資源簡介 (共28張PPT)第3章基因工程第2節基因工程的基本操作程序人教版高中生物學習目標闡述基因工程的原理和基本操作及PCR的基本操作。1.文化基礎:明確基因工程的操作步驟及PCR擴增技術的應用。2.自主發展:嘗試進行PCR擴增獲取產品。3.社會參與:利用基因工程技術和方法獲得人類生產或生活所需產品。自上個世紀90年代以來,由于棉鈴蟲在我國大部分棉區持續性大發生或爆發,給棉花生產帶來了巨大的威脅,棉農談“蟲”色變,僅1992年一年即造成直接經濟損失60多億元,間接損失超過100億元,對整個國民經濟發展造成了很大影響。同時由于棉鈴蟲的大爆發,防蟲治蟲使棉花的生產成本增加,植棉的比較效益降低。1997年,我國政府首次批準商業化種植轉基因抗蟲棉。到2015年,我國己育成轉基因抗蟲棉新品種100多個,減少農藥用量40萬噸,增收節支社會經濟效益450億元。閱讀P76—83,回答下列問題2.基因工程的基本操作程序主要包括哪幾個步驟?3.基因工程操作的每一步涉及的技術和方法有哪些?1.轉基因抗蟲棉抗蟲的機制是什么嗎?培育轉基因抗蟲棉一般需要哪些步驟?培育轉基因抗蟲棉主要需要四個步驟:_________________________、基因表達載體的構建、_________________________________、目的基因的檢測與鑒定。目的基因的篩選與獲取將目的基因導人受體細胞一、目的基因的篩選與獲取1.目的基因(1)概念:用于改變___________________或獲得____________________等的基因。受體細胞性狀預期表達產物(2)實例:培養轉基因抗蟲棉用到的目的基因是____________________。Bt抗蟲蛋白基因2.篩選合適的目的基因(1)較為有效的方法:從相關的__________________和________________的基因中進行篩選。(2)實例:在培育轉基因抗蟲棉之前,科學家不僅掌握了Bt基因的序列信息,也對Bt基因的表達產物___________________有了較為深入的了解。(3)認識基因結構和功能的技術方法:____________________技術、遺傳序列數據庫、_______________________工具。已知結構功能清晰Bt抗蟲蛋白DNA測序序列比對3.利用PCR獲取和擴增目的基因(1)PCR的含義:PCR是________________________的縮寫,它是一項根據________________________的原理,在體外提供_________________的各種組分與反應條件,對______________________________進行大量復制的技術。聚合酶鏈式反應DNA半保留復制參與DNA復制目的基因的核苷酸序列(2)條件:DNA模板、分別與兩條模板鏈結合的2種______________、四種____________________、______________________________。引物脫氧核苷酸耐高溫的DNA聚合酶引物是一小段能與________________的一段堿基序列________________的短單鏈核酸。用于PCR的引物長度通常為20~30個核苷酸。DNA母鏈互補配對(3)PCR反應的過程①變性:溫度上升到90℃以上,目的基因DNA_______________________________。受熱變性后解為單鏈DNA模板待擴增的DNA模板PCR擴增儀(900C以上)引物引物與兩條單鏈DNA結合PCR擴增儀(500C左右)②復性:溫度下降到50℃左右時,_________________通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合。兩種引物PCR擴增儀(720C左右)耐高溫的DNA聚合酶③延伸:溫度上升到72℃左右時,溶液中_______________________在耐高溫的_______________________的作用下加到引物的________端合成子鏈。四種脫氧核苷酸DNA聚合酶3′④重復循環多次。第一輪循環的產物作為______________反應的____________,經過變性、復性和延伸三步產生第二輪循環的產物。第二輪循環的產物作為______________反應的____________,經過變性、復性和延伸三步產生第三輪循環的產物。⑤結果:每次循環后目的基因的量增加一倍,即成_____________形式擴增(約為2n)。指數第二輪模板第三輪模板(4)PCR技術與生物體內DNA復制的比較比較項目PCR技術DNA復制區別解旋方式場所酶DNA在高溫作用下變性解旋解旋酶催化細胞外(在PCR擴增儀內)細胞內(主要在細胞核內)耐高溫的的DNA聚合酶(Taq聚合酶)DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等區別溫度條件合成的對象聯系需控制溫度,在較高溫度下進行細胞內溫和條件DNA片段或基因DNA分子①模板:均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進行物質合成②原料:均為四種脫氧核苷酸③酶:均需要DNA聚合酶進行催化④引物:均需要引物,使DNA聚合酶從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸(5)思考與討論用PCR可以擴增mRNA嗎?提示:mRNA不可以直接擴增,需要將它逆轉錄成cDNA再進行擴增。由mRNA逆轉錄形成cDNA的過程是:第一步,逆轉錄酶以RNA為模板合成一條與RNA互補的DNA鏈,形成RNA-DNA雜交分子;第二步,核酸酶H降解RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈,使之變成單鏈DNA;第三步,以單鏈DNA為模板,在DNA聚合酶的作用下合成另一條互補的DNA鏈,形成雙鏈DNA分子。二.基因表達載體的構建1.基因表達載體是載體的一種,除______________、標記基因外,還必須有啟動子、終止子等。2.啟動子是一段有特殊序列結構的_______________,位于基因的上游,緊挨轉錄的起始位點,它是RNA聚合酶識別和結合的部位,有了它才能驅動基因轉錄出mRNA,最終表達出人類需要的蛋白質。3.終止子相當于一盞紅色信號燈,使轉錄在所需要的地方停下來,它位于基因的下游,也是一段有特殊序列結構的_________________。目的基因DNA片段DNA片段首先用一定的__________________切割載體,使它出現一個切口,然后用_______________限制酶或_______________________的限制酶切割目的基因的DNA片段,再利用______________________將目的基因片段拼接到載體的切口處。限制酶同種能產生相同末端DNA連接酶限制酶切割位點限制酶限制酶DNA連接酶三、將目的基因導入受體細胞1.轉化:目的基因進入受體細胞內,并在受體細胞內___________和_________________的過程。維持穩定表達2.目的基因導入受體細胞的方法將生物的所有DNA直接導入受體細胞不是更簡便嗎?如果這么做,效果會怎樣?思考與討論提示:有人采用總DNA注射法進行遺傳轉化,即將一個生物的總DNA提取出來,通進注射或花粉管通道法導人受體植物,沒有進行基因表達載體的構建。這種方法針對性差,完全靠運氣,也無法確定哪些基因導人了受體植物。受體細胞方法說明特點植物細胞農桿菌轉化法花粉管通道法將目的基因插入農桿菌Ti質粒的T?DNA上→轉入農桿菌→用農桿菌侵染植物細胞→將目的基因整合到植物細胞染色體的DNA上→目的基因表達經濟、有效,適用于雙子葉植物和裸子植物,尤其適用于雙子葉植物在植物受粉后,花粉形成的花粉管還未愈合前,剪去柱頭→滴加DNA(含目的基因),使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞→目的基因表達簡便、經濟,我國科學家獨創的一種方法動物細胞微生物細胞顯微注射技術Ca2+處理法(感受態細胞法)將含有目的基因的表達載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→注射了目的基因的受精卵,經胚胎早期培養后,移植到雌性動物的輸卵管或子宮內→獲得具有新性狀的動物將目的基因導入動物細胞最為有效的方法用Ca2+處理微生物細胞→感受態細胞→將基因表達載體與感受態細胞混合→在一定溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子簡便、經濟、有效四、目的基因的檢測與鑒定1.分子水平檢測(1)通過_________________等技術檢測受體細胞染色體DNA上是否插入了目的基因或檢測目的基因是否轉錄出mRNA。PCR(2)從轉基因生物中提取蛋白質用相應的抗體進行__________________雜交,檢測目的基因是否翻譯成了蛋白質。抗原—抗體2.個體水平鑒定包括抗蟲、抗病的接種實驗,以確定是否有抗性及抗性程度。基因工程產品需要與天然產品活性進行比較等。轉基因抗蟲棉在世界范圍內被廣泛種植,有效控制了棉鈴蟲的種群數量,顯著減少了農藥的用量。面對棉鈴蟲的危害,有了抗蟲棉是否就可以一勞永逸、高枕無憂呢?根據棉鈴蟲對傳統農藥產生抗性的發展歷史,科研人員推測棉鈴蟲存在對Bt抗蟲蛋白產生抗性的可能。請你查閱資料,了解以下問題。1.在實際種植過程中,棉鈴蟲是否對轉Bt基因的抗蟲棉產生了嚴重的抗性?證據是什么?2.科研工作者在沒有發現棉鈴蟲出現抗性之前,就應該想辦法應對。他們想出的延竣棉鈴蟲對Bt抗蟲蛋白產生抗性的措施有哪些?這些措施的原理是什么?有效嗎?到社會中去提示:1.這是一個開放性的問題,需要學生在找資料來回答。隨著田向監測數據的更新及新的科研論文發表,每年學生獲得的證據是不樣的。例如,科研人員對長江流城種植的轉基因抗蟲棉進行了監測2011年的數據顯示,大部分轉基因抗蟲棉品種的抗蟲性屬于中抗及高抗水平;2013年的數據表明,如果棉田周圍存在大量天然庇護所,靶標害蟲格鈴蟲、紅鈴蟲等井未對轉Bt基因的抗蟲棉產生明顯抗性。在我國、澳大利亞、印度連國的多個實驗室中,通過毒素的連續抗性篩選,已經培育出多個高抗水平的轉基因抗蟲棉品種。教師要注意引導學生搜集科學、可靠的證據,如科研論文、權威的官方報道等。2.科研人員想出的延緩棉鈴蟲對Bt抗蟲蛋白產生抗性的措施有很多,主要可以分為以下幾個方面。(1)基因策略;(2)田間策略;(3)國家宏觀調控策略。五、探究與實踐DNA片段的擴增及電泳鑒定結果分析與評價提示:可以通過在紫外燈下直接觀察DNA條帶的分布及粗細程度來評價擴增的結果。1.你是否成功擴增出DNA片段?判斷的依據是什么?2.你進行電泳鑒定的結果是幾條條帶?如果不止一條條帶,請分析產生這個結果的可能原因。提示:如果擴增不成功,可能的原因有:漏加了PCR的反應成分,各反應成分的用量不當,PCR程序設置不當等。如果擴增結果不止一條條帶,可能的原因有:引物設計不合理,它們與非目的序列有同源性或容易聚合形成二聚體;退火溫度過低;DNA聚合酶的質量不好等。六、總結和練習1.下列關于目的基因導入受體細胞的描述,不正確的是( )A.培育“黃金大米”可用花粉管通道法導入目的基因B.顯微注射技術是轉基因動物中采用最多的方法C.目的基因導入大腸桿菌最常用的方法是Ca2+處理法D.農桿菌轉化法是將目的基因導入植物細胞最常用的方法提示:水稻的花很小,不適合用花粉管通道法導入目的基因,A錯誤;將目的基因導入動物細胞常用顯微注射法,B正確;將目的基因導入微生物細胞最常用的方法是用Ca2+處理大腸桿菌,使其處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的狀態,C正確;將目的基因導入植物細胞最常用的方法是農桿菌轉化法,此外還有基因槍法和花粉管通道法,D正確。A2.農桿菌侵染植物細胞后,能將Ti質粒上的T?DNA插入植物基因組中。圖示為利用農桿菌培育轉基因植物的基本流程,請據圖回答:(1)剪除Ti質粒的某些片段、替換復制原點O與添加抗生素的抗性基因T的過程①中,需用多種限制酶處理,原因是__________________________________________,需用_________________“縫合”雙鏈DNA片段的平末端。(2)目的基因是指______________________。由過程②形成的基因表達載體中,目的基因的上游具有_____________,它是________________識別和結合的部位。不同的限制酶識別并切割不同的堿基序列T4DNA連接酶編碼蛋白質的基因啟動子RNA聚合酶(3)過程③常用________處理使農桿菌成為感受態細胞。抗生素抗性基因T的作用是__________________________________________________。(4)可通過________技術檢測試管苗的染色體DNA上是否插入了目的基因。Ca2+用于鑒定和篩選導入了基因表達載體的農桿菌PCR提示:(1)Ti質粒具多種限制酶切割位點,不同的限制酶識別并切割不同的堿基序列。連接平末端應選用T4DNA連接酶。(2)目的基因主要是指編碼蛋白質的基因。目的基因的首端具有啟動子,以便于RNA聚合酶識別和結合。(3)過程③常采用Ca2+(CaCl2溶液)處理農桿菌,以增大農桿菌細胞壁的通透性。抗生素抗性基因T用于檢測受體細胞中是否含有基因表達載體。(4)檢測農桿菌和愈傷組織細胞中是否有目的基因常采用PCR技術。https://www.21cnjy.com/help/help_extract.php中小學教育資源及組卷應用平臺《基因工程的基本操作程序》教學設計課題第3章基因工程第2節基因工程的基本操作程序單元第3章學科生物年級高二學習目標與核心素養闡述基因工程的原理和基本操作。1.文化基礎:明確基因工程的操作步驟及PCR擴增技術的應用。2.自主發展:嘗試進行PCR擴增獲取產品。3.社會參與:利用基因工程技術和方法獲得人類生產或生活所需產品。重點基因工程的原理和基本操作及PCR擴增的應用難點PCR獲得和擴增目的基因。教學過程教學環節教師活動學生活動設計意圖導入新課從社會中來展示圖片自上個世紀90年代以來,由于棉鈴蟲在我國大部分棉區持續性大發生或爆發,給棉花生產帶來了巨大的威脅,棉農談“蟲”色變,僅1992年一年即造成直接經濟損失60多億元,間接損失超過100億元,對整個國民經濟發展造成了很大影響。同時由于棉鈴蟲的大爆發,防蟲治蟲使棉花的生產成本增加,植棉的比較效益降低。1997年,我國政府首次批準商業化種植轉基因抗蟲棉。到2015年,我國已育成轉基因抗蟲棉新品種100多個,減少農藥用量40萬噸,增收節支社會經濟效益450億元。課前查閱資料,展示欣賞棉鈴蟲圖片,了解轉基因棉花研究歷史和經濟價值。聯系生活實例,激發學生的學習興趣。講授新課閱讀P76—77,回答下列問題1.轉基因抗蟲棉抗蟲的機制是什么嗎?培育轉基因抗蟲棉一般需要哪些步驟?2.基因工程的基本操作程序主要包括哪幾個步驟?3.基因工程操作的每一步涉及的技術和方法有哪些?一、目的基因的篩選與獲取1.目的基因(1)概念:用于改變受體細胞性狀或獲得預期表達產物等的基因。(2)實例:培養轉基因抗蟲棉用到的目的基因是Bt抗蟲蛋白基因。2.篩選合適的目的基因(1)較為有效的方法:從相關的已知結構和功能清晰的基因中進行篩選。(2)實例:在培育轉基因抗蟲棉之前,科學家不僅掌握了Bt基因的序列信息,也對Bt基因的表達產物——Bt抗蟲蛋白有了較為深入地了解。(3)認識基因結構和功能的技術方法:DNA測序技術、遺傳序列數據庫、序列比對工具。3.利用PCR獲取和擴增目的基因(1)PCR的含義:PCR是聚合酶鏈式反應的縮寫,它是一項根據DNA半保留復制的原理,在體外提供參與DNA復制的各種組分與反應條件,對目的基因的核苷酸序列進行大量復制的技術。(2)條件:DNA模板、分別與兩條模板鏈結合的2種引物、四種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶。(3)過程:①變性:溫度上升到90℃以上,目的基因DNA受熱變性后解為單鏈。②復性:溫度下降到50℃左右時,兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合。③延伸:溫度上升到72℃左右時,溶液中四種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下加到引物的3′端合成子鏈。④重復循環多次。結果:每次循環后目的基因的量增加一倍,即成指數形式擴增(約為2n)。(2)PCR技術與生物體內DNA復制的比較比較項目PCR技術DNA復制區別解旋方式DNA在高溫作用下變性解旋解旋酶催化場所細胞外(在PCR擴增儀內)細胞內(主要在細胞核內)酶耐高溫的DNA聚合酶(Taq聚合酶)DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等溫度條件需控制溫度,在較高溫度下進行細胞內溫和條件合成的對象DNA片段或基因DNA分子聯系①模板:均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進行物質合成②原料:均為四種脫氧核苷酸③酶:均需要DNA聚合酶進行催化④引物:均需要引物,使DNA聚合酶從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸二.基因表達載體的構建首先用一定的限制酶切割載體,使它出現一個切口,然后用同種限制酶或能產生相同末端的限制酶切割目的基因的DNA片段,再利用DNA連接酶將目的基因片段拼接到載體的切口處。思考與討論將生物的所有DNA直接導入受體細胞不是更簡便嗎?如果這么做,效果會怎樣?提示:有人采用總DNA注射法進行遺傳轉化,即將一個生物的總DNA提取出來,通進注射或花粉管通道法導人受體植物,沒有進行基因表達載體的構建。這種方法針對性差,完全靠運氣,也無法確定哪些基因導人了受體植物。三、將目的基因導入受體細胞1.轉化:目的基因進入受體細胞內,并在受體細胞內維持穩定和表達的過程。2.目的基因導入受體細胞的方法目的基因導入受體細胞的方法受體細胞方法說明特點植物細胞農桿菌轉化法將目的基因插入農桿菌Ti質粒的T?DNA上→轉入農桿菌→用農桿菌侵染植物細胞→將目的基因整合到植物細胞染色體的DNA上→目的基因表達經濟、有效,適用于雙子葉植物和裸子植物,尤其適用于雙子葉植物花粉管通道法在植物受粉后,花粉形成的花粉管還未愈合前,剪去柱頭→滴加DNA(含目的基因),使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞→目的基因表達簡便、經濟,我國科學家獨創的一種方法動物細胞顯微注射技術將含有目的基因的表達載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→注射了目的基因的受精卵,經胚胎早期培養后,移植到雌性動物的輸卵管或子宮內→獲得具有新性狀的動物將目的基因導入動物細胞最為有效的方法微生物細胞Ca2+處理法(感受態細胞法)用Ca2+處理微生物細胞→感受態細胞→將基因表達載體與感受態細胞混合→在一定溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子簡便、經濟、有效到社會中去轉基因抗蟲棉在世界范圍內被廣泛種植,有效控制了棉鈴蟲的種群數量,顯著減少了農藥的用量。面對棉鈴蟲的危害,有了抗蟲棉是否就可以一勞永逸、高枕無憂呢?根據棉鈴蟲對傳統農藥產生抗性的發展歷史,科研人員推測棉鈴蟲存在對Bt抗蟲蛋白產生抗性的可能。請你查閱資料,了解以下問題。1.在實際種植過程中,棉鈴蟲是否對轉Bt基因的抗蟲棉產生了嚴重的抗性?證據是什么?2.科研工作者在沒有發現棉鈴蟲出現抗性之前,就應該想辦法應對。他們想出的延竣棉鈴蟲對Bt抗蟲蛋白產生抗性的措施有哪些?這些措施的原理是什么?有效嗎?提示:1.這是一個開放性的問題,需要學生在找資料來回答。隨著田向監測數據的更新及新的科研論文發表,每年學生獲得的證據是不樣的。例如,科研人員對長江流城種植的轉基因抗蟲棉進行了監測2011年的數據顯示,大部分轉基因抗蟲棉品種的抗蟲性屬于中抗及高抗水平;2013年的數據表明,如果棉田周圍存在大量天然庇護所,靶標害蟲格鈴蟲、紅鈴蟲等井未對轉Bt基因的抗蟲棉產生明顯抗性。在我國、澳大利亞、印度連國的多個實驗室中,通過毒素的連續抗性篩選,已經培育出多個高抗水平的轉基因抗蟲棉品種。教師要注意引導學生搜集科學、可靠的證據,如科研論文、權威的官方報道等。2.科研人員想出的延緩棉鈴蟲對Bt抗蟲蛋白產生抗性的措施有很多,主要可以分為以下幾個方面。(1)基因策略;(2)田間策略;(3)國家宏觀調控策略。總結和練習1.下列關于目的基因導入受體細胞的描述,不正確的是( A )A.培育“黃金大米”可用花粉管通道法導入目的基因B.顯微注射技術是轉基因動物中采用最多的方法C.目的基因導入大腸桿菌最常用的方法是Ca2+處理法D.農桿菌轉化法是將目的基因導入植物細胞最常用的方法 提示:水稻的花很小,不適合用花粉管通道法導入目的基因,A錯誤;將目的基因導入動物細胞常用顯微注射法,B正確;將目的基因導入微生物細胞最常用的方法是用Ca2+處理大腸桿菌,使其處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的狀態,C正確;將目的基因導入植物細胞最常用的方法是農桿菌轉化法,此外還有基因槍法和花粉管通道法,D正確。2.農桿菌侵染植物細胞后,能將Ti質粒上的T?DNA插入植物基因組中。圖示為利用農桿菌培育轉基因植物的基本流程,請據圖回答:(1)剪除Ti質粒的某些片段、替換復制原點O與添加抗生素的抗性基因T的過程①中,需用多種限制酶處理,原因是_______________,需用________“縫合”雙鏈DNA片段的平末端。(2)目的基因是指________。由過程②形成的基因表達載體中,目的基因的上游具有________,它是________識別和結合的部位。(3)過程③常用________處理使農桿菌成為感受態細胞。抗生素抗性基因T的作用是________________________________。(4)可通過________技術檢測試管苗的染色體DNA上是否插入了目的基因。[解析] (1)Ti質粒具多種限制酶切割位點,不同的限制酶識別并切割不同的堿基序列。連接平末端應選用T4DNA連接酶。(2)目的基因主要是指編碼蛋白質的基因。目的基因的首端具有啟動子,以便于RNA聚合酶識別和結合。(3)過程③常采用Ca2+(CaCl2溶液)處理農桿菌,以增大農桿菌細胞壁的通透性。抗生素抗性基因T用于檢測受體細胞中是否含有基因表達載體。(4)檢測農桿菌和愈傷組織細胞中是否有目的基因常采用PCR技術。[答案] (1)不同的限制酶識別并切割不同的堿基序列T4DNA連接酶(2)編碼蛋白質的基因 啟動子 RNA聚合酶(3)Ca2+(CaCl2溶液) 用于鑒定和篩選導入了基因表達載體的農桿菌(4)PCR【學習活動一】學生閱讀課本P76—77,帶著問題,閱讀課文,回答問題。1.轉基因抗蟲棉抗蟲的機制是什么嗎?培育轉基因抗蟲棉一般需要哪些步驟?2.基因工程的基本操作程序主要包括哪幾個步驟?3.基因工程操作的每一步涉及的技術和方法有哪些?閱讀教材,提取相關信息,完成表格。【學習活動三】學生閱讀P80,分析基因表達載體的構建。小組討論,完成相關探究,解決實驗相關問題。【學習活動三】學生閱讀P49—50,了解單克隆抗體制備及應用過程。閱讀教材,提取相關信息,完成表格。小組討論,聯系社會熱點問題,完成相關探究,解決相關問題。根據所學,完成相關練習創設問題情景,導入新課。通過閱讀,培養學生獲取信息的能力,加深學生對概念的認識,激發學生的科學研究的興趣。通過完成表格,培養學生獲取信息的能力,鍛煉學生的語言表達能力,提高學生分析問題,解決問題的能力。通過閱讀,培養學生獲取信息的能力,理解并闡述基因表達載體的構建。提出一個問題比解決一個問題更重要,此環節可以讓學生思考真正發生,讓更多的學生參與到課堂中。通過閱讀,培養學生獲取信息的能力,理解并闡述目的基因導入受體細胞。分析對比表格中相關信息,培養學生獲取信息的能力,鍛煉學生的語言表達能力,提高學生分析問題,解決問題的能力。通過社會熱點問題探究,培養學生溝通、交流能力,增強團隊合作意識,同時聯系實際,解決實際問題,發展學生分析、推理思維能力。回顧舊知,鞏固和應用所學知識。課堂小結1.基因工程的基本操作程序有:(1)目的基因的篩選與獲取;(2)基因表達載體的構建;(3)將目的基因導入受體細胞;(4)目的基因的檢測與鑒定。2.PCR反應液中需要提供DNA模板、分別與兩條模板鏈結合的2種引物、4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶。3.PCR反應中每次循環一般可分為變性、復性、延伸三步。4.基因表達載體的構建是基因工程的核心,基因表達載體是載體的一種,除了目的基因外,它還必須有啟動子、終止子以及標記基因等。5.將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法和花粉管通道法。6.將目的基因導入動物細胞常用顯微注射技術,導入微生物細胞常用感受態細胞法(Ca2+處理法)。板書基因工程的基本操作程序1.目的基因的篩選和獲得篩選合適目的基因、PCR、2.基因表達載體的構建目的基因、標記基因、啟動子、終止子3.將目的基因導入受體細胞4.目的基因的檢測和鑒定21世紀教育網www.21cnjy.com精品試卷·第2頁(共2頁)HYPERLINK"http://www.21cnjy.com/"21世紀教育網(www.21cnjy.com) 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