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選擇性必修三第一章第2節(jié)
微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)導(dǎo)學(xué)案
【學(xué)習(xí)目標(biāo)】
1闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。
2闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品與無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。
3概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。
【重點(diǎn)難點(diǎn)】
討論并掌握微生物的純培養(yǎng)的方法。

【訓(xùn)練案】
【訓(xùn)練目標(biāo)】
1掌握測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。
2.根據(jù)微生物的代謝類型配制選擇培養(yǎng)基。
3.壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的方法。
1．用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用和培養(yǎng)基是否被污染需要設(shè)置的對(duì)照組分別是（ ）
A．接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
B．未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
C．未接種的該選擇培養(yǎng)基
D．接種了的該選擇培養(yǎng)基
2．下表是某同學(xué)配制的一種培養(yǎng)基配方，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
成分
蛋白胨
乳糖
K2HPO4
伊紅
美藍(lán)
瓊脂
含量（g）
10．0
5．0
2．0
0．4
0．065
12．0
將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000ml
A．若根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基
B．若用該培養(yǎng)基篩選土壤中的尿素分解菌，應(yīng)將蛋白胨改成尿素
C．在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的大腸桿菌，其菌落顏色呈紅色
D．該培養(yǎng)基中含有維生素，若培養(yǎng)霉菌需將pH調(diào)至中性或微堿性
3．科學(xué)家利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株A、B，在缺乏A、B所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，結(jié)果如下圖所示。下列敘述不正確的是（ ）
A．各組實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基均需滅菌處理
B．菌株A、B混合后能在上述培養(yǎng)基上生長(zhǎng)
C．U型管實(shí)驗(yàn)證明菌株A、B釋放的代謝產(chǎn)物形成了互補(bǔ)
D．推測(cè)菌株A、B通過(guò)接觸發(fā)生了遺傳物質(zhì)重新組合
4．巴氏殺菌乳是以生牛（羊）乳為原料，經(jīng)巴氏殺菌等工序制得的液體產(chǎn)品，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB19645-2010）每毫升合格巴氏殺菌乳中細(xì)菌總數(shù)不得超過(guò)50000個(gè)。某興趣小組進(jìn)行了新鮮牛奶合適的消毒溫度的探究，相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作不合理的是（ ）
A．配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基并在121℃、100kPa條件下處理15～30min
B．將等量的新鮮牛奶分別置于60℃、70℃、80℃、90℃恒溫水浴鍋中處理15min
C．對(duì)處理后的牛奶進(jìn)行梯度稀釋后，利用涂布法接種平板并在37℃下培養(yǎng)24h
D．統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基上全部菌落數(shù)，以菌落數(shù)最少組的處理溫度作為最適消毒溫度
5．某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是（ ）
A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌
B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)并冷卻后再進(jìn)行劃線
C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
D．培養(yǎng)過(guò)程中每隔一周觀察一次
6．細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒、干熱滅菌等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺死哪些部位的雜菌（ ）
A．接種環(huán)、手、培養(yǎng)基、涂布器 B．高壓鍋、手、接種環(huán)、培養(yǎng)基
C．培養(yǎng)基、手、接種環(huán)、吸管 D．接種環(huán)、手、高壓鍋、培養(yǎng)皿
7．如圖所示為實(shí)驗(yàn)室使用某種接種方法在培養(yǎng)基上培養(yǎng)某種微生物的結(jié)果。下列相關(guān)說(shuō)法正確的是（ ）
A．該圖最可能是用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種的
B．在操作時(shí)，為防止雜菌污染，需進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和滅菌
C．該種微生物有可能是新冠病毒COVID-19
D．該培養(yǎng)基上的菌落分布不均勻，代表純化失敗
8．細(xì)菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素進(jìn)行治療。當(dāng)細(xì)菌出現(xiàn)耐藥性時(shí)，療效下降。金黃色葡萄球菌（SAU）是細(xì)菌性肺炎的病原體之一。A、B、C、D四種抗生素均可治療SAU引起的肺炎。為選出最佳療效的抗生素，研究者分別將含等劑量抗生素A、B、C、D四張大小相同的濾紙片a、b、c、d置于SAU均勻分布的平板培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)48h，結(jié)果如圖。下列相關(guān)敘述不正確的是（ ）
A．可選擇牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，對(duì)SAU菌種進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)
B．對(duì)實(shí)驗(yàn)使用的培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌，可以采用干熱滅菌的方法
C．A、B、C、D四種抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素D
D．濾紙片b周圍透明圈中出現(xiàn)一菌落，可能是該菌落發(fā)生了基因突變
9．不同的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營(yíng)養(yǎng)的描述中，不正確的是（　　）
A．氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素??????????????????
B．碳源物質(zhì)也為該微生物提供能量
C．無(wú)機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
D．水是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一
10．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，無(wú)菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌污染展開。請(qǐng)分析下列操作中錯(cuò)誤的是（ ）
A．倒平板后，對(duì)空白培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，可檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染
B．接種箱或超凈工作臺(tái)在使用過(guò)程中，可用紫外線照射30min，進(jìn)行消毒
C．若培養(yǎng)皿蓋和培養(yǎng)皿底之間濺有培養(yǎng)基，則不宜用此培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌
D．高壓蒸汽滅菌時(shí)，不能直接關(guān)閉排氣閥進(jìn)行加熱滅菌
11．微生物培養(yǎng)過(guò)程中，要十分重視無(wú)菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止雜菌污染。下列無(wú)菌操作錯(cuò)誤的是（ ）
A．接種時(shí)培養(yǎng)皿蓋只打開一條縫隙
B．菌種和培養(yǎng)基使用前均需滅菌處理
C．接種前、后都要過(guò)火灼燒斜面菌種試管口
D．高壓蒸汽滅菌既能殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)體，也能殺死芽孢等休眠體
12．某桿菌只有在含蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉和微量維生素的培養(yǎng)基中才能生長(zhǎng)，此時(shí)微量維生素對(duì)該菌的培養(yǎng)而言屬于（ ）
A．碳源 B．氮源 C．激素 D．特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
13．最新調(diào)查顯示手機(jī)每平方厘米就駐扎了12萬(wàn)個(gè)細(xì)菌，這個(gè)數(shù)字足以令馬桶坐墊上的細(xì)菌隊(duì)伍汗顏。某生物興趣小組的同學(xué)，利用手機(jī)表面的細(xì)菌進(jìn)行了相關(guān)的培養(yǎng)研究。
（1）培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基一般含有的成分有_____，另外還需滿足pH、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及對(duì)氧氣的需求。
（2）若想獲取不同菌的菌落形態(tài)，需要固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基配置的基本步驟有：計(jì)算稱量、溶化、滅菌、倒平板。上述操作完成待培養(yǎng)基冷卻凝固后需將平板倒置，這樣做的目的是_____。
（3）為研究手機(jī)表面微生物的種類，用稀釋涂布平板法進(jìn)行細(xì)菌的純化和分離。下面的四種菌落分布情況中，哪些選項(xiàng)是通過(guò)稀釋涂布平板法得到的_____
（4）研究小組用瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定玫瑰精油對(duì)手機(jī)表面細(xì)菌的抑制情況。該方法的操作步驟如下：首先制備牛肉膏蛋白胨平板，用涂布器將5種細(xì)菌分別接種到5個(gè)平板上，得到細(xì)菌平板。然后制備直徑為5mm 的濾紙圓片，采用_____滅菌法處理，將滅菌的濾紙片部分放入適宜濃度的玫瑰精油中，對(duì)照組放入_____中，浸泡10min，后將濾紙片放在5個(gè)細(xì)菌平板表面。最后將平板放入恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)。通過(guò)測(cè)量_____來(lái)檢測(cè)玫瑰精油對(duì)5種細(xì)菌的抑制效果。
14．飲用水安全關(guān)乎生命健康。某興趣小組檢驗(yàn)城市自來(lái)水是否達(dá)標(biāo)進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題：
（1）甲同學(xué)用涂布平板法檢測(cè)大腸桿菌數(shù)：配制的培養(yǎng)基中含有蛋白胨、酵母膏、NaCl、 H2O 和 X ，其中蛋白胨可為大腸桿菌提供_______和維生素， X 是___________。
（2）乙同學(xué)用濾膜法檢測(cè)大腸桿菌數(shù)：用濾膜將已知體積的水過(guò)濾后放在 ___________培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上大腸桿菌菌落呈現(xiàn)_____色。該方法所統(tǒng)計(jì)樣品中含菌數(shù)往往偏低的原因是_____。
（3）丙同學(xué)檢測(cè)水樣中的細(xì)菌總量時(shí)，先隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是_______。接種后，需要將平板______（填“正置”或“倒置”）培養(yǎng)。統(tǒng)計(jì)菌落總數(shù)時(shí)，也可以根據(jù)__________對(duì)菌種進(jìn)行初步的鑒定。
15．隨著全球石化資源的日益枯竭，多渠道開發(fā)可再生油脂資源受到重視。科研人員發(fā)現(xiàn)少數(shù)微生物能將碳水化合物、碳?xì)浠衔锖推胀ㄓ椭诰w內(nèi)轉(zhuǎn)化為油脂，利用微生物生產(chǎn)油脂是一條開發(fā)新油源的好途徑。
（1）在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí) __________其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱做________培養(yǎng)基。
（2）將土壤懸濁液置于以甘油為唯一碳源的培養(yǎng)基上進(jìn)行富集培養(yǎng)產(chǎn)油酵母菌。富集培養(yǎng)的目的是____________________；進(jìn)入菌體內(nèi)的甘油的主要作用是______________________________（答出兩點(diǎn)即可）。
（3）準(zhǔn)確移取0．1 mL富集培養(yǎng)液，采用____________________（填方法）接種于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)2～4 d，挑取平板上菌落形態(tài)有差異的單菌落進(jìn)行分離純化。分別挑取不同菌落置于載玻片上，涂片、加熱固定，用蘇丹Ⅲ染液染色，顯微鏡下觀察，若酵母菌細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)________（填現(xiàn)象），則說(shuō)明酵母菌細(xì)胞中已有脂肪積累。
（4）為獲取油脂，科研人員進(jìn)行如下操作：
①將獲得的高產(chǎn)產(chǎn)油酵母菌置于10 mL 4 mol/L的鹽酸中，浸泡過(guò)夜，沸水浴15～20 min。此步驟的目的是____________。
②將步驟①得到的液體冷卻后加入10 mL氯仿，充分振蕩后離心，取氯仿層，之后經(jīng)過(guò)處理得到油脂。采用氯仿進(jìn)行萃取的原理是____________________。
參考答案
1．AC
2．ACD
3．C
4．D
5．B
6．C
7．B
8．C
9．B
10．B
11．B
12．D
13．水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽 防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快的揮發(fā) ABC 干熱 無(wú)菌水 透明圈的直徑（大小）
14．碳源、氮源 瓊脂 伊紅美藍(lán) 黑 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 檢驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌（或制備）是否合格 倒置 菌落特征
15．阻止或抑制 選擇 增加產(chǎn)油酵母菌數(shù)量 為酵母菌的生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料 稀釋涂布平板法 橘黃色 破碎細(xì)胞，釋放細(xì)胞中的物質(zhì) 油脂易溶于氯仿，且與水不互溶

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