細胞膜上的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，C正確；研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重構(gòu)胚，同時用組蛋白脫乙酰酶抑制劑TSA處理，有利于重構(gòu)胚的分裂和發(fā)育，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程，D正確。
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二、非選擇題
9. （2025·廣東廣州模擬）腸道病
毒71型（EV71）為單股正鏈RNA
病毒，是引起手足口病的主要病原
體之一，在EV71中，病毒結(jié)構(gòu)蛋白
1（VP1）為主要的中和抗原（中和
抗原與中和抗體結(jié)合后能阻止病原
體入侵與增殖）。圖1為利用重組大腸桿菌表達VP1蛋白，并以VP1蛋白為抗原制備單克隆抗體的過程。回答以下問題：
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（1）重組大腸桿菌中，由EV71病毒的RNA構(gòu)建 cDNA需經(jīng)過
過程，隨后cDNA通過PCR技術(shù)擴增。將目的基因?qū)氪竽c桿菌需要構(gòu)建
表達載體，常用的表達載體是 。
解析： 以RNA為模板構(gòu)建cDNA需要經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄過程。將目的基因?qū)?br/>入大腸桿菌時需要構(gòu)建表達載體，常用的表達載體是質(zhì)粒。
（2）在小鼠腹腔內(nèi)注射VP1蛋白進行免疫，在35天獲取B淋巴細胞懸液進
行融合。在獲取B淋巴細胞前3天需在腹腔再次注射VP1蛋白，這樣做的原
因是 。
解析： 在獲取B淋巴細胞前3天再次注射VP1蛋白，可以通過二次免疫
使機體產(chǎn)生更多的B淋巴細胞。
逆轉(zhuǎn)錄
質(zhì)粒
二次免疫后，產(chǎn)生的B淋巴細胞更多（合理即可）
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（3）缺失HPRT基因的細胞無法在HAT培養(yǎng)基中生存，HAT培養(yǎng)基可以篩
選出骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合的雜交瘤細胞，其他細胞都會死亡。據(jù)
此推測，在單克隆抗體制備過程中缺失HPRT基因的細胞是
（填“大腸桿菌”“B淋巴細胞”或“骨髓瘤細胞”）。
解析： 由于缺失HPRT基因的細胞無法在HAT培養(yǎng)基中生存，HAT培
養(yǎng)基可以篩選出骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合的雜交瘤細胞，其他細胞都
會死亡，B淋巴細胞的存活時間較短，不需要特別篩選，但正常情況下骨
髓瘤細胞能無限增殖，推知缺失HPRT基因的細胞是骨髓瘤細胞。
骨髓瘤細
胞
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（4）在雜交瘤細胞篩選培養(yǎng)過程中需在培養(yǎng)基中添加胎牛血清，并置于
37 ℃、50 mL/L CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱中CO2的作用是 。
解析： 培養(yǎng)箱中CO2的作用是維持培養(yǎng)液pH穩(wěn)定。
維持pH穩(wěn)定
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（5）如圖是研究人員對不同單克隆抗體（A/B）的檢測結(jié)果。哪一種單克
隆抗體適合進入下一步研制？ ，理由是
。
單克隆抗體A
單克隆抗體A能
特異性地識別病毒且中和效果好
解析：由題圖2可知，使用單克隆抗體A和單克隆抗體B均能特異性識
別EV71；由題圖3可知，單克隆抗體A的中和效果更好。
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（6）該單克隆抗體成功制備后，對于防治手足口病有什么作用？
。
解析： 該單克隆抗體因其具有很高的特異性，能夠快速檢測是否感
染，有效治療患者。
快速檢測是否感染，有效治療患者
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