資源簡介

(共25張PPT)
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降價超一半17種抗癌藥納入醫(yī)保西妥昔單抗注射液降3000元
2.2
動物細(xì)胞工程
2.2.2
動物細(xì)胞融合與單克隆抗體
必修一P67
思考：
（1）該實驗可以說明________________。
（2）該實驗使用的研究方法是__________。
（3）誘導(dǎo)兩種動物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)劑是______。
細(xì)胞膜具有流動性
熒光蛋白標(biāo)記法
聚乙二醇PEG
滅活的病毒
突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。
一、動物細(xì)胞融合
1.概念：
動物細(xì)胞融合（cell
fusion）也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。
融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。
2.融合過程：
取不同DNA的兩個細(xì)胞
滅活的病毒誘導(dǎo)
細(xì)胞融合
雜交細(xì)胞
3.誘導(dǎo)方法：
物理法：
化學(xué)法：
生物法：
滅活的病毒
電激等
聚乙二醇（PEG)等
一、動物細(xì)胞融合
5.意義：
克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。
6.應(yīng)用：
成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段；
特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體
4.原理：
細(xì)胞膜的流動性
植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的比較
比較項目
植物體細(xì)胞雜交
動物細(xì)胞融合
融合原理
融合前的處理
使用的酶
誘導(dǎo)方法
主要用途
細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性
細(xì)胞膜的流動性
纖維素酶、果膠酶
胰蛋白酶或膠原蛋白酶
物理(離心、振蕩、
電刺激)、化學(xué)(聚乙二醇)
物理、化學(xué)方法(同左)
滅活的病毒
獲得雜種植株
制備單克隆抗體
去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合
使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合
分冊二P43-44
二、單克隆抗體
思考
？
①什么是抗體？
②抗體如何產(chǎn)生？
③用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？有什么缺陷？
抗體是機(jī)體受____物質(zhì)刺激，由____細(xì)胞產(chǎn)生的，能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的______。
抗體
抗原
B細(xì)胞
刺激
增殖
分化
漿細(xì)胞
分泌
把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體的方法。
缺陷：純度低、產(chǎn)量低、特異性差。
抗原
漿
球蛋白
1、設(shè)計方案：
1975年，米爾斯坦和科勒的實驗方案：
是指化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。
二、單克隆抗體
單克隆抗體制備過程
◆
利用_____________產(chǎn)生特異性抗體的功能。
◆
利用____________無限增殖的特性。
◆
利用_____________技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞。
◆
利用____________技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。
B淋巴細(xì)胞
骨髓瘤細(xì)胞
動物細(xì)胞融合
動物細(xì)胞培養(yǎng)
B淋巴細(xì)胞間的融合、
骨髓瘤細(xì)胞間的融合
B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞間的融合形成的雜交瘤細(xì)胞
骨髓瘤細(xì)胞
單克隆抗體
篩選
克隆、篩選
體內(nèi)培養(yǎng)
注射到小鼠腹腔
體外培養(yǎng)
B淋巴細(xì)胞
(選擇培養(yǎng)基)
(專一抗體
檢驗陽性)
細(xì)胞融合
雜交細(xì)胞
2、制備過程：
特異性強(qiáng)，靈敏度高，并且可以大量制備
免疫小鼠
1)本過程利用了哪些原理或技術(shù)？
2)為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？
思考：
免疫學(xué)原理、細(xì)胞融合原理、動物細(xì)胞培養(yǎng)原理
這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B淋巴細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。
3)整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?
思考：
第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞。
第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。
3.單克隆抗體的應(yīng)用
二、單克隆抗體
3.單克隆抗體的應(yīng)用
與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體的優(yōu)點是特異性強(qiáng)，靈敏度高，并且可以大量制備。
二、單克隆抗體
（1）作為診斷試劑：這是單克隆抗體最廣泛的用途，具有______________________的優(yōu)點。
（2）用于治療疾病和運載藥物：
在臨床上主要用于癌癥治療。
運用藥物與單克隆抗體連接在一起制成“生物導(dǎo)彈”
準(zhǔn)確、高效、簡易、快速
細(xì)胞工程
植物組織培養(yǎng)
植物體細(xì)胞雜交
動物細(xì)胞培養(yǎng)
動物細(xì)胞核移植
動物細(xì)胞融合
單克隆抗體
作業(yè)：寫出細(xì)胞工程6項技術(shù)的流程圖
植物細(xì)胞工程
動物細(xì)胞工程
植物體細(xì)胞雜交技術(shù)知識延伸：
細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞壁的成分、
參與新細(xì)胞壁形成的細(xì)胞器
植物組織培養(yǎng)技術(shù)知識延伸：
植物的激素調(diào)節(jié)：
有絲分裂過程
細(xì)胞分裂素、生長素
植物細(xì)胞的增殖：
基因選擇性表達(dá)
植物細(xì)胞的分化：
動物細(xì)胞培養(yǎng)知識延伸：
細(xì)胞株、細(xì)胞系的本質(zhì)理解
內(nèi)環(huán)境的組成成分和理化性質(zhì)
癌細(xì)胞的特點
單克隆抗體知識延伸：
抗原和抗體
免疫系統(tǒng)和免疫過程
例1、人絨毛膜促性腺激素(HCG)是女性懷孕后胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，制備抗HCG單克隆抗體可用于早孕的診斷。下圖是抗HCG單克隆抗體制備流程示意圖，請分析回答問題。
(1)制備單克隆抗體過程中要用到_____________和________________技術(shù)。
(2)制備單克隆抗體過程中，給小鼠注射的HCG相當(dāng)于________，使小鼠產(chǎn)生分泌相應(yīng)________的淋巴細(xì)胞，此過程屬于特異性免疫中的________免疫。
動物細(xì)胞培養(yǎng)
動物細(xì)胞融合
抗原
抗體
體液
例1、人絨毛膜促性腺激素(HCG)是女性懷孕后胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，制備抗HCG單克隆抗體可用于早孕的診斷。下圖是抗HCG單克隆抗體制備流程示意圖。
(3)在細(xì)胞內(nèi)DNA的合成一般有兩條途徑，主途徑是在細(xì)胞內(nèi)由糖和氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻斷此途徑。另一輔助途徑是在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情況下，經(jīng)酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤細(xì)胞的DNA合成沒有此輔助途徑。
①利用DNA合成途徑不同的特點配制的HAT培養(yǎng)基含有多種成分，其中添加的_________成分具有篩選雜交瘤細(xì)胞的作用。
②最終篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞的特點是_____________。
(4)此過程生產(chǎn)的單克隆抗體可以與____________特異性結(jié)合，從而診斷早孕。
人絨毛膜促性腺激素(或“HCG”)
氨基嘌呤
能無限增殖
并分泌特異性抗體
例2.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體的實驗方案
2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？
4、圖中B為___________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞既能__________,又能__________。
1、該實驗方案的目的是__________
3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______
5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。
制備單克隆抗體
B淋巴細(xì)胞
抗體
動物細(xì)胞融合
滅活病毒
分泌抗體
無限增殖
原代
傳代
50
B
體外培養(yǎng)
骨髓瘤細(xì)胞
雜交瘤細(xì)胞
足夠數(shù)量的細(xì)胞群
注射到
小鼠腹腔
A
C
不能。沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得單一抗體的B淋巴細(xì)胞
例3.A、B細(xì)胞為動物細(xì)胞,請據(jù)圖回答問題:
(1)若A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞,B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞,那么D細(xì)胞稱為
細(xì)胞,D細(xì)胞具有兩個親本細(xì)胞的特征,一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的
性質(zhì),通過
方式產(chǎn)生大量細(xì)胞,我們稱之為
過程;另一方面能分泌大量的抗體,我們把該過程分泌的抗體稱
.
雜交瘤
連續(xù)分裂
有絲分裂
單克隆
單克隆抗體
(2)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是
,合成該物質(zhì)的場所是
,它是由
控制合成的,合成過程包括
和
兩個重要步驟.
球蛋白
核糖體
基因
轉(zhuǎn)錄
翻譯
例3.A、B細(xì)胞為動物細(xì)胞,請據(jù)圖回答問題:
(3)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有
作用,與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于
強(qiáng),
高.
免疫
特異性
靈敏度
(4)若A為人細(xì)胞,B為鼠細(xì)胞,用同位素標(biāo)記A細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì),B不標(biāo)記,在C細(xì)胞時,檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個細(xì)胞一半有放射性另一半沒有.在D細(xì)胞時,檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個細(xì)胞都有放射性,請解釋原因
.
構(gòu)成細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)分子大都可以流動

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